碱性亮氨酸拉链和W2结构域2对子宫内膜癌细胞生物学行为的作用及机制

目的 探讨碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及细胞周期的调控作用及其潜在作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测BZW2在人子宫内膜基质细胞系ESC和人子宫内膜癌细胞(Ishikawa、KLE、RL95-2、HEC-1-A)中的表达。将BZW2干扰质粒转染至HEC-1-A细胞,并加入Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路激动剂SKL2001进行处理。采用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞活性、克隆形成、迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞周期;采用GSEA分析BZW2在Wnt信号通路中的富集度;采用Western blot分析增殖、转移、周期及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 BZW2在子宫内膜癌细胞中表达上调,干扰BZW2可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导G0/G1期细胞阻滞(P<0.001)。敲低BZW2可使Wnt/β-catenin通路失活(P<0.001), SKL2001可部分逆转BZW2缺失对HEC-1-A细胞增殖、迁移、侵袭及细胞周期的调控作用(P<0.001)。结论 BZW2下调可抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移,并促进G_(0)/G_(1)期细胞阻滞,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路失活有关,BZW2可作为治疗子宫内膜癌的新靶点。

水稻碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白家族功能研究进展

碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)是一类重要的转录调控因子,广泛存在于真核生物中,因含有高度保守的bZIP结构域而得名。bZIP结构域由紧密相邻的碱性区域和亮氨酸拉链区域两部分组成。粳稻基因组中注释有89个bZIP基因,其中45个已得到功能验证,它们参与调节水稻生长发育、生物与非生物胁迫应答,包括种子休眠和萌发、成花转变、光形态建成,以及胁迫和激素信号通路等。

碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子在肾透明细胞癌预后和免疫浸润细胞中的潜在价值

目的探究碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子(the basic leucine zipper ATF-like transcription factor,BATF)在肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)进展中的作用。方法通过UALCAN、TISIDB、Kaplan-Meier plotter、OncoLnc及Sangerbox数据库分析BATF在KIRC的表达及其预后和免疫中的作用。结果BATF在KIRC组织中的表达水平显著升高,且与较差的总体生存期相关。BATF过表达与KIRC病人肿瘤分期、组织学亚型和淋巴结转移显著相关。KIRC组织中BATF的甲基化水平与肿瘤分期、分级及淋巴结转移呈负相关关系。BATF过表达与KIRC免疫浸润B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞和树突细胞水平呈正相关关系。结论BATF在KIRC中高表达。BATF高表达与KIRC病人预后不良相关,且与KIRC免疫浸润细胞相关,表明BATF有望作为判断KIRC预后不良的生物标志物和免疫相关标记分子。

碱性亮氨酸拉链转录因子的翻译后修饰在植物响应非生物胁迫中的作用

非生物胁迫是植物生长发育过程中必须要应对的不利环境因素。在进化过程中,植物获得了多种响应或抵抗逆境的能力,其中转录因子在调控非生物胁迫耐受性方面起到了重要作用。碱性亮氨酸拉链转录因子(basic leucine zipper transcription factors,bZIP)是转录因子中较大的基因家族之一。不同的翻译后修饰(post-translational modifications,PTMs)可以控制bZIP转录因子的稳定性和活性,响应各种细胞内或细胞外胁迫。本文介绍了bZIP转录因子的结构特征与分类,重点综述了bZIP转录因子磷酸化、泛素化和小泛素相关修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)化等翻译后修饰在植物响应非生物胁迫中的作用,并对未来的研究方向进行了展望,为通过调控bZIP转录因子的翻译后修饰培育优良抗逆作物品种提供研究参考。

