养殖半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和过氧化物酶的组织化学定位

目的研究半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和过氧化物酶(POX)的分布及组织定位。方法取健康半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心组织进行固定,冰冻切片后进行酶组织化学染色和光密度定量统计分析。结果 ACP活性部位为棕色,主要分布于肝胰小叶间胆管和静脉,中肾肾小体中的肾小球和肾间质的肾小管,头肾和脾中的巨噬细胞以及心肌层中,在鳃中未见有分布;ALP活性部位被染为蓝紫色,主要分布于肝胰的胰腺腺泡内,中肾肾间质的肾小管,鳃的鳃丝血管和上皮细胞,脾静脉的管壁处和椭圆体,心外膜和肌膜上以及头肾的血窦腔内皮;POX活性部位被染为茶褐色,主要分布于肝胰小静脉和肝血窦内的血细胞,中肾肾间质的血细胞,鳃的鳃丝血管、鳃小片血窦和上皮细胞,头肾、脾内的血细胞以及心的心肌层和血细胞中。ACP活性由大到小依次为心、肝胰、脾、中肾、头肾;ALP活性由大到小依次为中肾、鳃、头肾、脾、心、肝胰;POX活性由大到小依次为脾、头肾、肝胰、中肾、鳃、心。结论 ACP、ALP和POX在半滑舌鳎6种组织中分布特点不同,其活性大小在不同组织中有显著差异。

鲤鱼消化道粘液物质及碱性磷酸酶的组织化学研究

本文用组织化学方法对鲤鱼食道、肠粘液物质及碱性磷酸酶进行了研究。食道、肠杯状细胞均含中性粘液和延粘液，肠部分杯状细胞还含有硫酸粘液。含硫酸粘液的杯状细胞随前、中、后肠逐渐增多，其中硫酸粘液的含量在后肠杯状细胞中最高。前、中、后肠吸收细胞核上方胞质和纹状缘含有发达的碱性磷酸酶。肠上皮中有嗜酸性颗粒细胞，其颗粒含有中性粘液和碱性磷酸酶。

5'—核苷酸酶—碱性磷酸酶双染色法在淋巴管研究中的应用

利用5’-Nase-ALPase(5’-核苷酸酶-碱性磷酸酶)的双酶组物理化学法对淋巴管进行鉴定,光镜下的观测结果发现该双染法可在同一个切片中将淋巴管染成褐色,而毛细血管则染成了金色。这样,就能很明显地把淋巴管和血管结构区分出来,尤其是能显示HE染色所无法表现的毛细淋巴管和毛细血管结构,对在形态学上探讨白淋巴管和微血管结构和其转移机理,提出了可靠的组织化学方案。因此,笔者对5'—核苷酸酶—碱性磷酸酶双染色法在淋巴管鉴定中的应用展开探讨。

大鼠肾小管碱性磷酸酶动力学特征的组织化学研究

采用大鼠肾皮质新鲜冰冻连续切片，厚６μｍ。对相邻切片进行不同时间、不同ｐＨ值和不同底物浓度的Ｇｏｍｏｒｉ钙－钴法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。反应后的标本先用ＯｌｙｍｐｕｓＢＨ－２型显微镜Ｃ－３５ＡＤ－２型照相设备中曝光控制器，控制相同的入射光强度，对上述各不同组织化学反应条件的肾皮质，每一切片随机测定１０个视野曝光时间作为灰度参数。用图像分析仪测定同一切片的ＡＫＰ反应产物的平均灰度值和用曝光控制器显示的灰度参数进行相关、回归分析，结果如下：①随着反应时间的延长，灰度值相应增加，５分钟内，反应速度基本呈线性关系，３０分钟时，在光镜下发现反应产物有扩散现象；②在ｐＨ８时反应产物很弱，ｐＨ９和ｐＨ９．４时反应产物的灰度值最大；③随着底物浓度的增高，灰度值相应增加，而底物浓度０．５％～２％比３％～３０％时灰度值显著低；④灰度参数和图像分析的平均灰度呈明显的正相关，并计算出回归方程可以从灰度参数推算出图像分析的平均灰度值。根据实验结果绘制出不同时间反应曲线，不同ｐｈ值反应曲线，不同底物浓度反应曲线和直线相关曲线。可得出最佳反应时间。

