大鼠去肌腱对骨骼肌碳酸酐酶3蛋白表达和磷酸酶活性的影响

目的探讨大鼠骨骼肌去肌腱对碳酸酐酶3(CA3)蛋白表达和磷酸酶活性的影响。方法切断大鼠同侧趾长伸肌或比目鱼肌远心端的肌腱,取术后7、14、28和56 d的两侧(去肌腱组和对照组)趾长伸肌和比目鱼肌肌肉组织,对相邻组织切片分别进行ATPase染色和CA3免疫组化染色,Western blot法分析CA3蛋白表达水平,固相膜上原位酶活性分析CA3的磷酸酶活性。结果去肌腱组比目鱼肌组织形态无显著变化,趾长伸肌的快纤维逐渐肥大。相邻切片染色显示去肌腱组比目鱼肌和趾长伸肌的肌纤维ATPase染色和CA3免疫染色对应关系不变,即CA3免疫染色着色纤维即ATPase染色的型纤维。Western blot分析表明,去肌腱组比目鱼肌和趾长伸肌的CA3蛋白表达水平高于对照组,但CA3的磷酸酶活性降低,且去肌腱组比目鱼肌的CA3的磷酸酶活性下降更为显著。结论去肌腱后骨骼肌CA3蛋白水平逐渐增加而磷酸酶活性降低。反映了骨骼肌运动对CA3影响的复杂性,提示评估运动对骨骼肌影响时需全面考察相关蛋白的表达水平和活性状态。

大白菜碳酸酐酶基因的克隆与序列分析

以大白菜雄性不育系和保持系花蕾差异表达片段EST H9为信息探针,在GenBank数据库中进行同源EST序列检索,并对亲缘关系近的同源EST序列进行拼接,得到大白菜EST H9的5-′cDNA序列。根据拼接组装所得的5-′cDNA序列,进行3-′RACE引物的设计,经RACE扩增、测序,获得了大白菜α-碳酸酐酶3基因的cDNA全长序列并将其登录到GenBank(登录号为GU143061),命名为BrACA3。该cDNA全长998 bp,编码270个氨基酸。同源分析显示该cDNA序列推导的氨基酸序列与拟南芥α-碳酸酐酶3一致性达78%。氨基酸序列分析表明,该蛋白具备跨膜功能,在第19和20个氨基酸之间存在一个信号肽序列,存在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化位点。在大白菜花蕾败育过程中α-碳酸酐酶3基因不表达,只在保持系B7的大花蕾时期表达。

生物信息学分析CA3在乳腺癌组织中的表达和对预后的影响

目的通过多种在线数据库分析碳酸酐酶3(carbonic anhydrase 3,CA3)在乳腺癌中的表达差异、预后潜力以及相关机制。方法使用GEPIA2.0和TIMER数据库资料分析CA3 mRNA在乳腺癌组织中的表达差异;使用Bc-GenExMinerv4.7数据库资料分析乳腺癌亚分类的CA3 mRNA的表达差异;使用Kaplan-Meier绘图仪、Bc-GenExMinerv4.7和PrognoScan数据库资料分析CA3 mRNA表达水平与乳腺癌患者预后的关系;使用LinkedOmics数据库资料分析CA3共表达基因及其生物学行为;使用TIMER数据库资料分析乳腺癌组织中CA3 mRNA的表达与免疫细胞浸润的关系。结果乳腺癌组织中CA3 mRNA表达水平低于正常乳腺组织(P<0.05),在ER阴性(P<0.05)、PR阴性(P<0.05)、HER2阴性(P<0.05)以及无淋巴转移者(P<0.05)其表达水平较高,且在高表达Ki67乳腺癌患者中CA3表达水平较低(P<0.05),与SBR和NPI分级也具有相关性(P<0.05);CA3 mRNA表达水平低的乳腺癌患者其总体生存率、无复发生存率和无病生存率均较低(P<0.05);筛选出的正相关前50个共表达基因有10个基因具有低风险比(P<0.05),筛选出的负相关前50个共表达基因中有11个基因具有高风险比(P<0.05);在乳腺癌组织中CA3 mRNA表达与CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞具有正相关关系(r_(s)=0.175,P<0.001;r_(s)=0.137,P<0.001),与T细胞衰竭标志物LAG3、TIM-3和PVRL2呈负相关关系(r_(s)=–0.100,P<0.01;r_(s)=–0.143,P<0.001;r_(s)=–0.082,P<0.05)。结论CA3 mRNA在乳腺癌组织中的低表达与乳腺癌的发生发展及预后存在一定的相关性,有望作为乳腺癌预后潜在标志物,可能与免疫浸润有关。