水稻碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白家族功能研究进展

碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)是一类重要的转录调控因子,广泛存在于真核生物中,因含有高度保守的bZIP结构域而得名。bZIP结构域由紧密相邻的碱性区域和亮氨酸拉链区域两部分组成。粳稻基因组中注释有89个bZIP基因,其中45个已得到功能验证,它们参与调节水稻生长发育、生物与非生物胁迫应答,包括种子休眠和萌发、成花转变、光形态建成,以及胁迫和激素信号通路等。

碱性亮氨酸拉链和W2结构域2对子宫内膜癌细胞生物学行为的作用及机制

目的 探讨碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及细胞周期的调控作用及其潜在作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测BZW2在人子宫内膜基质细胞系ESC和人子宫内膜癌细胞(Ishikawa、KLE、RL95-2、HEC-1-A)中的表达。将BZW2干扰质粒转染至HEC-1-A细胞,并加入Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路激动剂SKL2001进行处理。采用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞活性、克隆形成、迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞周期;采用GSEA分析BZW2在Wnt信号通路中的富集度;采用Western blot分析增殖、转移、周期及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 BZW2在子宫内膜癌细胞中表达上调,干扰BZW2可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导G0/G1期细胞阻滞(P<0.001)。敲低BZW2可使Wnt/β-catenin通路失活(P<0.001), SKL2001可部分逆转BZW2缺失对HEC-1-A细胞增殖、迁移、侵袭及细胞周期的调控作用(P<0.001)。结论 BZW2下调可抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移,并促进G_(0)/G_(1)期细胞阻滞,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路失活有关,BZW2可作为治疗子宫内膜癌的新靶点。

植物碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白的研究进展(一)——结构、分类、分布和同源性分析

植物碱性亮氨酸拉链 (bZIP)蛋白在高等植物中广泛存在 ,对基因表达与调控起重要作用。本文简要介绍了植物bZIP蛋白的结构之后 ,概述了植物bZIP蛋白的分类和分布。最后 ,以模式植物、主要农作物及蔬菜等为例 ,对它们的同源性进行了详细的描述和分析。

植物碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白的研究进展(二)——DNA结合特性、基因表达、功能及应用

植物碱性亮氨酸拉链 (bZIP)蛋白在高等植物基因表达与调控中起重要作用。本文介绍了植物bZIP蛋白与DNA结合特性 ,探讨了它们的基因表达和功能 。

碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子在肾透明细胞癌预后和免疫浸润细胞中的潜在价值

目的探究碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子(the basic leucine zipper ATF-like transcription factor,BATF)在肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)进展中的作用。方法通过UALCAN、TISIDB、Kaplan-Meier plotter、OncoLnc及Sangerbox数据库分析BATF在KIRC的表达及其预后和免疫中的作用。结果BATF在KIRC组织中的表达水平显著升高,且与较差的总体生存期相关。BATF过表达与KIRC病人肿瘤分期、组织学亚型和淋巴结转移显著相关。KIRC组织中BATF的甲基化水平与肿瘤分期、分级及淋巴结转移呈负相关关系。BATF过表达与KIRC免疫浸润B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞和树突细胞水平呈正相关关系。结论BATF在KIRC中高表达。BATF高表达与KIRC病人预后不良相关,且与KIRC免疫浸润细胞相关,表明BATF有望作为判断KIRC预后不良的生物标志物和免疫相关标记分子。

碱性亮氨酸拉链转录因子的翻译后修饰在植物响应非生物胁迫中的作用

非生物胁迫是植物生长发育过程中必须要应对的不利环境因素。在进化过程中,植物获得了多种响应或抵抗逆境的能力,其中转录因子在调控非生物胁迫耐受性方面起到了重要作用。碱性亮氨酸拉链转录因子(basic leucine zipper transcription factors,bZIP)是转录因子中较大的基因家族之一。不同的翻译后修饰(post-translational modifications,PTMs)可以控制bZIP转录因子的稳定性和活性,响应各种细胞内或细胞外胁迫。本文介绍了bZIP转录因子的结构特征与分类,重点综述了bZIP转录因子磷酸化、泛素化和小泛素相关修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)化等翻译后修饰在植物响应非生物胁迫中的作用,并对未来的研究方向进行了展望,为通过调控bZIP转录因子的翻译后修饰培育优良抗逆作物品种提供研究参考。