显微曝光控制器对大鼠肾碱性磷酸酶组织化学进行定量研究的可行性探讨

采用大鼠肾皮质新鲜冰冻连续切片，厚６μｍ，对相邻切片进行不同时间、ｐＨ值和底物浓度的Ｇｏｍｏｒｉ钙—钴法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。反应后的标本用图像分析仪测试上述不同组织化学反应条件下肾小管ＡＫＰ反应产物的灰度值，进行定量分析。结果：①随着反应时间延长，灰度相应增加；②在ｐＨ７和ｐＨ１１条件下无反应产物，ｐＨ９和ｐＨ９．４时反应产物的灰度值最大；③随着底物浓度的增高，灰度值相应增加。根据上述实验结果绘制出不同时间、ｐＨ值、底物浓度的反应曲线，可得最佳反应时间、最适ｐＨ值和米氏常数。

一种敏感、稳定、快速、简便的中性粒细胞碱性磷酸酶滴片染色法

一种敏感、稳定、快速、简便的中性粒细胞碱性磷酸酶滴片染色法李秀荣，张伯龙中性粒细胞碱性磷酸酶（ＮＡＰ）染色对某些疾病的诊断与鉴别诊断均有较大的临床价值。我们改良了Ｒｕｔｅｎｂｅｒｇ等的ＮＡＰ法，建立起一种敏感、稳定、快速、简便、价廉、无不良气味污染的...

改良5'-核苷酸酶-碱性磷酸酶双染色法观察成牙本质细胞层毛细淋巴管

目的:对5'-核苷酸酶-碱性磷酸酶(5'-nucleotidase-alkaline phosphatase,5'-Nase-ALPase)双染色法进行改良,并用其染色观察牙髓成牙本质细胞层是否存在毛细淋巴管。方法:选用牙根发育完成的健康恒前磨牙共44个。首先取15个牙,分为3组,分别用单纯冰冻法、先冰冻后固定法、先固定后冰冻法处理牙髓,选取适用于本研究的标本制备方法。然后取8个牙的牙髓切片对5'-Nase-ALPase双染色法从ALPase反应底物量和反应时间上进行改良。最后取21个牙,其中12例牙髓的切片用改良双染色法染色,9例分3组作对照染色,在光镜下观察成牙本质细胞层中的毛细淋巴管。结果:用改良5'-Nase-ALPase双染色法发现在被染为淡蓝色的成牙本质细胞层中有呈褐色或浅黄色的毛细淋巴管。结论:在牙根发育完成的健康恒前磨牙成牙本质细胞层中有毛细淋巴管。

Ⅲ.小脑组织移植对创伤大鼠小脑碱性磷酸酶影响的组织化学观察

用组织化学方法观察了正常成年大鼠小脑碱性磷酸酶(AKP)的分布、手术创伤小脑AKP的动态变化以及植入胎鼠小脑后,对寄主小脑AKP反应的影响。结果:正常大鼠小脑内,AKP主要分布于脉络丛和软脑膜,均为Ⅲ级。创伤组,大鼠小脑内,AKP反应的部位和强度随时间不同有明显变化。移植组,寄主小脑AKP反应的变化规律和创伤组相似,但在相应的各时期内,AKP的反应,移植组均较创伤组增强。表明植入的胎鼠小脑组织对寄主小脑AKP的活性有促进作用,尤以第4～6天明显。