血红素加氧酶⁃1通过调控bHLH亮氨酸拉链转录因子E3/高尔基体应激反应减轻小鼠内毒素性急性肺损伤

目的探讨在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中血红素加氧酶⁃1(HO⁃1)对bHLH亮氨酸拉链转录因子E3(TFE3)表达与核转位以及高尔基体应激反应的影响。方法将24只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为4组(每组6只):空白对照组(Ctrl组)、内毒素[脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)]急性肺损伤组(LPS组)、内毒素性急性肺损伤+HO⁃1激动剂氯高铁血红素(Hemin)组(LPS+Hemin组)和Hemin组。Ctrl组尾静脉注射生理盐水0.5 ml;LPS组尾静脉注射LPS 10 mg/kg建立小鼠内毒素性ALI模型;LPS+Hemin组腹腔注射Hemin 50 mg/kg,1 h后尾静脉注射LPS 10 mg/kg建立内毒素性ALI模型;Hemin组腹腔注射Hemin 50 mg/kg。造模12 h后对小鼠进行断颈处死,收取肺组织。苏木精⁃伊红染色(H⁃E染色)观察小鼠肺组织病理学变化并行肺损伤评分;计算肺组织湿重/干重(W/D)值;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肺组织白细胞介素(IL)⁃6、肿瘤坏死因子(TNF)⁃α含量;流式细胞仪检测肺组织活性氧(ROS)的含量;免疫荧光染色观察TFE3核转位情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定HO⁃1、TFE3、高尔基体基质蛋白130(GM130)、高尔基体重组和堆叠蛋白65(GRASP65)、囊泡转运蛋白小GTP酶20(RAB20)、突触融合蛋白3(STX3A)、WD重复结构域与磷酸肌醇相互作用蛋白1(WIPI1)的表达水平。结果与Ctrl组比较,LPS组小鼠肺组织病理学损伤加重,肺损伤评分、W/D值及细胞凋亡指数升高,ROS、IL⁃6及TNF⁃α含量明显升高,TFE3表达及核转位增多,HO⁃1、GRASP65、RAB20、STX3A的表达水平增加,WIPI1、GM130表达水平减少(均P<0.05),Hemin组小鼠上述各指标差异无统计学意义(均P>0.05)。与LPS组比较,LPS+Hemin组小鼠肺组织病理学损伤减轻,肺损伤评分、W/D值及细胞凋亡指数下降,ROS、IL⁃6及TNF⁃α含量减少,TFE3表达及核转位减少,HO⁃1、WIPI1、GM130表达水平增加,GRASP65、RAB20、STX3A表达水平减少(均P<0.05)。结论HO⁃1能够减轻内毒素诱导的小鼠ALI,其机制可能与其调控TFE3表达、核转位及高尔基体应激反应有关。

糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白与炎症反应关系的研究

目的探讨糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）在炎症反应过程中的作用机制。方法采用无血清RPMI1640培养基分两组培养人单核细胞株THP-1细胞，其中刺激组加入地塞米松（DEX）刺激，而对照组仅加无血清RPMI1640培养基。12h后提取两组细胞总RNA和总蛋白；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法在转录水平半定量检测GILZ基因；用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）在翻译水平检测核转录因子κB（NF-κB）p65与激活蛋白-1（AP-1）的蛋白表达。收集10例临床创伤患者[创伤严重度评分（ISS）≥16分]伤后24h内的外周血，提取白细胞后分为刺激组和对照组，对照组给予无血清RPMI1640培养基。刺激组在对照组的基础上加入DEX刺激，培养12h后提取白细胞总RNA和总蛋白；用RT-PCR方法在转录水平半定量检测GILZ基因；用Western blotting方法在翻译水平检测NF-κB p65与AP-1的蛋白表达。结果在DEX刺激下，DEX刺激组THP-1细胞和创伤患者外周血白细胞GILZ mRNA表达水平均较对照组升高（P均＜0．01）；DEX刺激组NF-κB p65与AP-1蛋白在THP-1细胞和创伤患者外周血白细胞的表达水平均低于对照组（P均＜0．01）。结论糖皮质激素可上调GILZ基因表达；GILZ的高表达可以抑制NF-κB与AP-1的活性，具有抗炎症反应的作用。

bZIP转录因子在植物逆境胁迫响应和生长发育中的作用

bZIP作为植物中最大的转录因子家族之一,在植物逆境胁迫响应和生长发育中发挥重要作用。该类转录因子具有大约由60-80个氨基酸组成的较为保守的结构域,包括一个高度保守的碱性区域和一个相对多变的亮氨酸拉链区域。bZIP通过同源或异源二聚体形式与靶基因启动子中含有ACGT核心的DNA序列进行特异性结合,从而调控靶基因的表达。在植物受到激素等信号刺激后,上游信号响应激酶将会进行bZIP磷酸化;bZIP也通过磷酸化来增强自身稳定性。在逆境胁迫(如干旱、盐分、温度、光、重金属和病原菌等)条件下,bZIP与胁迫相关基因启动子区域结合以及与其他蛋白互作来促进或抑制靶基因的表达,从而正向或负向调控植物响应逆境胁迫。另外,bZIP参与植物生长发育过程中许多物质(如花青素、萜类、黄酮类、生物碱等)的合成和代谢,并且介导调节脱落酸、水杨酸和茉莉酸等激素信号通路。本文就bZIP转录因子发现、结构、分类、调控方式及其在植物逆境胁迫响应和生长发育中的作用等方面研究成果加以综述,并对其未来研究方向进行展望,为农作物抗逆性遗传改良提供理论依据和技术支撑。

亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达(英文)

酵母转录因子 GCN4是通过亮氨酸拉链 (b ZIP)结构结合 DNA的蛋白质之一 ,当 GCN 4二聚体与 DNA结合时 ,亮氨酸拉链区的 2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构 ,而其基区由无规线团结构变为α螺旋 .为探讨亮氨酸拉链蛋白与 DNA的结合机理 ,设计了含有 GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合 DNA的必需氨基酸的折叠片段 ,并将其克隆到 Escherichia coli BL 2 1,讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件 .在蛋白质的小量表达试验中 ,重组子 Es-cherichia coli BL 2 1于 5 m L含有 5 0μg/m L氨苄青霉素和 34μg/m L氯霉素的 L B液体培养基中培养至对数期 ,加入不同浓度的 IPTG,继续培养以诱导蛋白质的表达 ,在不同的时间 (如 :诱导前 ,诱导 2 ,4 ,6 ,8h)取样 10 0μL到1.5 m L离心管中、离心收集沉淀 ,将沉淀悬浮于样品缓冲液中 ,用 10 % SDS- PAGE检测 ;在 10 L含氨苄青霉素和氯霉素的 L B液体培养基中进行了大量表达 ,根据小量表达的试验结果确定了 IPTG的浓度和诱导时间 .结果表明 :含有这种拉链蛋白质的重组子 Escherichia coli BL 2 1在 37℃下小量培养时 ,0 .1～ 0 .8mm ol的 IPTG均可在 2～ 10 h内诱导该蛋白质表达 ;而大量培养时 ,0 .2 m mol和 0 .4 mm ol的 IPTG在 37℃均不可能诱导表达 ,只在2 8℃时才表达 ;

紫花苜蓿盐诱导HD-Zip类转录因子MsHB2的克隆及功能分析

【目的】在已有的一条紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.Zhongmu-1)盐诱导未知基因的EST序列基础上,克隆其(MsHB2)全长序列并分析其功能,以进一步了解其在紫花苜蓿中的耐盐调控机理。【方法】以先前获得的EST序列为基础设计引物,使用RACE法从紫花苜蓿中克隆得到MsHB2的3′和5′末端序列,经DNAMAN软件拼接后得到其全长序列。使用多种生物信息学软件对MsHB2的开放阅读框,编码蛋白等电点、分子量、疏水性、亚细胞定位、进化关系等进行预测分析。构建MsHB2的亚细胞定位瞬时表达载体,使用基因枪转化法将MsHB2与GFP在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。将生长30 d的中苜一号分别进行300 mmol·L-1NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA胁迫处理,取胁迫处理0、2、4、10、24 h后的根和茎叶组织提取总RNA并进行荧光定量PCR分析。构建了MsHB2的植物超表达载体,转化农杆菌GV3101菌株,使用农杆菌花序侵染法转化拟南芥并在盐胁迫条件下对转基因株系进行相关表型分析。【结果】将RACE法克隆得到MsHB2的3′和5′末端序列拼接后得到1 126 bp的全长序列,序列分析表明,其编码蛋白包含247个氨基酸,具有一个同源异型结构域和一个亮氨酸拉链结构域,与拟南芥HD-Zip第I类转录因子ATHB12具有较高相似性。进化树聚类分析表明MsHB2属于第Ⅰ类同源异型域亮氨酸拉链蛋白。洋葱亚细胞定位分析表明MsHB2定位于细胞核。转录水平表达分析表明MsHB2受300mmol·L-1 NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA胁迫诱导而表达量显著升高。转基因研究表明在NaCl和ABA胁迫下,过量表达MsHB2的转基因拟南芥表现比野生型拟南芥更敏感。【结论】从紫花苜蓿中克隆得到一个定位于细胞核的同源异型域亮氨酸拉链蛋白基因MsHB2,其在紫花苜蓿中受NaCl和ABA胁迫诱导,并在NaCl和ABA胁迫条件下抑制转基因拟南芥的生长。推测MsHB2可能通过ABA信号途径参与紫花苜蓿盐胁迫应激调控,并在盐胁迫等非生物胁迫下对紫花苜蓿的抗逆性起负调控作用。