碱性亮氨酸拉链ATF样蛋白调控结核免疫发病机制的初步研究

目的探讨碱性亮氨酸拉链ATF样蛋白（BATF）在结核中的免疫调控作用和机制，为结核的诊断和治疗提供线索。方法纳入16例活动性肺结核患者，10例潜伏性结核感染者和14名健康对照者。应用流式细胞术检测3组人群外周血T淋巴细胞BATF和程序性死亡受体-1（PD-1）的表达，分别用PD-1、PD-L1和PD-L2特异性抗体阻断PD-1/程序性死亡受体配体（PD-L）通路，检测活动性肺结核患者外周血中BATF表达的变化。两组之间比较采用Mann-Whitney U检验，Pearson相关性分析研究表达BATF的T淋巴细胞比例和表达PD-1的T淋巴细胞比例之间的关系。结果活动性结核组表达BATF的CD4＋ T淋巴细胞占CD4＋ T淋巴细胞的5.16%（2.96%，8.71%），高于潜伏性结核感染组的1.05%（0.40%，1.27%）和健康对照组的0.71%（0.43%，1.21%），差异均有统计学意义（U值分别为6.5和9.0，均P〈0.01）；活动性结核组表达BATF的CD8＋ T淋巴细胞占CD8＋ T淋巴细胞的4.10%（2.27%，8.17%），高于潜伏性结核感染组的0.55%（0.34%，1.18%）和健康对照组的0.84%（0.41%，1.29%），差异均有统计学意义（U值分别为5.0和8.0，均P〈0.01）。活动性结核组BATF＋ PD-1＋ CD4＋ T淋巴细胞占CD4＋ T淋巴细胞的比例均高于潜伏性结核感染组和健康对照组，差异均有统计学意义（U值分别为16.0和14.5，均P〈0.01）；且BATF＋ PD-1＋ CD8＋ T淋巴细胞占CD8＋ T细胞的比例也均高于潜伏性结核感组和健康对照组，差异均有统计学意义（U值分别为10.0和16.5，均P〈0.01）。活动性结核患者外周血中表达BATF的CD4＋ T淋巴细胞比例与表达PD-1的CD4＋ T淋巴细胞比例呈正相关（r＝0.676，P＝0.016），与CD8＋ T淋巴细胞比例亦呈正相关（r＝0.610，P＝0.035）。阻断活动性结核患者PD-1/PD-L通路后BATF在CD4＋和CD8＋ T淋巴细胞中的表达有所下降。结论BATF可能是PD-1/PD-L通路参与结核免疫负性调控的重要分子，进一步研究其在结核中的作用机制，可以对研究以BATF为靶点的新型抗结核免疫治疗提供理论依据。

BATF2在胃癌组织中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系

目的 探讨碱性亮氨酸拉链转录因子2(basic leucine zipper ATF-like transcription factor 2,BATF2)在胃癌组织中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法 收集我院2016年6月至2017年11月134例胃癌患者手术切除的胃癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR法测定BATF2的mRNA表达,免疫组化法检测BATF2蛋白表达。分析胃癌患者BATF2表达与临床病理特征间的关系。采用Cox回归分析胃癌患者预后影响因素,Kaplan-Meier法分析BATF2表达与患者预后的关系。结果 胃癌组织中BATF2 mRNA和蛋白表达均显著低于癌旁组织(P<0.05),淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、细胞浸润程度为T_(3)~T_(4)、细胞分化程度为低分化的胃癌患者BATF2蛋白阳性表达比例显著低于淋巴结未转移、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、细胞浸润程度为T_(0)~T_(2)、细胞分化程度为中/高分化的患者(P<0.05)。多因素Cox分析结果表明,淋巴结转移、TNM分期、细胞分化程度、BATF2是胃癌患者预后、复发或死亡的影响因素(P<0.05);Kaplan-Meier法分析结果表明,胃癌患者5年内预后良好率为74.63%(100/134),BATF2高表达患者5年预后良好率(93.33%)显著高于BATF2低表达患者(69.23%)(χ~2=6.445,P<0.05)。结论 BATF2表达与胃癌患者临床病理特征具有密切关系,是胃癌患者复发或死亡的影响因素,BATF2表达上调可能提高胃癌患者生存率。

