HPLC-ELSD法测定白英中碱苷A的含量

目的研究白英化学成分,建立HPLC-ELSD法测定白英中碱苷A[3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-solanidan-3β,23β-diol]的含量的方法。方法采用硅胶、ODS柱色谱进行分离纯化。运用NMR数据及理化性质鉴定单体化合物的结构。色谱柱为Elite-ODS C18(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-体积分数为0.02%三乙胺水溶液(体积比为56∶44),检测器漂移管温度为95℃,氮气流速2.3 L.min-1。结果从白英提取物中分离得到碱苷A。碱苷A在0.4～4.0μg线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为99.6%(RSD=2.0%)。结论HPLC-ELSD法可用于白英中碱苷A的测定。

血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷离子对化合物体外抗菌活性和急性毒性研究

目的对血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷2个离子对化合物进行体外抗菌、急性毒性研究。方法采用试管稀释法和琼脂平板扩散法测定血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷2个离子对化合物的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并进行急性毒性试验。结果血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷2个离子对化合物的MIC和MBC与黄芩苷、血根碱和白屈菜红碱相比降低,2个离子对化合物都无明显毒性。结论血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷离子对化合物体外抗菌活性增强,毒性减小,为新型抗菌药物的筛选奠定了基础。

白头翁总皂苷碱水解产物的抗胶质瘤作用及机制研究

目的探讨白头翁总皂苷碱水解产物(PAHS)的抗胶质瘤作用及机制。方法采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率,同时采用Giemsa染色观察PAHS对肿瘤细胞形态学变化;采用hoechest33342染色观察人脑胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞的凋亡;用Western Blot法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果 PAHS可以剂量依赖性的抑制U251细胞的增殖,抑制U251细胞集落的形成;PAHS(6.25,9.375,12.5μg·mL-1)可以诱导U251细胞凋亡,抑制率分别为(6.00±2.05)%、(46.19±0.24)%、(78.26±2.10)%。PAHS可以上调Caspase-3、Bcl-2等蛋白的表达。结论PAHS具有良好的抗胶质瘤作用,其机制可能与调节Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达有关。

芒果苷小檗碱组合物降血糖作用的试验研究

目的:探讨芒果苷小檗碱组合物(MMB)的降血糖作用。方法:采用肾上腺素和葡萄糖所致高血糖小鼠模型、以及四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,观察MMB对试验动物的降血糖效果。结果:MMB对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有明显的治疗效果,对肾上腺素和葡萄糖引起的高血糖模型小鼠也有明显的降血糖作用,但对正常小鼠的血糖无明显影响。结论:MMB对高血糖模型小鼠有明显的降血糖作用,但对正常小鼠血糖无明显影响。

远志皂苷碱水解产物对乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究

目的对远志皂苷碱水解产物及其主要化学成分的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究。方法运用薄层色谱(TLC)-生物自显影和微孔高通量筛选技术,测定远志皂苷碱水解产物、细叶远志皂苷、黄花倒水连皂苷A、3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸和肉桂酸对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。结果远志皂苷碱水解产物表现出明显的乙酰胆碱酯酶抑制作用;细叶远志皂苷和黄花倒水连皂苷A表现出一定的乙酰胆碱酯酶抑制作用,但是活性有限;3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸和肉桂酸没有表现出对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。结论通过乙酰胆碱酯酶抑制实验,明确了远志皂苷碱水解产物的体外活性,为开发抗早老年性痴呆的药物提供了科学依据。

黄芩苷-小檗碱复合物的形成规律

目的研究黄芩苷-小檗碱复合物的形成规律。方法在不同黄芩苷和小檗碱比例、加热方法、介质(pH、离子强度)的条件下,HPLC法测定共煎沉淀的产量和组成。结果当黄芩苷、小檗碱用量分别为0.5、1 g时,沉淀量最高。加热温度升高、pH近中性(6.8)、葡萄糖加入均有利于沉淀生成,而NaCl加入则恰好相反。结论黄芩苷-小檗碱复合物的产量和组成主要受加热温度、添加剂的影响。

