碱性单细胞凝胶电泳预测肿瘤细胞内在放射敏感性研究

应用克隆形成法和碱性单细胞凝胶电泳技术检测辐射诱导的人红白血病细胞株K562、人结肠腺癌细胞株LS-T-117和鼠胶质瘤细胞株C6的初始DNA单链断裂数及单链断裂后的修复与细胞内在放射敏感性之间的关系。结果表明,3种细胞系的放射敏感性依次为K562>LS-T-117>C6;3种细胞系的DNA迁移距离都随着照射剂量的增加而增大,呈良好的剂量-效应关系。在相同剂量下,辐射诱导的DNA单链的初始断裂数目也依次为K562>LS-T-117>C6;3种细胞系经10Gy X射线照射并在PBS中培养不同时间后DNA迁移距离都有较大幅度的下降,但下降幅度依次为C6>LS-T-117>K562,在相同剂量下辐射诱导的DNA单链断裂后的修复能力也依次为C6>LS-T-117> K562。结果显示,辐射诱导的DNA单链断裂及修复与细胞内在放射敏感性有很好的相关性,可用于人体肿瘤细胞内在放射敏感性的预测。

碱性单细胞凝胶电泳铺胶技术的改进

目的 聚苯乙烯孔槽单层铺胶技术在碱性单细胞凝胶电泳中的可行性研究。方法 自制聚苯乙烯孔槽的载胶片 ,将 1%低熔点凝胶与淋巴细胞混合后单层铺胶 ,经 6Gyγ射线照射后进行碱性单细胞凝胶电泳 ,观察胶面和淋巴细胞的DNA损伤情况。结果 载胶片孔槽单层灌胶后胶面平整 ,操作过程无脱落 ;淋巴细胞DNA电泳图像清晰 ,6Gy照射产生的“彗星”形态特征明显。结论 采用聚苯乙烯孔槽进行单层铺胶的技术 。

精子碱性单细胞凝胶电泳法优化条件的建立及效果分析

目的:探讨精子碱性单细胞凝胶电泳法(SCGE)的主要影响因素,并优化条件,以利于标准化。方法:采用不同浓度H2O2处理精子,碱性SCGE检测精子DNA碎片(SDF),探讨凝胶层数、DNA解旋及电泳时的p H、DNA解旋及电泳时间、计数精子数对结果的影响,分析优化后方法的重复性,并用于检测40例精液标本。结果:3层琼脂糖凝胶可降低本底,DNA解旋及电泳缓冲液最佳p H值为10,最佳DNA解旋及电泳时间分别为40 min和30 min,计数50个精子即可保证结果的可靠性。优化后的碱性SCGE,用尾部DNA含量百分比表示,其批内、批间变异系数(CV)分别为3.12%、7.13%,用DNA损伤得分表示,其批内、批间CV分别为2.38%和6.09%。与健康生育男性相比,少弱畸形精子症不育男性精液SDF显著升高(P<0.05)。结论:优化后的精子碱性SCGE,重复性好,易于标准化,可用于不育男性SDF检测,适合在临床推广应用。

碱性单细胞凝胶电泳技术

目的 总结碱性单细胞凝胶电泳技术实验方法 ,探讨其影响因素。方法 以Singh等提出的碱性SCGE为基础 ,结合实验条件加以改进。结果 获得了典型的彗星图像 ,实验效果良好。结论 碱性SCGE简便易行 ,应用前景广泛 。

碱性单细胞凝胶电泳技术用于淋巴细胞辐射生物剂量估算初探

目的 初步探索碱性单细胞凝胶电泳（SCGE）方法用于电离辐射生物剂量估算的可行性.方法 不同剂量水平（0～5 Gy）的60Co γ射线照射正常人外周血,用碱性SCGE分析淋巴细胞“彗星”尾长和尾矩,建立各自的剂量-效应曲线.收集某基地放射工作从业人员的外周血进行碱性SCGE分析,并估算受照剂量,与监测物理剂量相比较.结果 淋巴细胞“彗星”尾长和尾矩均随着照射剂量的增加而增加,其剂量-效应曲线均为线性平方模式.以“彗星”尾长为指标的剂量-效应曲线方程为Y=13.59＋20.87X-2.27X^2,以尾矩为指标的曲线方程为Y=8.50＋15.04X-1.43X^2.参照上述方程,以尾矩为指标估算放射工作从业人员的剂量更接近实际受照剂量.结论 用碱性SCGE分析淋巴细胞“彗星”尾矩有希望成为电离辐射生物剂量计.

