梅州地区临床分离耐碳氢霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学研究

目的：了解梅州地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药性，探讨其耐药机制及分子流行病学特征。方法收集梅州地区5所医院2012年1～12月临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌210株，采用K-B法检测药敏性，改良Hodge试验筛选耐碳青霉烯表型，PCR扩增IM P、VIM、OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58型碳氢霉烯酶基因，并测序。应用ERIC-PCR分型及同源性分析。结果药敏结果显示，17种药物除多粘菌素B耐药率为0．48％外，其他药敏耐药率都高于60％；改良 Hodge试验阳性菌株163株（77．62％）。扩增结果显示Bla-OXA-51的检出率为最高为94．29％（198/210），Bla-OXA-23的检出率次之为78．57％（165/210），Bla-VIM的检出率为4．29％（9/210），Bla-IM P、Bla-OXA-24、Bla-OXA-58均未被检出。210株菌株分为7个ERIC基因型，其中A型97株，B型44株，H型25株，为主要的流行克隆株。结论梅州地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药十分严重；产OXA-51、OXA-23和VIM 型碳氢霉烯酶是本地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制，且耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌存在克隆的流行。

利用Reformatsky反应合成1-β-碳氢霉烯类抗生素中间体

以(2R)-3-[(3S,4R)-1-(叔丁基二甲基硅氧基)乙基]-4-乙酰氧基氮杂环丁-2-酮为母体,2-溴乙(丙)酸酯或2-溴丙酰胺为亲核试剂,通过Reformatsky反应合成了一系列新型的1-β-碳氢霉烯类抗生素中间体——3-{(2R)-2-[(3S,4R)-1-(叔丁基二甲基硅氧基)乙基]氮杂环丁-2-酮-4-基}乙(丙)酸酯(3a～3d)和3-{(2R)-2-[(3S,4R)-1-(叔丁基二甲基硅氧基)乙基]氮杂环丁-2-酮-4-基}-N,N-二取代丙酰胺(3e,3i和3k),其结构经1H NMR和13C NMR表征,其中3a～3e和3i未见文献报道。

耐碳氢霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及耐药性分析

目的分析耐碳氢霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)临床分布及耐药性。方法收集2017年4月-2018年3月临床分离的CRE,对CRE实施药物敏感性试验,然后根据FDA标准判定药敏结果,统计分析数据结果。结果收集CRE共270株,病原菌主要以肺炎克雷伯菌为主,构成比为40.74%(110/270),其次为大肠埃希菌和褪色沙雷菌等;呼吸道是CRE的主要标本来源,占比33.33%(90/270);CRE仅对替加环素耐药率较低,对其他抗菌药物均有较高的耐药率,耐药率在30%以上。结论 CRE对大多数抗菌药物均有较高的耐药率,临床应对CRE的耐药性监测加强,并有效防控耐药菌传播。

临床药师参与耐碳青霉烯黏质沙雷菌血流感染会诊的实践

目的探索耐碳青霉烯粘质沙雷菌引起的血流感染的治疗策略。方法临床药师通过会诊两例耐碳氢霉烯黏质沙雷菌引起血流感染的患者,给予了抗感染药物方案调整。结果两例患者均通过加用左氧氟沙星的方案获得好转出院。结论左氧氟沙星对耐碳青霉烯的粘质沙雷引起的血流感染可能取得较满意的效果。

我院2012年1～6月份碳青霉烯类抗菌药物临床应用情况分析

碳青霉烯类抗生素是目前临床常用的一类抗菌药物,抗菌谱广、抗菌活性强的非典型β-内酰胺类抗生素,具有对β-内酰胺酶稳定以及不良反应少等特点,是治疗严重细菌感染的抗菌药物之一。依据《医院处方点评管理规范（试行）》卫医管发[2010]28号[1]我院从2010年底建立碳氢酶烯类抗菌药物专项点评,点评内容分为管理性评价和合理性评价两部分（表1）。

