RNAi沉默CCR3对变应性鼻炎嗜碱性粒细胞迁移、活化及脱颗粒的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)沉默CC趋化因子受体(CCR)3对变应性鼻炎小鼠嗜碱性粒细胞迁移、活化及脱颗粒的影响。方法 取36只小鼠建立变应性鼻炎模型,分为对照组(经鼻滴入CCR3siRNA对照试剂)、干预组(CCR3siRNA)和模型组(生理盐水)各12只,另取12只小鼠经鼻滴入生理盐水进行正常对照(正常组)。收集小鼠外周血、鼻黏膜和骨髓样本,苏木素-伊红(HE)染色鼻黏膜观察形态学变化,Western印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测CCR3蛋白和mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-5、IL-3、类胰蛋白酶和组胺表达水平,流式细胞仪检测CD34^(+)细胞水平。取体外培养的小鼠嗜碱性粒细胞,加入CCR3siRNA(CCR3siRNA组)、CCR3siRNA对照试剂(CCR3siRNA对照组)和PBS液(空白组)进行培养,计算脱颗粒百分率。结果 与正常组比较,模型组、对照组和干预组鼻黏膜结构被破坏,黏膜及黏膜下层肿胀;外周血、鼻黏黏膜和骨髓CCR3蛋白及mRNA表达水平明显升高(均P<0.05),组胺、类胰蛋白酶、IL-3和IL-5表达水平明显升高(均P<0.05);外周血和骨髓中CD34^(+)细胞百分率明显升高(均P<0.05)。干预组上述指标均较模型组和对照组明显降低(均P<0.05)。与空白组和CCR3siRNA对照组比较,CCR3siRNA组脱颗粒细胞百分率明显降低(均P<0.05)。结论 CCR3siRNA能够下调变应性鼻炎小鼠CCR3表达,减轻超敏反应,利于鼻炎症状的改善。

磁分离技术和纳米金比色法用于嗜碱性粒细胞活化试验研究

嗜碱性粒细胞活化试验是一种安全、高效的诊断过敏疾病技术,成为临床体外诊断过敏疾病的主要方法之一。目前,嗜碱性粒细胞活化试验主要是利用流式细胞术对细胞进行检测,这种方法通常存在检测时间长、操作繁琐和成本高等缺点。针对这些问题,本研究开发了一种表面修饰HLA-DR抗体的磁珠分离体系,将其与过敏患者的外周血共孵育5 min后,利用磁性分离技术,筛选出表面含有HLA-DR标记物的细胞。测试结果表明,筛选后的嗜碱性粒细胞在全血中的细胞占比从0.2%提升到11.5%,嗜碱性粒细胞活化试验检测灵敏性得到了有效提高。进一步地,本研究构建了CD63适配体修饰的金纳米粒子检测体系,利用CD63适配体特异性识别活化后的嗜碱性粒细胞表面的CD63抗体,使金纳米粒子在嗜碱性粒细胞表面聚集,溶液颜色由红色转变为蓝紫色,实现对激活的嗜碱性粒细胞可视化比色检测,为临床开展嗜碱性粒细胞活化试验提供了新的方法。

人嗜碱性粒细胞胞膜蛋白在过敏诊断中的研究进展

嗜碱性粒细胞是外周血白细胞中丰度最低的粒细胞亚群。近年来,嗜碱性粒细胞作为过敏反应的经典效应细胞引起了人们的极大关注。嗜碱性粒细胞受特异性过敏原刺激后可释放多种炎性介质和细胞因子,同时伴随多种胞膜蛋白的表达变化。尽管目前嗜碱性粒细胞活化的标志分子尤其是CD63和CD203c广泛应用于临床诊断和实验室研究,然而嗜碱性粒细胞在静息和活化状态下的最佳标志分子仍有争议。本文对已知的嗜碱性粒细胞在不同状态下胞膜所表达的分子做一总结,希望能为以后开展嗜碱性粒细胞的相关研究提供新的方向。

肥大细胞和嗜碱性粒细胞系在过敏性疾病中的研究进展

过敏性疾病的发病率越来越高,过敏原检测、疾病诊断和治疗等相关研究均离不开合适的效应细胞系。本文针对过敏性疾病的主要效应细胞(肥大细胞和嗜碱性粒细胞)现有细胞系的基本特征进行了综述,并关注效应细胞系在过敏性疾病研究中的应用,以期为过敏性疾病的诊断和治疗研究提供理论依据。