芒果苷小檗碱组合物对大鼠实验性子宫炎症的影响

目的观察芒果苷小檗碱组合物(MMB)的抑菌、抗炎、镇痛作用。方法采用液体试管二倍稀释法进行抑菌实验,采用大鼠实验性子宫炎症模型进行抗炎实验,采用醋酸所致小鼠扭体试验进行镇痛研究。结果MMB对福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌以及大鼠实验性子宫炎症具有明显的抑制作用,且能减少腹腔注射醋酸所致小鼠扭体次数。结论MMB有良好的抑菌、抗炎、镇痛作用。

SH-SY5Y细胞膜固相色谱法的建立及其对远志皂苷碱水解产物效应物质的研究

目的建立SH-SY5Y细胞膜固相色谱法,并运用该方法分析远志皂苷碱水解产物中的活性成分。方法应用SH-SY5Y细胞膜作为固定相选择性地结合远志皂苷碱水解产物中的活性成分,排除未与细胞膜靶点结合的非活性成分后,使细胞碎裂,被结合的活性成分释放出来,样品经SPE固相萃取处理后用HPLC对这些成分进行分析。结果远志皂苷碱水解产物中的活性成分初步确定为4个,分别为细叶远志皂苷、黄花倒水连皂苷A、3,4,5-三甲氧基肉桂酸和对甲氧基肉桂酸。结论细胞膜固相色谱法基本可以反映化合物与细胞膜生物靶点的相互作用,该体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性。

人参总皂苷合黄连小檗碱对慢性心衰大鼠神经内分泌的影响

目的研究人参总皂苷合黄连小檗碱对慢性心衰大鼠神经内分泌的影响。方法采用皮下连续注射异丙肾上腺素(ISO)的方法制备慢性心衰大鼠模型,随机分为模型对照组、卡托普利组、参麦注射液组、人参总皂苷合黄连小檗碱组,另设正常对照组,给药4周。测定血浆脑钠肽(BNP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、去甲肾上腺素(NE)的含量和心功能。结果模型对照组血浆BNP、AngⅡ、NE水平显著升高,心功能明显降低,与正常对照组相比,有显著差异(P<0.01);人参总皂苷合黄连小檗碱组血浆BNP、AngⅡ、NE水平明显降低,卡托普利组BNP、AngⅡ显著降低,参麦注射液组NE显著降低,各治疗组心功能也有不同程度的改善,与模型对照组相比,有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论人参总皂苷合黄连小檗碱对慢性心衰大鼠神经内分泌失调有良好改善作用。

小檗碱、黄芩苷、京尼平苷对肿瘤多药耐药小鼠S180相关因子表达的影响

目的:观察小檗碱、黄芩苷、京尼平苷对肿瘤多药耐药小鼠S180细胞凋亡因子Fas和细胞黏附因子CD54的影响,并且探讨其所涉及的干预多药耐药的分子生物学基础。方法:建立小鼠S180肿瘤细胞多药耐药在体模型,同时给予小檗碱、黄芩苷、京尼平苷4周,流式细胞荧光检测Fas、CD54。结果:小檗碱、黄芩苷、京尼平苷明显增加凋亡基因Fas表达率、降低细胞黏附因子CD_(54)的表达。结论:小檗碱、黄芩苷、京尼平苷可以通过对其相关生物活性物质产生一些调节,干预和逆转化疗诱发,使肿瘤细胞产生多药耐药。

松贝中生物碱含量测定及清洗加工方式评价

目的:同时测定松贝中西贝母碱苷和西贝母碱的含量,考察不同清洗加工方式对松贝中西贝母碱苷和西贝母碱含量的影响。方法:采用UPLC-MS/MS法,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(含10 mmol/L甲酸铵)梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温35℃,质谱采用ESI+离子源,动态多反应监测模式检测。结果:松贝中2种生物碱成分在一定浓度范围内线性关系良好,所用方法精密度、重复性、稳定性良好,平均回收率为90.48%和93.60%,RSD<3%。不同产地松贝中西贝母碱苷和西贝母碱含量差异较大;不同清洗加工方式处理后松贝中西贝母碱和西贝母碱苷的含量具有一定差异。结论:所用方法能全面、准确地测定松贝中2种生物碱成分的含量。该研究可为松贝的质量控制、临床应用和综合评价提供参考依据。