BZW1高表达促进胃癌细胞的侵袭和转移:基于调控Wnt//β-catenin通路和促进上皮间质转化

目的明确碱性亮氨酸拉链蛋白1(BZW1)在胃癌中的表达情况,并探讨其对胃癌患者预后的影响及其可能的作用机制。方法分别采用TIMER、UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库分析BZW1在胃癌组织中的表达情况,与肿瘤分级、分期之间的相关性及对患者预后的影响。纳入2014年1月~2016年12月在我院行胃癌根治术的102例患者,分析BZW1在胃癌组织中的表达水平、对胃癌疾病进展和患者术后5年生存率的影响。体外采用慢病毒转染的方式构建上调和下调BZW1表达的胃癌细胞系(MGC803),分析BZW1对MGC803细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的作用。采用KEGG富集分析预测BZW1在胃癌中的可能作用机制,并进一步采用Western blot实验进行体外验证。结果生物信息学分析结果显示,BZW1在胃癌和癌旁组织中的表达量差异有统计学意义(P<0.01),免疫组化和RT-qPCR结果显示,BZW1在胃癌组织中的蛋白和mRNA表达水平分别是癌旁组织的3.30倍和6.54倍(P<0.01);胃癌组织中BZW1的表达水平与外周血CEA和CA199水平呈正相关(P<0.01);单因素结合Cox多元回归模型分析证实BZW1高表达(P<0.05,HR=2.070,95%CI:1.021~4.196)是影响胃癌患者根治术后5年生存率的独立危险因素;以BZW1相对表达量3.61为截点值,预判术后5年死亡的敏感性为75.56%,特异性为71.93%(P<0.01)。Transwell实验显示,上调BZW1可促进MGC803细胞的迁移和侵袭(P<0.05),下调则相反(P<0.05)。Western blot实验发现,上调BZW1可促进MGC803细胞N-cadherin与Vimentin的表达(P<0.05),并抑制E-cadherin的表达(P<0.05),下调则反之(P<0.05)。富集分析显示,BZW1生物功能可能与Wnt//β-catenin信号相关。Western blot实验进一步证实,上调BZW1可促进Wnt3a、β-Catenin及C-myc的表达(P<0.05),而下调则相反(P<0.05);使用Wnt通路抑制剂XAV-939可显著削弱上调BZW1对MGC803细胞中EMT关键分子的蛋白N-cadherin、Vimentin及E-cadherin的调控作用(P<0.05)。结论BZW1在胃癌组织中高表达并影响患者预后,可能与调控Wnt/β-catenin信号促进胃癌细胞EMT进程相关。

bZIP转录因子在植物逆境胁迫响应和生长发育中的作用

bZIP作为植物中最大的转录因子家族之一,在植物逆境胁迫响应和生长发育中发挥重要作用。该类转录因子具有大约由60-80个氨基酸组成的较为保守的结构域,包括一个高度保守的碱性区域和一个相对多变的亮氨酸拉链区域。bZIP通过同源或异源二聚体形式与靶基因启动子中含有ACGT核心的DNA序列进行特异性结合,从而调控靶基因的表达。在植物受到激素等信号刺激后,上游信号响应激酶将会进行bZIP磷酸化;bZIP也通过磷酸化来增强自身稳定性。在逆境胁迫(如干旱、盐分、温度、光、重金属和病原菌等)条件下,bZIP与胁迫相关基因启动子区域结合以及与其他蛋白互作来促进或抑制靶基因的表达,从而正向或负向调控植物响应逆境胁迫。另外,bZIP参与植物生长发育过程中许多物质(如花青素、萜类、黄酮类、生物碱等)的合成和代谢,并且介导调节脱落酸、水杨酸和茉莉酸等激素信号通路。本文就bZIP转录因子发现、结构、分类、调控方式及其在植物逆境胁迫响应和生长发育中的作用等方面研究成果加以综述,并对其未来研究方向进行展望,为农作物抗逆性遗传改良提供理论依据和技术支撑。

lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进喉乳头状瘤细胞的增殖和凋亡逃逸

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)对喉乳头状瘤(LP)细胞的增殖和凋亡逃逸的调控作用和机制。方法培养人喉乳头状瘤细胞Hs840.T,将正常人口腔上皮细胞(HOECs)作为对照。将Hs840.T分为lncRNA NEAT1过表达载体(pcDNA-NEAT1)组、pcDNA-NEAT1阴性对照(pcDNA-NC)组、沉默lncRNA NEAT1的小干扰RNA载体(siNEAT1)组、siNEAT1的阴性对照(siNC)组、miR-let-7a的模拟物(mimic)组、mimic阴性对照(mimic-NC)组、miR-let-7a抑制剂(inhibitor)组、inhibitor阴性对照(inhibitor-NC)组、沉默碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)的小干扰RNA载体(siBZW2)组、siBZW2的阴性对照(siBZW2-NC)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2-NC给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC)组。qRT-PCR检测各组中lncRNA NEAT1及其预测靶分子miR-let-7a的表达。Western blot和qRT-PCR检测BZW2的表达。双荧光素酶报告基因实验检测Hs840.T中lncRNA NEAT1和miR-let-7a以及miR-let-7a和BZW2的靶向关系。MTT实验测定Hs840.T的增殖能力。Annexin V-FITC/PI双染法检测Hs840.T的凋亡逃逸能力。结果Hs840.T中的lncRNA NEAT1和BZW2表达高于HOECs(P<0.05),而miR-let-7a表达低于HOECs(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,Hs840.T中lncRNA NEAT1吸附抑制miR-let-7a并上调BZW2的表达(P<0.05),且BZW2是miR-let-7a的靶基因。与pcDNA-NC组相比,pcDNA-NEAT1组Hs840.T的增殖率增加(P<0.05),早期、晚期凋亡率均降低(P<0.05);与siNC组相比,siNEAT1组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增加(P<0.05)。另外,与pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC组相比,pcDNA-NEAT1+siBZW2组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增高(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进LP细胞的增殖和凋亡逃逸。

白花泡桐bZIP基因家族鉴定及其对丛枝植原体致病过程的响应

【目的】全基因组范围内鉴定白花泡桐(Paulownia fortunei)基因组中的碱性亮氨酸拉链转录因子(basic leucine zipper,bZIP)家族成员,并研究该家族基因在泡桐丛枝病发生过程中的作用。【方法】基于白花泡桐基因组图谱,利用隐马尔科夫模型、拟南芥bZIP蛋白质序列和本地BlastP程序,以E-value<0.001为阈值进行PfbZIP家族成员鉴定;使用MAGE7.0软件进行蛋白质序列比对及系统发育进化树构建,使用Tbtools软件进行基因结构及启动子顺式作用元件分析,并利用泡桐丛枝病发生前后及恢复过程中的转录组数据筛选与泡桐丛枝病发生相关的基因。【结果】鉴定到PfbZIP基因家族共有89个成员,根据系统进化分析将该家族基因分为13个亚家族;共线性分析发现该家族内发生了63次片段复制事件;顺式作用元件分析表明,PfbZIP基因家族可能响应光照、植物激素调控、生物与非生物胁迫等生物学过程。对泡桐丛枝病发生前后及恢复过程中的转录组数据分析发现,30个PfbZIP基因在发病前后显著差异表达,其中PfbZIP46基因表达在恢复过程中也有明显变化,故推测PfbZIP46可能与丛枝植原体入侵有关。【结论】在白花泡桐基因组中共鉴定出89个PfbZIP基因,片段复制事件可能是PfbZIP转录因子家族扩张的重要原因,PfbZIP46可能在丛枝植原体入侵泡桐过程中扮演重要角色。

芒果bZIP转录因子基因的克隆、亚细胞定位及表达分析

碱性亮氨酸拉链(bZIP)转录因子在调控植物生长发育及抵抗非生物胁迫过程中具有重要作用。本研究通过RACE技术,获得了全长1 317 bp的芒果bZIP转录因子基因(MibZIP46)。系统进化树分析结果表明,MibZIP46与同样是漆树科的阿月浑子的bZIP亲缘关系最为接近,同源性最高,与甜橙的同源性次之。构建了原核表达重组质粒pCZN 1-MibZIP46,经0.2 mmol/L IPTG诱导,目的蛋白以包涵体的形式表达,经镍柱纯化,获得高纯度(90%)的目的蛋白并成功进行Western blotting鉴定;MibZIP46蛋白的亚细胞定位分析结果表明,融合的目的蛋白在烟草叶片细胞中定位于细胞核;实时荧光定量PCR分析结果表明,200 mmol/L NaCl、15%PEG和0.1 mmol/L ABA胁迫处理,均能不同程度诱导MibZIP46的表达。本研究为进一步挖掘利用芒果的抗逆相关基因提供了理论依据。