单细胞凝胶电泳检测外照射诱导DNA单链断裂和双链断裂

分别应用中性单细胞凝胶电泳、碱性单细胞凝胶电泳技术检测了不同剂量γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤。结果表明 ,γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用 ,彗星细胞百分率显著增加 ,DNA电泳迁移 。

利用单细胞凝胶技术估算淋巴细胞受照剂量

目的 明确γ射线照射致淋巴细胞DNA损伤的量效关系,拟合曲线方程。方法 采用聚苯乙烯凹槽单层铺胶后进行碱性单细胞凝胶电泳,观察γ射线外照射引起的人外周血淋巴细胞DNA损伤效应。应用IPP软件采集“彗星”尾长,利用SPSS软件进行数据分析和曲线拟合。结果 γ射线照射导致淋巴细胞DNA单链断裂,DNA断片电泳图像清晰。“彗星”尾长与照射剂量正相关(r=0.907,P<0.01),量效曲线的拟合方程为y=109.369319-40.258796x+13.636240x^2(P<0.001)。结论 一元二次方程可以很好反映淋巴细胞DNA断片迁移长度与γ射线照射剂量之间的量效曲线。

胭脂红对3T3细胞DNA损伤的SCGE检测

目的研究人工合成偶氮类色素胭脂红对体外培养小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)DNA的损伤作用。方法单层培养的3T3细胞中加入不同浓度胭脂红培养4 h,用碱性单细胞凝胶电泳技术(single cell gel elec-trophoresis,SCGE)检测3T3细胞DNA的单链断裂(single-strand breaks,SSBs)情况。结果各染毒组彗星细胞率、彗星细胞的尾长、尾部DNA含量及尾矩与胭脂红浓度正相关,呈剂量-反应关系。结论胭脂红对体外培养3T3细胞DNA具有损伤作用,浓度越大,损伤越严重。

除草剂丁草胺对虎纹蛙成体红细胞的DNA损伤

以栖息于水田的虎纹蛙(H op loba trachus rugu losus)成体为研究对象,用碱性单细胞凝胶电泳方法(或慧星试验,SCGE)对暴露在不同质量浓度的丁草胺(4.25×10-3,8.50×10-3,4.25×10-2,8.50×10-2,0.43,0.85,1.70,5.10 m g/L)溶液中的红细胞进行了遗传毒性的检测.结果表明,在实验室条件下,随着农药质量浓度的增加,红细胞的DNA损伤程度随之增加;在丁草胺质量浓度为4.25×10-3m g/L时,虎纹蛙红细胞的DNA损伤程度与对照组无统计学差异(P>0.05);当质量浓度为8.50×10-3m g/L的丁草胺处理1.5 h,就会造成显著的损伤(P<0.05);丁草胺的剂量与DNA损伤程度呈显著的线性关系:细胞的损伤率:y=12.129 x+20.084,r=0.919,P<0.01;AU:y=33.684 x+56.698,r=0.885,P<0.01.研究表明丁草胺对两栖动物具有遗传毒性作用,在检测环境污染物对两栖类的遗传毒性方面,碱性单细胞凝胶电泳分析是一种合适的方法.

X射线接触者和恶性肿瘤患者及放射治疗后肿瘤病人淋巴细胞DNA损伤检测

目的 探讨外周血淋巴细胞的DNA链断裂 (DNAsb)单独作为潜在的人体健康危害早期生物学指标的可能性。方法 应用碱性单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)检测了正常健康人、肿瘤患者、X射线接触者和肿瘤放射治疗病人外周血淋巴细胞的DNA链断裂。结果 X射线探伤工人、恶性肿瘤患者、恶性肿瘤放射治疗患者的外周血淋巴细胞彗星百分率及DNA迁移距离均显著高于正常健康人。结论 SCGE检测DNAsb可望成为患癌风险评估的生物学标志。适合于肿瘤易感人群、辐射敏感人群的筛选和生物监测。

焦化作业工人淋巴细胞HSP70表达及作用

目的探讨热应激蛋白70(HSP70)在焦炉工人外周血淋巴细胞的表达水平及其意义。方法用微核试验和碱性单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)检测淋巴细胞的染色体畸变和DNA损伤情况,用蛋白印迹(western blot)法检测淋巴细胞HSP70表达水平。结果外周血淋巴细胞微核率和彗星尾长在高暴露组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HSP70的表达水平在高暴露组、低暴露组和对照组分别为1.12±0.36,1.34±0.83,0.89±0.40,低暴露组明显高于对照组(P<0.05);高暴露组工人的外周血淋巴细胞HSP70的表达水平与彗星尾长呈负相关(r=-0.416,P=0.03)。结论焦炉作业环境可诱发外周血淋巴细胞HSP70蛋白表达,较高水平HSP70的表达对细胞DNA损伤具有保护作用。