BATF2在胃癌组织中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系

目的 探讨碱性亮氨酸拉链转录因子2(basic leucine zipper ATF-like transcription factor 2,BATF2)在胃癌组织中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法 收集我院2016年6月至2017年11月134例胃癌患者手术切除的胃癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR法测定BATF2的mRNA表达,免疫组化法检测BATF2蛋白表达。分析胃癌患者BATF2表达与临床病理特征间的关系。采用Cox回归分析胃癌患者预后影响因素,Kaplan-Meier法分析BATF2表达与患者预后的关系。结果 胃癌组织中BATF2 mRNA和蛋白表达均显著低于癌旁组织(P<0.05),淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、细胞浸润程度为T_(3)~T_(4)、细胞分化程度为低分化的胃癌患者BATF2蛋白阳性表达比例显著低于淋巴结未转移、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、细胞浸润程度为T_(0)~T_(2)、细胞分化程度为中/高分化的患者(P<0.05)。多因素Cox分析结果表明,淋巴结转移、TNM分期、细胞分化程度、BATF2是胃癌患者预后、复发或死亡的影响因素(P<0.05);Kaplan-Meier法分析结果表明,胃癌患者5年内预后良好率为74.63%(100/134),BATF2高表达患者5年预后良好率(93.33%)显著高于BATF2低表达患者(69.23%)(χ~2=6.445,P<0.05)。结论 BATF2表达与胃癌患者临床病理特征具有密切关系,是胃癌患者复发或死亡的影响因素,BATF2表达上调可能提高胃癌患者生存率。

LZTR1基因Arg284His变异致Noonan综合征10型病例报道和遗传学分析

目的 对1例Noonan综合征10型(NS10)患儿进行临床特征和遗传学分析。方法 对患儿及其父母进行家系全外显子组(trio-WES)检测,采用生物信息学方法对基因变异进行危害性分析,预测变异蛋白结构功能,采用免疫印迹法检测变异蛋白的表达量。结果 患儿年龄为8岁9个月,临床表现为生长发育迟缓、先天性心脏病和特殊面容等。基因检测结果提示患儿亮氨酸拉链样转录调控因子1(LZTR1)基因发生杂合变异c.851G>A(p.Arg284His)(NM_6767.4),其父亲携带该变异,母亲为野生型。Pubmed数据库和HGMD数据库未检索到相应变异的报道,属LZTR1基因新变异。SIFT、Polyphen-2和MutationTaster在线软件分析结果显示到LZTR1 c.851G>A(p.Arg 284His)变异存在生物危害性。蛋白结构模型分析结果显示,LZTR1 c.851G>A(p.Arg 284His)变异可导致LZTR1蛋白局部结构改变。免疫印迹法结果显示,与野生型LZTR1蛋白比较,变异型LZTR1蛋白的表达量降低了81.20%。结论 LZTR1基因c.851G>A(p.Arg 284His)变异可能是NS10的致病原因。