血液分析仪散点图在分析嗜碱性粒细胞假性升高中的应用

目地分析白细胞分类通道(DIFF)和嗜碱性粒细胞通道(WBC/BASO)散点图的典型变化,判断嗜碱性粒细胞(Baso)假性升高,探讨其临床应用价值。方法收集46例住院患者经手工涂片复检确认的Baso假性升高样本的白细胞分类数据信息和散点图,分析导致假性升高的原因及归纳典型散点图变化。结果 Baso假性升高干扰主要来源于异型淋巴细胞(Abn-L)、中性中毒颗粒(TG)和采血不当3种原因,以Abn-L干扰较常见(56.5%)。Baso假性升高具有典型Abn-L或TG的DIFF和WBC/BASO散点图者,经外周血涂片镜检均可检出异淋或TG,白细胞分类计数(DC)发现异常增高的部分均来源于Abn-L或TG;当具有正常DIFF图,异常WBC/BASO典型采血不当散点图时,外周血涂片镜检分类均正常,临床重新规范抽取样本送检后结果均正常。结论对于外周血Baso计数存在假性升高的样本,实验室可通过仪器提供的典型散点图快速判断升高来源并指导复检,为临床提供准确可靠的实验数据。

嗜碱性粒细胞活化试验的临床应用

嗜碱性粒细胞是参与IgE介导的Ⅰ型超敏反应及2型炎症反应的重要效应细胞之一。嗜碱性粒细胞活化试验模拟体内Ⅰ型超敏反应的过程,利用流式细胞术检测过敏原刺激后嗜碱性粒细胞表面特异性标志物的表达水平,以反映嗜碱性粒细胞的活化程度及状态。嗜碱性粒细胞活化试验作为一种过敏原体外试验,具有安全性好、特异性高等优点,在临床上可用于食物或药物过敏、气道过敏性疾病、膜翅目昆虫毒液过敏和严重过敏反应等的辅助诊断,以及不同过敏原特异性免疫治疗的疗效监测。嗜碱性粒细胞活化试验相关过敏原试剂、操作流程及解读方法尚需进一步标准化,以促进该方法的推广应用。

嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病应用中的研究进展

21世纪以来,过敏性疾病的发病率逐年增高,严重威胁着人类的生命健康。然而临床中针对这一类疾病目前没有安全高效的检测方法。本文通过梳理过敏性疾病及嗜碱性粒细胞活化试验的相关文献资料,认为该试验是一种安全高效的辅助诊断过敏性疾病的方法,其理论依据是嗜碱性粒细胞的表面标志物会随着过敏反应的发生而变化。基于这一理论依据,传统的嗜碱性粒细胞活化试验是利用流式细胞术对细胞进行检测,进而体外辅助诊断过敏性疾病。近年来基于微流体技术的新型嗜碱性粒细胞活化试验逐步兴起。流式细胞术是一种对细胞进行快速定量分析和筛选的方法。微流体技术是一种高精度处理小体积流体的技术,具有成本低、操作简便且所需样本及试剂量少的优点。本文就嗜碱性粒细胞的相关概念、分别基于流式细胞术及微流体技术的嗜碱性粒细胞活化试验及其在临床过敏性疾病中的应用价值做一综述,以期为嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病诊断领域的应用提供理论支持。

流式细胞术分析户尘螨致敏的嗜碱性粒细胞活化试验及其临床意义

目的建立流式细胞术(FCM)分析嗜碱性粒细胞活化试验(BAT)的方法并评估其在过敏性疾病诊断中的意义。方法以CD63/CD203c/CD45抗体组合,建立用FCM分析户尘螨致敏的嗜碱性粒细胞脱颗粒的方法。以皮肤点刺试验(SPT)作为金标准方法,将FCM检测活化嗜碱性粒细胞与荧光酶联免疫吸附试验(FELISA)测定特异性IgE(sIgE)结果作比较,分析其临床应用价值。结果以CD45和CD203c联合设门,可以得到纯的嗜碱性粒细胞;CD63是活化嗜碱性粒细胞的最佳标志;Spearman相关系数显示,sIgE的Unicap分级与活化嗜碱性粒细胞呈中度相关;FCM检测活化嗜碱性粒细胞与FELISA测定sIgE结果在户尘螨过敏性疾病诊断中的差异无统计学意义(P>0.05),但前者的敏感度、符合率、阳性预测值以及阳性似然比各项指标都优于后者。结论通过FCM分析CD63的表达来确定活化嗜碱性粒细胞是诊断速发型超敏反应的一种有效、安全的体外检测方法。

过敏性休克大鼠血嗜碱性粒细胞CD63的表达

目的通过流式细胞仪分析CD63的表达来确定嗜碱性粒细胞活化情况,探讨其在过敏性休克诊断中的应用价值。方法16只大鼠随机分为对照组和实验组,采用卵蛋白注射建立过敏性休克大鼠动物模型,以CD63、CD45、CD203c抗体组合,应用流式细胞仪检测大鼠血嗜碱性粒细胞CD63的活化情况,并采用免疫荧光法对大鼠肺组织CD63进行免疫荧光染色。结果 (1)以CD45和CD203c联合设门,可以得到纯的嗜碱性粒细胞。(2)实验组CD63的表达率为(17.34±2.04)%,对照组CD63的表达率为(1.52±0.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)与对照组相比,实验组大鼠肺组织中嗜碱性粒细胞CD63的表达增多。结论流式细胞仪检测CD63的表达有望作为过敏反应体内试验的补充,具有较好的临床应用价值。