血清BATF、C3AR1在肺炎继发脓毒血症患者的病情严重程度及预后评价中的价值

目的探讨肺炎继发脓毒症患者血清碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子(BATF),补体C3A受体1(C3AR1)水平与病情严重程度的关系及预后评估价值。方法选取2019年3月至2021年3月诊治的112例肺炎继发脓毒症患者为脓毒症组,根据28 d预后情况分为生存组(77例)和死亡组(35例),以同期诊治的60例无脓毒症肺炎患者为肺炎对照组,60例健康体检的健康人为健康对照组。应用酶联免疫吸附试验检测血清BATF、C3AR1水平。比较不同预后肺炎继发脓毒症患者临床资料及血清BATF、C3AR1水平。Spearman秩相关分析血清BATF、C3AR1水平与序贯器官衰竭评分(SOFA)的相关性。多因素Logistic回归分析影响肺炎继发脓毒症患者28 d死亡预后的因素。受试者工作特征曲线分析各指标对肺炎继发脓毒症患者28 d死亡预后的预测价值。结果脓毒症组患者血清BATF[(2.26±0.41)μg/L],C3AR1[(40.41±7.08)mg/L,]水平高于肺炎对照组[(1.02±0.29)μg/L,(31.84±6.12)mg/L]和健康对照组[(0.53±0.12)μg/L,(23.79±6.39)mg/L],差异有统计学意义(t=10.199~57.009,均P<0.05)。死亡组患者血清BATF[(2.96±0.48)μg/L vs.(1.94±0.36)μg/L],C3AR1[(44.26±7.35)mg/L vs.(38.66±6.78)mg/L],PCT,SOFA评分高于生存组,差异有统计学意义(t=3.946~35.388,均P<0.05)。PCT、BATF、C3AR1和SOFA评分升高是影响肺炎继发脓毒症患者28 d死亡预后的独立危险因素。血清PCT、BATF、C3AR1和SOFA评分联合对肺炎继发脓毒症患者28日死亡预后预测的曲线下面积为0.945,大于血清PCT、BATF、C3AR1和SOFA单项指标0.836、0.830、0.772、0.896,差异有统计学意义(Z=8.417,8.366,9.050,2.384,均P<0.05)。结论肺炎继发脓毒症患者血清BATF、C3AR1水平升高,两者疾病严重程度有关,血清PCT、BATF、C3AR1和SOFA评分联合对肺炎继发脓毒症患者预后具有较高的预测效能。

转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3(BATF3)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法:收集2019年3月至2022年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN细胞,通过MTS法、Transwell实验检测BATF3对786-O或ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR法检测敲减或过表达BATF3对786-O或ACHN细胞EMT相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白(VIM)启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较,ccRCC组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA与ccRCC的分化程度和TNM分期密切关联(均P<0.01);与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3在ACHN及786-O细胞中均呈高表达(均P<0.01)。敲减BATF3表达均能明显抑制786-O细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01),敲减或过表达BATF3能抑制786-O细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达(均P<0.01)。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论:BATF3在ccRCC组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM分期密切关联;BATF3通过调控VIM的表达影响ACHN、786-O细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。

白藜芦醇上调BATF2表达及抑制肝癌细胞增殖的研究

目的初步探讨白藜芦醇对BATF2表达的调控作用及对肝癌细胞(HepG2)增殖能力的影响。方法用不同剂量的白藜芦醇(终浓度分别为20、40、80μmol/L)处理HepG2细胞,进行逆转录PCR(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、Western blot检测碱性亮氨酸拉链转录因子2(BATF2)mRNA和蛋白水平表达的变化,并采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测对细胞增殖能力的影响。结果在HepG2细胞中,白藜芦醇能剂量依赖性地诱导BATF2在转录和翻译水平的表达,并抑制细胞的增殖(P<0.05);基因检测发现白藜芦醇显著诱导BATF2启动区活性,-244^-152区域存在白藜芦醇的可能结合位点。结论白藜芦醇能增强HepG2细胞中BATF2的表达并抑制细胞的增殖,提示上调BATF2的表达可能是白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖的机制之一。