LC-MS/MS法测定黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠中的组织分布研究

目的建立大鼠组织中黄柏碱(Phellodendrine,PHE)及其葡萄糖醛酸结合物黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Phellodendrine-11-O-β-D-glucuronide,M1),黄柏碱-2,11-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(Phellodendrine-2,11-di-O-β-D-glucuronide,M2)的含量测定方法,考察PHE、M1和M2在各组织的分布特征。方法正常SD大鼠以40 mg·kg^(-1)的剂量灌胃黄柏碱水溶液,于0.117、0.17、0.5、1、2、3、4 h处死,剪取心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、胰腺和小肠。组织匀浆样品采用甲醇沉淀蛋白方法处理,以乌头碱为内标,ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm)为色谱柱,0.1%甲酸水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃,在电喷雾离子化和正离子多离子反应模式下,运用API4000+型三重四级杆质谱联用仪进行测定。结果PHE、M1和M2分别于1~800、1~1000、5~1000 ng·mL^(-1)浓度范围内的线性关系良好,3种成分的日内日间精密度均≤11.07%,准确度为(91.58±1.84)%~(110.67±5.20)%。PHE、M1和M2在组织中均有分布,PHE表现为小肠>肝>肾>肺>胰腺>肌肉>脾>心>脑;M1、M2为小肠>肾>肝>心>肺>胰腺>肌肉>脾>脑。结论所建立的方法特异性强,准确度高,稳定性好,适用于PHE、M1、M2的组织分布研究。PHE、M1、M2在大鼠体内分布广泛,主要分布在小肠,肾脏和肝脏。

HPLC-ELSD测定猴枣牛黄散中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷

目的：采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定猴枣牛黄散（HZNHS）中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷的含量。方法：Hypersil C18色谱柱（4．6mm×150mm，5μm），流速0．9mL·min^-1，流动相（乔松素和小豆寇明）A为甲醇，B为0．5％磷酸溶液，检测波长300nm；流动相（西贝母碱和西贝母碱苷）乙腈-水-二乙胺（65：35：0．5），ELSD漂移管温度80℃，载气（N2）流速2．3SLPM·min^-1。结果：乔松素和小豆寇明分别在0．0527～1．054μg（r=0．9994），0．0362～0．7240μg（r=0．9998）进样量与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为97．14％，97．64％，RSD分别为1．10％，1．39％；西贝母碱和西贝母碱苷分别在0．0571～1．142μ（r=0．9991），0．0813～1．626μg（r=0．9995）进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为97．55％，98．09％，RSD分别为1．75％，1．80％。结论：方法测定结果准确、灵敏、重复性好，可用于猴枣牛黄散中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷的测定。

9-O-小檗碱葡萄糖苷在大鼠体内的药动学研究

目的:研究9-O-小檗碱葡萄糖苷(BOG)在大鼠体内的药动学参数。方法:采用高效液相色谱法测定大鼠血浆中小檗碱(BBR)、小檗红碱(BRB)、9-O-辛基小檗碱(BOO)、BOG的血药浓度,色谱柱为PREP-ODSC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-醋酸缓冲液(醋酸铵7.7g,冰醋酸12mL,以蒸馏水定容至500mL)=40∶60(V/V),流速为1mL·min-1,柱温为室温,检测波长为345nm,进样量为20μL。用PKSolver软件计算药动学参数。结果:各组分分离效果良好,无杂质峰干扰。BBR检测浓度在1.0～75.0μg·L-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。BOG的口服生物利用度与BBR、BRB、BOO比较有显著提高,BOG的Cmax与AUC0～t分别为BBR的9.3和11.1倍,达到63.438μg·L-1、267.994μg·h·L-1。结论:亲水性糖苷化修饰有助于提高BBR生物利用度。

HPLC-ELSD法测定白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷

目的建立同时测定白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷成分的HPLC-ELSD方法。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%甲酸水溶液;柱温35℃;梯度洗脱条件:0～30 min,70%～100%甲醇;体积流量1.0 mL/min;ELSD气化室温度40℃;气体压力350 kPa。结果白头翁皂苷D、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖、白头翁皂苷A、黑海常春藤苷A1、白头翁皂苷F、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷进样量分别在0.799～4.568、0.563～6.756、0.431～2.683、0.894～7.826、0.643～7.504、1.351～7.822、0.629～2.515、0.698～2.794μg,峰面积(A)的对数值lgA与相应质量(M,μg)的对数值lgM呈良好的线性关系(n=5),8种成分的平均回收率在99.0%～101.0%,且RSD值均小于1.5%。结论本检测方法简便、准确,为白头翁总皂苷碱水解产物的质量控制提供了依据。