响应ABA的甘草bZIP转录因子的基因表达及调控研究

目的:研究响应脱落酸(ABA)的甘草碱性亮氨酸拉链(GubZIPs)转录因子的基因表达差异,克隆并分析甘草关键酶基因的启动子序列,为解析bZIP转录因子调控甘草活性成分生物合成提供参考。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析甘草毛状根中GubZIPs转录因子基因在外源ABA处理下的表达模式及在3年生甘草中的空间表达差异;利用TBtools软件从甘草基因组中提取关键酶基因的启动子片段并克隆,利用生物信息学分析启动子上潜在的关键调控元件。结果:甘草GubZIP1、GubZIP5、GubZIP33和GubZIP56基因在不同的ABA处理条件下表达模式不同,其中GubZIP1和GubZIP33的响应最为显著。分析GubZIPs基因在甘草不同组织的表达差异发现,GubZIP1和GubZIP5在根部高水平表达,GubZIP33和GubZIP56在叶中高水平表达。基于甘草基因组克隆获得甘草生物合成途径中关键酶查耳酮异构酶(CHI)、查耳酮合成酶(CHS)、β-香树脂醇合酶(β-AS)基因的启动子序列,分析结果显示,CHI基因的启动子区域有2个G-box和1个A-box顺式作用元件,CHS基因的启动子区域有2个ABRE和1个G-box顺式作用元件,β-AS基因的启动子区域有1个ABRE和1个G-box顺式作用元件。结论:甘草毛状根中GubZIP1、GubZIP5、GubZIP33和GubZIP56基因对ABA均有显著响应,采用50 mg·L^(–1)的ABA处理3 h是研究甘草中ABA相关通路较为适宜的方案。此外甘草的关键酶基因启动子上存在可与bZIP转录因子结合和响应ABA等激素的顺式作用元件;研究结果可为深入解析响应ABA的bZIP转录因子调控甘草活性成分生物合成的分子机制提供参考。

核转录因子Nrf2对心血管的保护作用研究进展

氧化应激是多种心血管疾病的重要发病机制之一，降低机体内的氧化应激水平，对心血管疾病的防治具有重要意义。核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）属于CNC 亮氨酸拉链转录激活因子家族，与家族中其他成员共有一高度保守的碱性亮氨酸拉链（bZIP）结构，含有7个高度保守的环氧氯丙烷（ECH）相关蛋白同源结构域［1］。其活性主要由抑制蛋白Keap1负性调节［2］，是内源性抗氧化途径的中枢转录因子，能调节抗氧化因子的表达，可作为心血管疾病潜在的治疗靶点之一。近年来，有关Nrf2对心血管保护作用的研究比较多，现作一综述。

芒果bZIP转录因子基因的克隆、亚细胞定位及表达分析

碱性亮氨酸拉链(bZIP)转录因子在调控植物生长发育及抵抗非生物胁迫过程中具有重要作用。本研究通过RACE技术,获得了全长1 317 bp的芒果bZIP转录因子基因(MibZIP46)。系统进化树分析结果表明,MibZIP46与同样是漆树科的阿月浑子的bZIP亲缘关系最为接近,同源性最高,与甜橙的同源性次之。构建了原核表达重组质粒pCZN 1-MibZIP46,经0.2 mmol/L IPTG诱导,目的蛋白以包涵体的形式表达,经镍柱纯化,获得高纯度(90%)的目的蛋白并成功进行Western blotting鉴定;MibZIP46蛋白的亚细胞定位分析结果表明,融合的目的蛋白在烟草叶片细胞中定位于细胞核;实时荧光定量PCR分析结果表明,200 mmol/L NaCl、15%PEG和0.1 mmol/L ABA胁迫处理,均能不同程度诱导MibZIP46的表达。本研究为进一步挖掘利用芒果的抗逆相关基因提供了理论依据。

转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3(BATF3)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法:收集2019年3月至2022年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN细胞,通过MTS法、Transwell实验检测BATF3对786-O或ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR法检测敲减或过表达BATF3对786-O或ACHN细胞EMT相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白(VIM)启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较,ccRCC组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA与ccRCC的分化程度和TNM分期密切关联(均P<0.01);与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3在ACHN及786-O细胞中均呈高表达(均P<0.01)。敲减BATF3表达均能明显抑制786-O细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01),敲减或过表达BATF3能抑制786-O细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达(均P<0.01)。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论:BATF3在ccRCC组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM分期密切关联;BATF3通过调控VIM的表达影响ACHN、786-O细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。