利用酵母双杂交技术筛选与AtbZIP1相互作用的蛋白质

碱性亮氨酸拉链bZIP类转录因子在植物的生长发育、光形态建成、光信号传导及非生物胁迫反应中发挥重要的作用.为研究AtbZIP1基因的作用机理,本研究首先验证了该基因的自激活转录活性,通过缺失突变确定了该转录因子的转录激活结构域;以AtbZIP1缺失突变体AtbZ3为诱饵蛋白,采用Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System(Clonetch),共筛选获得5个与诱饵蛋白相互作用的蛋白质;并通过AbA(Aureobasidin A)抗生素标记基因,His营养缺陷和LacZ蓝白斑检测验证了阳性克隆.亚细胞定位分析发现,AtbZIP1蛋白除了定位于细胞核外,还定位于叶绿体细胞.通过分析这些靶蛋白的已知功能,为研究AtbZIP1蛋白的未知生物学功能提供重要信息.

miR-760抑制人食管鳞状细胞癌细胞系的增殖、侵袭和迁移

目的探讨miR-760通过靶向调控碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子3(BATF3)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集ESCC患者癌组织及其癌旁组织,体外培养人食管鳞状上皮细胞Het-1A和人ESCC细胞系EC9706、KYSE150、ECA109、TE-10。RT-qPCR检测miR-760和BATF3 mRNA表达。转染miR-760-mimics至TE-10细胞,上调miR-760表达,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭、迁移;Western blot检测增殖相关蛋白cyclin D1、p21及上皮-间质转化相关蛋白MMP2、vimentin、E-cadherin表达;双荧光素酶报告基因实验证实miR-760和BATF3的靶向关系。结果与癌旁组织和Het-1A细胞相比,ESCC组织和细胞系中miR-760表达水平明显降低,而BATF3表达水平明显升高(P<0.05)。选择miR-760表达量最高的TE-10细胞进行后续实验。过表达miR-760可使TE-10细胞活性降低,侵袭、迁移细胞数减少,cyclin D1和vimentin蛋白表达降低,p21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-760负调控BATF3表达(P<0.05);上调BATF3表达逆转了过表达miR-760对TE-10细胞增殖、侵袭、迁移的抑制作用(P<0.05)。结论miR-760过表达可抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移,其可能与靶向抑制BATF3表达有关。

玉米转录因子ZmbZIP77基因克隆及表达分析

碱性亮氨酸拉链蛋白(Basic Leucine Zipper,bZIP)是广泛存在于真核生物中的一类转录因子,广泛参与植物多种生理进程。从玉米(Zea mays L.)中克隆出1个碱性亮氨酸拉链蛋白家族成员ZmbZIP77,对该基因进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR技术分析了其在玉米不同组织部位及不同胁迫处理下的表达谱。结果表明,ZmbZIP77与其他bZIP家族成员一样,均含有1个保守的GBF1(Plant G-box binding factor 1)结构域,暗示它和该家族中其他成员具有相同或相似的功能;根据bZIP序列的同源性,植物bZIP序列可以分为3类,ZmbZIP77位于第Ⅱ类,与小麦Wlip9a和拟南芥AtbZIP10亲缘关系最近;玉米ZmbZIP77基因在根中表达量最高,胚芽鞘次之,在叶中表达量最低;高温、干旱和脱落酸均能显著诱导玉米根中ZmbZIP77的表达,提示ZmbZIP77可能在玉米组织发育及逆境胁迫响应中起到重要作用。

小麦抗病相关基因TaTGA2.2在小麦-条锈菌互作中的表达分析及功能研究

为了进一步解析小麦与条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici,Pst)互作中的抗病分子机制,在小麦-条锈菌互作的cDNA文库中分离得到一个编码bZIP类转录因子的小麦抗病相关基因TaTGA2.2。通过实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)以及病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)对TaTGA2.2的表达模式及其在小麦与条锈菌互作中的功能进行了初步解析。结果表明,小麦TaTGA2.2基因全长1005 bp,编码334个氨基酸,具有bZIP保守结构域以及TGA转录因子类似结构域。进化树分析发现TaTGA2.2与一粒小麦中TGA蛋白近缘。拟南芥原生质体亚细胞定位发现TaTGA2.2分布在细胞核,酵母自激活实验表明TaTGA2.2蛋白N端具有转录激活活性。此外,TaTGA2.2受条锈菌诱导表达,且非亲和互作中的表达量较亲和互作明显增高。非生物胁迫处理中干旱、盐以及外源激素水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)也能诱导TaTGA2.2上调表达。VIGS沉默TaTGA2.2基因后,发现接种条锈菌CYR23及CYR31后小麦的表型均无明显变化。另外,PR基因的表达量也无显著差异,表明植物中可能存在与TaTGA2.2功能冗余的TGA成员。