CarO蛋白与鲍曼不动杆菌耐环丙沙星的相关性研究

目的研究CarO蛋白与鲍曼不动杆菌耐环丙沙星的相关性。方法收集长沙地区四家医院的鲍曼不动杆菌56株进行药敏实验、对临床敏感株进行环丙沙星体外诱导耐药实验、PCR扩增CarO基因并测序、实时荧光定量PCR比较临床敏感株和耐药株的CarO基因表达情况。结果所收集的临床鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药率达85.7%,临床敏感株被诱导成耐环丙沙星菌株后,其CarO基因序列发生了改变,且CarO基因表达量明显降低。结论 CarO蛋白表达下降与鲍曼不动杆菌耐环丙沙星有一定的相关性。

院内产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌下呼吸道感染的调查分析

目的调查分析本院产超广谱β内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌下呼吸道感染的情况。方法收集院内肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌下呼吸道感染病例共187例,ESBLs采用双纸片扩散法检测,并做抗生素抗菌分析。结果2001年至2003年,产ESBL肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌检出率分别为22.2%、29.6%、38.2%和23.3%、28.1%、32.4%,呈逐年上升趋势。产ESBL菌对多种抗生素的耐药性较非产酶株显著升高,对β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素的耐药率均较高,但对亚胺培南的敏感性为100%,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感性为≥80%。结论治疗产ESBL肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌下呼吸道感染首选抗生素是碳氢霉烯类。ESBL产生株的分离率和耐药率逐年上升,为了控制其感染和播散,应控制使用广谱β-内酰胺类抗生素和加强院内消毒隔离措施。

环境监测用培养基的研究

目的:通过对环境监控中采集到产品最大量对试验菌回收率影响结果的研究,分析环境监控用培养基的中和剂的选择。方法:选取碳氢霉烯类产品生产线为研究对象,对环境监测项目(沉降菌、浮游菌和表面菌监测)使用的培养基中和剂的选择进行探讨。常用的中和剂有青霉素酶、卵磷脂和吐温20。结果:使用含中和剂培养基在产品最大量的干扰下,试验菌回收率均大于50.0%,大小排序为:金黄色葡萄球菌<铜枯草芽孢杆菌<绿假单胞菌<白色念珠菌<黑曲霉。选金黄色葡萄球菌作为再验证的试验菌,试验菌回收率也均能符合50%~200%。结论:含青霉素酶的胰酪大豆胨琼脂培养基,可以消除检测时所收集到产品的抑菌性干扰,能检出污染菌,适用于碳氢霉烯类产品生产线的沉降菌和浮游菌项目监测;含卵磷脂和吐温20的胰酪大豆胨琼脂培养基适用于碳氢霉烯类产品生产线的表面菌监测。

临床药师参与1例梗阻性黄疸继发血流感染患者抗感染治疗分析

本案例为一例因梗阻性黄疸入院的59岁男性患者,入院时白细胞14.23×109/L,中性粒细胞比值92.40%,经验性使用头孢尼西抗感染治疗,后感染加重,继发血流感染,白细胞26.94×109/L,中性粒细胞比值94.0%,血培养病原学报告为大肠埃希菌,先后使用亚胺培南西司他丁钠及头孢哌酮舒巴坦抗感染治疗,治疗效果满意。使用特殊级抗生素治疗3天后,患者血常规各项指标趋于正常,体温正常,临床症状整张明显好转。但是根据《抗菌药物临床应用指导原则(2015年版)》,明确碳青霉烯类抗菌药物临床应用适应证一般应为多重耐药阴性杆菌导致的重症患者,本例患者不符合指导原则使用指征,特殊级抗菌药物使用存在不合理现象。通过本例梗阻性黄疸患者感染症状进展,结合抗感染治疗过程,临床药师应参与胆道感染抗感染治疗方案确定,总结胆道感染需要临床药师引起关注的知识点,给出精准抗感染治疗方案。

