胶原补片上生长因子释放及对人骨髓干细胞增殖与分化的影响

背景:动物实验证明心肌细胞移植可改善心脏功能,但移植细胞效率较低,为减少移植细胞的流失,构建合适的移植载体与细胞共同移植于受体心脏已成为学界的共识。目的:观察经碳化二亚胺法处理,共价结合生长因子胶原补片上生长因子的释放情况,以及其对人骨髓干细胞增殖与分化的影响。方法:采用碳化二亚胺法将胶原补片激活后,对照组胶原补片直接保存于PBS内,实验组胶原补片继续浸于含有血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的PBS内,使其与生长因子共价结合,检测共价结合于胶原补片上生长因子的量;保存后1 d、3 d、7 d、2周、3周、4周,采用ELISA法检测上清液内血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的含量。将0.5×106的人骨髓间充质干细胞均匀接种于两组补片上,采用苏木精-伊红染色计数细胞,MTT法及Brdu增殖实验对比补片上的细胞增殖情况;以RT-PCR法检测两组细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况,SMA免疫荧光染色对比两组补片上的细胞分化情况。结果与结论:胶原补片上血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的共价结合率分别为42.4%,24.5%。保存4周内,胶原补片上的血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子均呈现持续、缓慢的释放模式。与单纯胶原补片比较,共价结合生长因子的胶原补片可在体外有效促进人骨髓间充质干细胞的增殖并抑制其分化。

苦皮藤素人工抗原的合成与鉴定

采用琥珀酸酐法合成了苦皮藤素 的衍生物苦皮藤素 -半琥珀酸酯(CA-SG),在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了苦皮藤素 的人工抗原(CA-BSA,CA-BSA2),采用紫外分光光度计法、SDS-PAGE及PAGE电泳法对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果均表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在240nm处的紫外吸光值,计算出2种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为11.6和10.7。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)人工抗原及多克隆抗体的研制

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxyn ivalenol,DON)是一种半抗原,没有免疫原性。为了制备抗DON的抗体,必须对其进行结构修饰,加大DON的分子量。本研究采用保护-去保护策略使DON的C3上的羟基与琥珀酸酐反应,使DON衍生后获得1个羧基。利用薄层色谱法跟踪反应进程,反应产物采用薄层色谱法纯化,高效液相色谱和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)分析,得出[M+H]+为397.2,确认为3-半琥珀酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-HS-DON)。3-HS-DON与载体蛋白采用碳化二亚胺法进行偶联,偶联物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,推断偶联成功,并研制出多克隆抗体。

基于乳铁蛋白介导的阿霉素纳米脂质载体的构建

目的:建立乳铁蛋白介导的阿霉素纳米脂质载体的制备方法,并对其进行表征。方法:通过对制备条件、表面活性剂种类、脂质材料及有机溶剂等单因素考察,采用乳化-溶剂挥发法制备阿霉素纳米脂质载体;用碳化二亚胺偶联法,将乳铁蛋白连接到纳米脂质载体表面,制备载阿霉素-乳铁蛋白配体纳米脂质载体;对阿霉素纳米脂质载体及乳铁蛋白介导的阿霉素纳米脂质载体形态学特性通过透射电子显微镜(TEM)检测,并采用激光散射粒径测定仪测定其粒径分布、Zeta电位和PDI。结果:根据优化工艺制备出阿霉素纳米脂质载体,并成功将乳铁蛋白偶联至该纳米脂质载体表面;外观形态良好,分散性较好,粒度较为均匀;空白纳米脂质载体粒径在194 nm左右,载药后,粒径有所增大,但变化不明显,当载药的纳米脂质载体连接上乳铁蛋白后,粒径增大到241.0 nm。结论:从TEM形态学观察和粒径的变化上均能证明乳铁蛋白的成功连接,本研究成功制备了乳铁蛋白介导的阿霉素纳米脂质载体,有望成为载阿霉素的新型肺癌靶向制剂。

头孢噻肟钠人工抗原的合成与鉴定

采用碳化二亚胺法将头孢噻肟钠(CTX)与牛血清白蛋白(BSA)以及卵清白蛋白(OVA)分别进行偶联,合成完全抗原(CTX-BSA,CTX-OVA),紫外吸收光谱(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定并测定CTX-BSA的偶联比,结果显示:与CTX(235.0 nm)、BSA(278 nm)、OVA(232.0,278.0 nm)相比,CTX-BSA(213.0,275.5 nm),CTX-OVA(223.5,274.5 nm)特征吸收峰位移明显,CTX-BSA的偶联比为5.8∶1.CTX-BSA与BSA以及CTX-OVA与OVA的SDS-PEG图谱相比,完全抗原泳动速度滞后.以CTX-BSA免疫动物并用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗血清效价,血清效价≥1∶100000.以CTX对免疫血清进行间接竞争ELISA测定,CTX可有效抑制免疫血清效价.

双酚A人工抗原的合成与表征

双酚A经过重氮化引入羧基,再经碳化二亚胺法与牛血清白蛋白偶联,成功合成了双酚A人工抗原,为其免疫分析方法的建立打下了基础。产物经红外和紫外光谱分析确证。