人嗜碱性粒细胞在不同刺激物作用下的组胺释放能力

目的:研究蛋白酶激活受体2(PAR2)激动剂和肝素等,对嗜碱性粒细胞组胺释放的影响。方法:用Ficoll进行密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC)。经Hank’s平衡盐溶液(HBSS)重新悬浮后进行嗜碱性粒细胞激发实验,用酶联免疫试剂盒来检测组胺的水平。结果:浓度为10mg/L胰蛋白酶可引起嗜碱性粒细胞释放组胺,其作用强度较抗IgE抗体、钙离子载体(CI)及P物质等为弱。PAR2特异性激动肽SLIGKVNH2对嗜碱性粒细胞没有明显的激活作用,但抗IgE抗体、CI、FMetLeuPhe(FMLP)、C5a及P物质可引起嗜碱性粒细胞显著的组胺释放。肝素、C5和腺苷在试验浓度内未引起组胺释放,但肝素可显著增加C5a和P物质诱导的组胺释放。结论:胰蛋白酶、抗IgE抗体、CI、FMLP、C5a及P物质均可诱导嗜碱性粒细胞显著地释放组胺。PAR2激动肽SLIGKVNH2不能引起组胺释放,肝素可增加P物质和C5a引起的组胺释放,具有放大嗜碱性粒细胞激活信号的作用。

类风湿关节炎患者嗜碱性粒细胞与疾病活动度和Th1应答失衡的关系

目的:探讨RA患者外周嗜碱性粒细胞的活化情况和活化机制,以及与疾病活动度和Th1/Th2应答失衡的关系。方法:本研究运用流式细胞术检测类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Th1/Th2细胞的比值和嗜碱性粒细胞数量及活化水平,用ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4水平,用Western blot法检测血清中循环的Ig E型免疫复合物(Ig E-CIC)的水平。结果:Th1/Th2细胞比值与DAS28评分呈低度线性正相关关系;RA患者血清IFN-γ水平较对照组显著升高,且和疾病活动度相关,但IL-4的水平则无差异;RA患者嗜碱性粒细胞数量较对照组显著降低,且高度活化(高表达CD203c和CD62L);RA患者外周血存在高水平的Ig E-CIC,而对照组则无。结论:RA患者外周血嗜碱性粒细胞高度活化、数量显著减少,可能会迁徙至次级淋巴组织和炎症部位,对抗外周Th1应答失衡,有望为RA的防治提供新的线索。

嗜碱性粒细胞在过敏性疾病中研究进展及临床应用展望

Th2免疫应答是过敏性疾病发病最重要的免疫学机制。嗜碱性粒细胞(Ba)在过敏性炎症中起着始动者、效应者和调节者作用。在过敏性炎症的始动阶段,Ba可能通过独立或与树突状细胞(DCs)间通过协同作用完成抗原递呈作用而启动Th2免疫应答。Ba还表现出增强记忆性Th2、Th17免疫应答的免疫学效应,提示其在记忆性免疫应答中起着重要作用。临床研究发现嗜碱性粒细胞活化试验(basophil activation test,BAT)在过敏性疾病诊断中具有独特优势,且在监测评估特异性免疫治疗和生物制剂治疗疗效中具有作为生物学标记的潜在价值。

嗜碱性粒细胞在Th2型免疫应答中的作用

随着嗜碱性粒细胞条件缺失技术的发展和高纯度细胞分选技术的应用,发现它是Th2细胞分化过程中主要细胞因子IL-4的早期产生细胞,可调节Th2型免疫应答,进而参与Th2免疫相关疾病,如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。此外,还发现嗜碱性粒细胞可表达MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子,并可迁移至引流淋巴结,摄取抗原并提呈给初始T淋巴细胞,参与抗原递呈。本文对嗜碱性粒细胞在Th2型免疫反应及相关疾病中的研究进展作一综述。