γ-射线对淋巴细胞DNA的损伤

目的 了解γ -射线对淋巴细胞DNA的损伤情况 ,为预放射线对人体的损伤提供科学依据。方法 应用碱性单细胞凝胶电泳法 (SCGE)测定 ,观察小鼠和人外周血淋巴细胞的彗星率。结果 在小鼠实验中发现不同剂量组的小鼠彗星率明显高于对照组 ,不同剂量组之间差异也存在显著性 ,并且在各个时点的不同剂量之间的慧星率差异均存在显著性 ,在低剂量组各时点间彗星率差异无显著性 ,而在高剂量组各时点间差异有显著性 ,并且以一天中 16:0 0时点最高。结论 γ -射线能引起淋巴细胞DNA损伤 ,且存在剂量反应关系 ,此外还提示一天中淋巴细胞对γ -射线的敏感性不同。在探伤工人和对照组间差异也存在显著性。

铜暴露下赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)活体基因的损伤研究

通过碱性单细胞凝胶电泳法研究了Cu2+暴露剂量对赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)活体基因损伤的动态影响.结果显示:不添加Cu2+的对照组和添加Cu2+的处理组蚯蚓体腔细胞尾部DNA含量和尾长均呈非正态分布(p<0.05);在暴露72h时,125mg·L-1Cu2+处理组尾部DNA含量值最大,为41.44%,100mg·L-1Cu2+处理组尾长值最大,为33.79μm;随着Cu2+暴露剂量的增加,尾部DNA含量和尾长损伤频率增加;对照组和处理组的尾部DNA含量和尾长之间均存在显著性差异(p<0.05),Spearman非参数相关分析表明,尾部DNA百分含量和尾长之间呈显著相关(p<0.01,n=21),Cu2+暴露浓度与尾部DNA百分含量、尾长具有良好的剂量-构效关系(p<0.01).在125mg·L-1Cu2+浓度下暴露72h时蚯蚓的基因损伤程度达到最大,损伤程度为3级.可见,蚯蚓DNA生物标志物是重金属污染基因毒理诊断的重要指标,碱性SCGE试验是检测Cu2+暴露对赤子爱胜蚓活体基因损伤的有效手段.

γ射线外照射诱发DNA损伤的研究

[目的 ]研究γ射线对小鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤效应。 [方法 ]分别应用中性、碱性单细胞凝胶电泳技术检测不同剂量γ射线外照射诱导小鼠外周血淋巴细胞DNA的单链和双链断裂。 [结果 ] 0、1 0、5 0、10 0、15 0、2 0 0、3 0 0、40 0、60 0Gyγ射线照射小鼠外周血淋巴细胞后 ,因DNA双链断裂而发生迁移的细胞比率分别为 3 9%、9 0 %、2 8 0 %、3 2 0 %、44 0 %、5 6 0 %、64 0 %、96 0 %、96 0 % ,细胞DNA迁移长度分别为 (2 3 42± 1 3 2 ) μm、(3 0 5 0± 2 14 ) μm、(3 7 43± 0 75 ) μm、(4 7 87± 1 5 0 ) μm、(5 4 3 3± 0 3 3 ) μm、(60 72± 1 93 ) μm、(71 66± 0 68) μm、(74 0 0± 1 86) μm、(66 41±3 68) μm。 0、0 5、1 0、3 0、5 0、10 0Gyγ射线照射小鼠外周血淋巴细胞后 ,因DNA单链断裂而发生迁移的细胞比率分别为 1 80 %、7 2 0 %、8 10 %、10 90 %、2 3 68%、2 7 77% ,细胞DNA迁移长度分别为 (2 1 5 9± 0 49) μm、(2 5 5 8± 1 13 ) μm、(2 7 0 9± 0 5 ) μm、(2 7 18± 0 66) μm、(3 6 2 5± 1 15 ) μm、(5 3 2 8± 0 13 ) μm。γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用 ,彗星细胞百分率显著增加 ,DNA电泳迁移 ,且迁?

急性白血病化疗后“凋亡彗星”的检测及临床意义

目的 :观察急性白血病化疗后“凋亡彗星”的变化及其与临床疗效的关系。方法 :采用改良 Singh法 (改良碱性单细胞凝胶电泳 ,即“彗星试验”)检测 15例急性白血病患者化疗后 4、8、12、2 4、36和 72 h“凋亡彗星”的变化。结果 :化疗前“凋亡彗星”均 <0 .5 % ,化疗 8h开始增高 ,2 4h达高峰 ,“凋亡彗星”百分率 >98.0 %、骨髓白血病细胞减少指数 (MBDI) >6 5 .0 %的 11例经 1个疗程化疗完全缓解 ;“凋亡彗星”百分率为 95 .5 %、MBDI为18.5 %的 1例经 2个疗程化疗完全缓解 ;“凋亡彗星”百分率为 84.0 %、MBDI为 6 .1%的 1例经 2个疗程化疗部分缓解 ;“凋亡彗星”百分率为 3.0 %和 5 .5 %、MBDI为 1.1%和 1.6 %的 2例患者临床未缓解。结论 :应用“彗星试验”在急性白血病患者化疗过程中可检出大量早期凋亡细胞 ;“凋亡彗星”的检测是早期判断化疗疗效的良好指标。