产NDM-1肠杆菌科细菌的耐药机制和临床特征

目的 探讨临床分离的产NDM-1肠杆菌科细菌的耐药机制及携带blaNDM-1质粒的特征和基因环境.方法 连续收集2011年8月至2013年1月华南地区6家综合性医院临床非重复分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌48株,同时选择大肠埃希菌J53作为接合试验受体菌.对所有菌株进行碳青霉烯水解酶表型试验（改良Hodge试验）,用PCR法检测碳青霉烯类水解酶相关基因.通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）观察携带blaNDM-1质粒的大小,通过对质粒进行酶切分析质粒的同源性及不相容群分型,并对临床上产NDM-1细菌感染患者的临床特征进行分析.结果 48株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中有43株改良Hodge试验阳性.碳青霉烯酶耐药基因检测结果示,48株肠杆菌科细菌bla VIM、blaGIM和blaSPM均为阴性,19株细菌blaNDM-1基因为阳性,分别为3株大肠埃希菌、5株肺炎克雷伯菌、6株阴沟肠杆菌、3株弗劳地柠檬酸杆菌、1株产酸克雷伯菌和1株雷氏普罗威登斯菌.药敏试验结果显示,19株细菌均对亚胺培南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和哌拉西林/他唑巴坦耐药,对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为47.3％,但对阿米卡星的敏感率为68.4％.有13株产blaNDM-1细菌携带的blaNDM-1质粒均成功转移到大肠埃希菌J53中.接合子药敏试验结果显示,对亚胺培南、头孢他啶、头孢噻肟和哌拉西林/他唑巴坦仍耐药,但对阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星均敏感.基因环境结果显示,接合子J-FR90（雷氏普罗威登斯菌）所有基因为阴性,其余12株细菌携blaNDM-1质粒blaSHV、aac-（6＇）-Ib基因均为阳性.PFGE显示,携blaNDM-1质粒大小基本一致,为50 kb左右.质粒之间有相似的酶切图谱,其相似度＞80％.质粒不相容群为IncX3型.菌株传代500代后,PCR检测显示所携带的blaNDM-1质粒均未丢失.19例产NDM-1细菌感染患者中6例死亡,13例存活.结论 华南地区已出现产NDM-1的肠杆菌科细菌,主要通过IncX3型质粒在肠杆菌中传播.感染此类细菌的患者预后良好.

大肠埃希菌的耐药性变化与抗菌药物使用的相关性分析

目的探讨大肠埃希菌的耐药性变化与抗菌药物使用的相关性,为临床合理用药提供可靠数据.方法搜索滨州市中心医院2013—2018年住院患者抗菌药物使用数据库,回顾性分析住院患者用药剂量及用药频度(DDDS),对相关数据进行统计及排序,分析大肠埃希菌耐药率、产超广谱β-内酰胺酶菌株检出率,采用Pearson相关系数进行相关性分析.结果大肠埃希菌对头孢他定、头孢呋新、环丙沙星的耐药性最高,且2017年均超过60%.大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶菌株的检出率与头孢吡肟、氟喹诺酮类、碳氢霉烯类抗菌药物用量呈正相关(r=0.9643、1、0.888,P均<0.05),与氨基糖苷类、β-内酰胺类用量未见相关性(P>0.05).大肠埃希菌对环丙沙星耐药率与氟喹诺酮类药物的使用量呈正相关(r=0.9325,P<0.05),对头孢吡肟耐药率与头孢吡肟的使用量呈正相关(r=0.8635,P<0.05).结论第三代头孢菌素与氟喹诺酮类不适合用于大肠埃希菌感染的治疗.碳氢霉烯类、头孢吡肟均可应用于大肠埃希菌感染的治疗,但需严格掌握药物的适应证,把握用药剂量,且碳氢霉烯类药物适用于大肠埃希菌所致的严重感染,而β内酰胺酶抑制剂与氨基糖苷类药物是治疗大肠埃希菌感染的较佳药物.