外周血嗜碱性粒细胞水平升高与女性良性乳腺结节发病风险的关联:基于乳腺超声队列研究

目的:研究外周血嗜碱性粒细胞(basophils,BASO)水平升高与超声检出良性乳腺结节发病风险的关联。方法:选取2014年01月至2019年06月接受年度健康体检,有完整血常规信息且至少有两次乳腺超声检查的受检者为研究对象,收集身高、体重、体质量指数(body mass index,BMI)、腰围(waist circumference,WC)、血压、血脂、血糖、血尿酸、血常规、婚姻状况、吸烟、饮酒、慢病史和家族史等信息。将研究对象按BASO绝对值及百分比四分位数分组,采用多因素调整的Cox比例风险回归模型分析基线BASO绝对值及百分比与良性乳腺结节发病风险的关联,计算发病风险比(HR)及其95%CI。结果:累计随访6237人年,中位随访时间2.37年,共有815人新发良性乳腺结节。多因素调整后,以BASO绝对值最低分位数组为参照,其他分位数组发生良性乳腺结节的风险增加,HR(95%CI)分别为1.19(0.98,1.45)、1.17(0.94,1.46)和1.34(1.07,1.68)(P_(趋势)<0.001)。同样,以BASO百分比最小分位数组为参照,其他分位数组发生良性乳腺结节的风险也均增加,HR(95%CI)分别为1.56(1.27,1.92)、1.53(1.23,1.91)和1.54(1.22,1.95)(P_(趋势)<0.001)。BASO百分比升高伴淋巴细胞百分比升高和单核细胞百分比升高时,乳腺结节发病风险增加,其HR(95%CI)分别为1.52(1.05,2.21)和1.38(1.02,1.87)。按年龄、BMI和WC进行分层分析发现,BASO水平升高在高年龄组(>50岁)、BMI≥28 kg/m 2组及腹型肥胖组(WC≥85 cm)人群中良性乳腺结节发病风险增加(P<0.05)。结论:外周血BASO水平升高可能增加良性乳腺结节发病风险,且该关联受年龄、BMI及WC影响。

肥大细胞、嗜碱性粒细胞在过敏性疾病发病机制中的作用研究进展

多种因素可使肥大细胞或嗜碱性粒细胞活化,包括各种过敏原(IgE依赖性)和其他复合物(非IgE依赖性),激活的细胞通过一系列信号转导机制介导细胞内介质释放,实现多种生物学功能。文中综述近3年肥大细胞和嗜碱性粒细胞相关疾病研究领域中的热点问题,有助于此类疾病发病机制的研究,并为发现过敏性疾病药物治疗的新靶标提供资料。

Sysmex XE-5000血细胞分析仪对异型淋巴细胞和嗜碱性粒细胞的报警提示分析

目的评价Sysmex XE-5000血细胞分析仪对异型淋巴细胞和嗜碱性粒细胞的报警提示功能。方法收集Sysmex XE-5000血细胞分析仪同时提示异型淋巴细胞和嗜碱性粒细胞的外周血标本197份,以及单独提示异型淋巴细胞的外周血标本914份,进行显微镜复检,以核实报警提示信息是否正确。结果以显微镜复检结果为金标准,同时提示异型淋巴细胞和嗜碱性粒细胞增多的标本经复检后嗜碱性粒细胞在正常范围内,异型淋巴细胞检出的符合率为64.9%;单独提示异型淋巴增多的标本经复检后符合率为72.5%,前者明显低于后者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Sysmex XE-5000血细胞分析仪同时报警提示异型淋巴细胞和嗜碱性粒细胞增多时,两者计数有一定相互干扰,需结合显微镜复检,以降低漏诊和误诊概率。

肺炎支原体肺炎患儿嗜碱性粒细胞活化及激素对其影响

目的探讨嗜碱性粒细胞与肺炎支原体肺炎(MPP)发病的关系,以及糖皮质激素在治疗中对嗜碱性粒细胞的影响。方法 60例难治性MPP患儿随机分成治疗组和对照组,另选择30例非难治性MPP患儿和30例正常对照儿童。难治性MPP治疗组接受阿奇霉素+地塞米松(Dx)治疗,阿奇霉素剂量为10 mg/(kg.d)(最大量不超过0.5 g/d),Dx为0.2 mg/(kg.d)(最大量不超过5 mg/d),疗程5 d;难治性MPP对照组和非难治性MPP患儿仅接受阿奇霉素治疗,剂量同上,疗程5 d。采用流式细胞仪检测所有MPP组患儿治疗前、后及正常对照组儿童外周血CRTH2+CD63+双阳性细胞百分率。结果 MPP组CRTH2+CD63+双阳性细胞百分率均高于正常对照组(P<0.05);难治性MPP组CRTH2+CD63+双阳性细胞百分率明显高于非难治性MPP组(P<0.05);难治性MPP患儿在常规用阿奇霉素治疗同时加用地塞米松治疗后CRTH2+CD63+双阳性细胞百分率明显下降至正常水平,未加用地塞米松的难治性MPP患儿CRTH2+CD63+双阳性细胞百分率仍显著高于正常对照儿童(P<0.01);治疗5 d后,难治性MPP治疗组患儿咳嗽评分明显低于难治性MPP对照组患儿。结论嗜碱性粒细胞可能参与了MPP的发病;糖皮质激素能够有效抑制难治性MPP嗜碱性粒细胞的活化,改善临床症状。