以萘酚AS—BI磷酸钠为底物的白细胞碱性磷酸酶染色法

白细胞碱性磷酸酶(LAP)染色有助于区分白血病类型、鉴别细菌感染性疾病,是临床常用的一种血细胞化学染色方法。LAP染色方法较多,目前一般都采用偶氮偶联法。由于底物不同,染色效果不尽一致。本文介绍一种以萘酚AS-BI磷酸钠为底物的LAP染色法。

CD34与D2-40双重免疫组织化学染色技术在鉴别血管与淋巴管中的应用

在恶性肿瘤中,血管和淋巴管转移是肿瘤转移的重要途径,并且肿瘤的转移与患者的预后密切相关。苏木素-伊红(HE)染色中,区别淋巴管和血管非常困难。

中性粒细胞碱性磷酸酶的快速染色法

中性粒细胞的碱性磷酸酶(neutrophil alkalinephosphatase,简称NAP)是一种胞内水解酶。测定其活性对于某些血液病的诊断、鉴别诊断和对疗效的观察有重要价值。目前国内推荐的改良Gomori钙钴法(简称改良法),其孵育时间长达4h,而且试剂配制繁琐,笔者将生物化学中有关磷酸基受体缓冲浪的原理应用于NAP染色,即在改良的基础上,以2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)作为缓冲体系,建立了一种简便快速的染色法(简称快速法),孵育时间仅15min,现报告如下:1 材料和方法1.1 主要试剂1.1.1 固定液 10％甲醛甲醇溶液。

肺腺癌肿瘤相关巨噬细胞的免疫组织化学双标染色方法优化

目的通过对现有的免疫组织化学双重标记方法(双标)的改进,探索一种稳定且易于辨认的显色方法,便于在普通光学显微镜下观察肺腺癌组织中肿瘤相关巨噬细胞的分布情况。方法改进的免疫组织化学双标染色分别使用二抗链接的碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶作为底物显色酶,底物分别选用固红(AP-Red)和二氨基联苯胺(DAB),在显微镜下次序控制双标显色,观察肺癌组织中肿瘤相关巨噬细胞的分布情况。结果免疫组织化学双重标记中第一标记AP-Red的红色与第二标记DAB的棕黄色反差大,背景低,易于分辨。两种颜色标记的同一部位呈现砖红色,易于表示双标部位。统计显示在肺腺癌组织标本中,以M2型肿瘤相关巨噬细胞为主,约占80%。结论改进后的显色系统建立了简便、可靠的免疫组织化学双重标记新方法。标记结果可以清晰稳定显示肿瘤相关巨噬细胞在肺腺癌组织中分布情况,便于进一步研究其在肺癌发生、发展中的作用。

弱激光照射对实验性牙齿移动骨改建影响作用的组织化学研究

目的 :通过碱性磷酸酶与酸性磷酸酶染色的组织化学方法 ,探讨弱激光照射对正畸骨改建的影响作用。方法 :选择弱激光照射 (CO2+He-Ne)的方法 ,制作兔正畸牙齿移动的动物模型。将 42只大而白免分为未加力组 ,加力 1天、3天、5天、7天、14天、2 1天组 ,每组 6只 ,右侧作为照射侧 ,左侧作为对照侧。对兔实验性牙齿移动过程中牙周组织的变化进行了组织化学 (碱性磷酸酶与酸性磷酸酶 )染色的观察 ,并进行图象分析、统计学处理。结果 :碱性磷酸酶体积百分比的比较结果表明 ,3天、5天组照射侧碱性磷酸梅的活性变化差异显著 ,P值 <0 .0 5碱性磷酸酶酸总数目的比较结果以 3 ,5 .7天组差异显著 ,其中 3天组P值 <0 .0 1,5、7天组P值 <0 .0 5。酸性磷酸酶染色结果为照射侧 3天、7天组较对照侧有显著差异 ,P <0 .0 5。结论 :弱激光照射侧碱性磷酸酶与酸性磷酸酶的活性均增强 。