黄芩苷-血根碱离子对壳聚糖纳米粒的制备及表征

目的以离子凝胶法制备黄芩苷-血根碱离子对壳聚糖纳米粒(BSI-CS-NPs)。方法以单因素为主要考察方法,筛选最佳处方和制备工艺;采用透射电子显微镜(TEM)观察BSI-CS-NPs的形态,激光粒度分析仪测定粒径大小和Zeta电位,HPLC法检测包封率和载药量。结果所制BSI-CS-NPs外观圆整,粒度分布均匀,平均粒径为326.4 nm,Zeta电位为45.7 mV,包封率为68.73%,载药量为26.68%。相比黄芩苷-血根碱离子对原料药,BSI-CS-NPs 2 h的药物累积释放率减少了约36.51%,12 h累积释放率为92.29%。结论离子凝胶法适用于BSI-CS-NPs的制备,且具有缓释性能。

蚕豆生理活性物质研究进展

蚕豆是一种富含蛋白质和淀粉的豆科植物,同时它还含有多种对人体有益的生理活性物质,如类黄酮、原花色素、活性蛋白、活性肽及巢菜碱甙等。我国对蚕豆的综合利用还远落后于日本、德国等发达国家。

HPLC法测定半贝丸中腺苷、鸟苷、西贝母碱和西贝母碱苷的含量

目的：建立半贝丸中腺苷、鸟苷、西贝母碱和西贝母碱苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法。腺苷和鸟苷的色谱柱为Hypersil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流速为0.9 ml/min,流动相为甲醇-1%冰醋酸（梯度洗脱）,检测波长为260nm;西贝母碱和西贝母碱苷的色谱柱为Hpersil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%二乙胺溶液（79∶21,V/V）,柱温为室温,流速为0.9 ml/min,进样量为10μl,蒸发光散射检测器漂移管温度为85℃,载气（N2）流速为2.1 L/min。结果：腺苷与鸟苷的进样量分别在0.013 4～0.268 0μg（r=0.999 2）、0.041 2～0.824 0μg（r=0.999 7）范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,平均加样回收率分别为97.66%、96.86%,RSD分别为1.72%、1.38%（n均为6）;西贝母碱和西贝母碱苷进样量分别在0.031 6～0.632 0（r=0.999 1）、0.065 2～1.304 0μg（r=0.999 8）范围内与各自峰面积的自然对数值呈良好线性关系,平均加样回收率分别为96.51%、98.79%,RSD分别为1.37%、0.94%（n均为6）。精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于1%。结论：该测定方法结果准确、灵敏度高、重复性好,可为完善半贝丸的质量控制标准提供依据。

四种用药剂量葛根芩连汤药效组分比较分析

目的:对葛根芩连汤四种用药剂量中药效组分葛根素-黄芩苷-盐酸小檗碱-甘草苷的含量进行测定并比较其差异。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定葛根芩连汤两种配伍比例(葛根-黄芩-黄连-炙甘草比例为8∶3∶3∶2及5∶3∶3∶2)、四种用药剂量中药效组分葛根素-黄芩苷-盐酸小檗碱-甘草苷的含量,计算各药效组分含量的比例关系。结果:葛根芩连汤配伍比例为8∶3∶3∶2时,药效组分葛根素的含量和比例相对升高,其余药效组分无显著性变化。在同一配伍比例下,不同用药剂量时,药效组分葛根素-黄芩苷-盐酸小檗碱-甘草苷的含量随用药剂量增大而增高,比例关系相对不变。结论:葛根芩连汤四种药效组分葛根素-黄芩苷-盐酸小檗碱-甘草苷的含量及比例关系因其配伍比例及用药剂量不同呈一定规律变化,可为葛根芩连汤临床应用及质量评价研究提供参考。

碱解天然人参皂苷制备单体低极性人参皂苷及其苷元的方法

该发明专利涉及由天然人参皂苷制备单体低极性人参皂苷20(S)-Rg3、20(S)-Rh2、20(S)-Rh1、20(S)-原人参二醇或20(S)-原人参三醇的方法。该专利利用惰性气体保护、游离基诱发剂为碱解天然人参皂苷创造了良好条件，从而显著降低了反应温度，提高了反应的选择性，加快了反应速度，解决了定向制备低极性人参皂苷的问题。