MEK/ERK/NRF2信号通路参与小鼠低温致心肌氧化应激损伤的机制研究

目的探讨重度意外性低体温对小鼠心肌的影响,并进一步明确丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶/碱性亮氨酸拉链转录因子(MEK/ERK/NRF2)通路参与心肌氧化应激损伤的可能机制。方法将20只雄性C57BL/6健康小鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=10)。对照组小鼠常规饲养,模型组小鼠低温环境饲养致心肌损伤。监测两组小鼠核心体温改变情况、检测小鼠心肌损伤标志物、观察两组小鼠心脏大体结构变化、试剂盒检测心脏活性氧水平、Western blot检测心肌组织MEK1、ERK1/2、NRF2、超氧化物歧化酶2(SOD2)、丙二醛-5(MDA-5)蛋白的表达及免疫组化验证MEK1、ERK1/2蛋白的表达。结果模型组小鼠核心体温低于对照组,肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠心脏大体标本可见出血点、水肿,其表面黯淡,颜色加深,部分边缘不整;部分心肌出现炎症细胞浸润,心肌纤维出现不规则、交错排列。模型组的活性氧水平高于对照组,MDA-5蛋白表达高于对照组,SOD2蛋白表达低于对照组,MEK1蛋白表达高于对照组,ERK1/2蛋白表达高于对照组,NRF2蛋白表达高于对照组,MEK1、ERK1/2的阳性区域面积比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重度意外性低体温可对小鼠心肌造成氧化应激损伤,该氧化应激损伤的发生机制可能与MEK/ERK/NRF2信号通路有关。

植物HD-Zip转录因子

同源异型域一亮氨酸拉链(HD-Zip)蛋白是植物特有的一类转录因子,具有调节植物发育进程和应答外界环境胁迫信号的作用。介绍了近年来有关植物HD-Zip蛋白的结构特征与特性、编码基因及其表达规律、相关生理功能的新进展。

玉米转录因子ZmbZIP77基因克隆及表达分析

碱性亮氨酸拉链蛋白(Basic Leucine Zipper,bZIP)是广泛存在于真核生物中的一类转录因子,广泛参与植物多种生理进程。从玉米(Zea mays L.)中克隆出1个碱性亮氨酸拉链蛋白家族成员ZmbZIP77,对该基因进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR技术分析了其在玉米不同组织部位及不同胁迫处理下的表达谱。结果表明,ZmbZIP77与其他bZIP家族成员一样,均含有1个保守的GBF1(Plant G-box binding factor 1)结构域,暗示它和该家族中其他成员具有相同或相似的功能;根据bZIP序列的同源性,植物bZIP序列可以分为3类,ZmbZIP77位于第Ⅱ类,与小麦Wlip9a和拟南芥AtbZIP10亲缘关系最近;玉米ZmbZIP77基因在根中表达量最高,胚芽鞘次之,在叶中表达量最低;高温、干旱和脱落酸均能显著诱导玉米根中ZmbZIP77的表达,提示ZmbZIP77可能在玉米组织发育及逆境胁迫响应中起到重要作用。

lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进喉乳头状瘤细胞的增殖和凋亡逃逸

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)对喉乳头状瘤(LP)细胞的增殖和凋亡逃逸的调控作用和机制。方法培养人喉乳头状瘤细胞Hs840.T,将正常人口腔上皮细胞(HOECs)作为对照。将Hs840.T分为lncRNA NEAT1过表达载体(pcDNA-NEAT1)组、pcDNA-NEAT1阴性对照(pcDNA-NC)组、沉默lncRNA NEAT1的小干扰RNA载体(siNEAT1)组、siNEAT1的阴性对照(siNC)组、miR-let-7a的模拟物(mimic)组、mimic阴性对照(mimic-NC)组、miR-let-7a抑制剂(inhibitor)组、inhibitor阴性对照(inhibitor-NC)组、沉默碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)的小干扰RNA载体(siBZW2)组、siBZW2的阴性对照(siBZW2-NC)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2-NC给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC)组。qRT-PCR检测各组中lncRNA NEAT1及其预测靶分子miR-let-7a的表达。Western blot和qRT-PCR检测BZW2的表达。双荧光素酶报告基因实验检测Hs840.T中lncRNA NEAT1和miR-let-7a以及miR-let-7a和BZW2的靶向关系。MTT实验测定Hs840.T的增殖能力。Annexin V-FITC/PI双染法检测Hs840.T的凋亡逃逸能力。结果Hs840.T中的lncRNA NEAT1和BZW2表达高于HOECs(P<0.05),而miR-let-7a表达低于HOECs(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,Hs840.T中lncRNA NEAT1吸附抑制miR-let-7a并上调BZW2的表达(P<0.05),且BZW2是miR-let-7a的靶基因。与pcDNA-NC组相比,pcDNA-NEAT1组Hs840.T的增殖率增加(P<0.05),早期、晚期凋亡率均降低(P<0.05);与siNC组相比,siNEAT1组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增加(P<0.05)。另外,与pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC组相比,pcDNA-NEAT1+siBZW2组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增高(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进LP细胞的增殖和凋亡逃逸。