大鼠实验性根尖周病的酶组织化学研究

目的 :本研究旨在通过石蜡包埋的酶组织化学染色法 ,观察大鼠实验性根尖周病病损区成骨细胞、破骨细胞的活动情况。方法 :将大鼠右下颌第一磨牙开髓后暴露口腔 2～ 2 8d ,诱导根尖周病损形成 ;对其进行心内固定后 ,将含牙和牙槽骨的标本经EDTA脱钙 ,采用石蜡包埋法制作切片 ,进行酸性磷酸酶和碱性磷酸酶酶组织化学染色。结果 :石蜡切片经酶组织化学染色后 ,可清晰辨别出酶阳性的成骨细胞和破骨细胞。随根尖周病的发展 ,成骨细胞和破骨细胞在数量上呈一定规律性变化。结论 :石蜡切片的酶组织化学法可用于研究根尖周病损区骨细胞的行为变化。

小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞增殖、凋亡以及组织非特异性碱性磷酸酶的表达

目的:观察小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞的增殖、凋亡和其组织非特异性碱性磷酸酶(tissue non-specific alkaline phosphatase,TNSALP)的表达,探讨中间层在釉质形成过程中的可能作用。方法:取出生后1、3、5、7、9、11、15d的BALB/c小鼠56只,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,脱钙,制片,HE染色进行牙釉质发育情况的组织学观察,分别采用原位末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组织化学技术、PV二步法观察中间层细胞的凋亡及检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并对TNSALP进行组织学定位。通过Image-proplus 6.0图像分析软件,对图像进行半定量分析。采用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及SNK-q检验。结果:出生后1d,中间层细胞增殖细胞核抗原由比成釉细胞表达高的强阳性表达逐渐降低;至7d时,其表达为阴性,而且中间层细胞随釉质的发育逐渐凋亡。中间层细胞先于成釉细胞表达TNSALP,出生后5d时即呈现强阳性染色,而后其表达又逐步减弱;成釉细胞7d时开始出现阳性,且呈逐渐增强趋势。结论:中间层细胞的增殖和凋亡及其TNSALP的表达与成釉细胞具有相关性,提示中间层细胞有可能参与成釉细胞的分化及釉质形成。

三种淡水育珠河蚌外套膜酶的组织化学研究

贝类的外套膜与形成贝壳和珍珠有关，因而从组织学、生物化学、生理学等方面都有不少研究。Beedham(1958)研究指出，外套膜的外表皮细胞有强的碱性磷酸酶活性。Kado(1960)使用碱性磷酸酶抑制剂，研究了长牡蛎外套膜Ca^45的代谢量变化。Bevelander and Nakahard(1966)研究指出，

应用酶组织化学等方法对微血管形态学研究及其评价

应用酶组织化学等方法对微血管形态学研究及其评价熊正文，潘书文（中国人民解放军第２５１医院病理科，张家口市０７５０００）微血管直径和密度是微循环研究的两个重要参数，它们在不同程度上反映了循环液同组织、细胞间的交换面积，进而反映出循环物质交换的功能状态。...

結扎家兔胰导管后胰腺內的組織化学变化与胰腺內及血液內淀粉酶活力变化的关系 (Ⅱ)胰腺內碱性磷酸酶的组織化学变化的观察

本实验用组织化学方法证实,胰腺中的碱性磷酸酶是存在闰管壁细胞内。结扎胰导管后第三天,酶的反应显著加强,闰管腔胀大破裂,并且发现结扎胰导管后第九天(少数动物由第七天)起,碱性磷酸酶的反应消失,呈阴性或弱阳性反应,这种变化可能表示闰管壁细胞某种功能的消失。实验表明,结扎家兔胰导管后,血清淀粉酶的变化与闰管壁细胞内碱性磷酸酶的反应虽无直接关系,但显示碱性磷酸酶的组织化学方法可显示结扎导管后腺细胞萎缩及闰管胀裂的情况,这样有助于理解腺细胞膜通透性的改变和闰管腔的胀裂可能是胰酶通入血中途径的设想。