评价快速碳青霉烯酶灭活试验在肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型检测中的应用价值

目的评价快速碳青霉烯酶灭活试验(rCIM)与改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)在肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型检测中的应用价值。方法选择86株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌,使用聚合酶链式反应(PCR)检测常见碳青霉烯酶基因,比较rCIM与mCIM法检测碳青霉烯酶表型的性能。结果共检测到61株碳青霉烯酶基因型,检出率为70.9%。mCIM法发现阳性菌株61株,阴性菌株25株,rCIM法发现阳性菌株62株,阴性菌株24株。以PCR结果作为金标准,mCIM法的准确度、灵敏度和特异度分别为100.0%、100.0%和100.0%,rCIM法的准确度、灵敏度和特异度分别为98.8%、100.0%和96.0%。结论rCIM法检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型,操作简便,不需过夜培养,不需特殊的仪器或试剂,准确度较高。

南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型与基因型检测

目的了解南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及碳青霉烯酶产生情况,为CRKP感染防控提供依据。方法收集2021年1月至2022年2月临床分离的CRKP共46株,用PhoenixM50全自动微生物鉴定药敏分析仪进行药敏试验,采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行碳青霉烯酶表型筛选,用PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因。结果46株CRKP对厄他培南100%耐药,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为76.1%和78.3%,对除氨曲南外的其他β-内酰胺类药物的耐药率均为100%,对替加环素耐药率为0,对多黏菌素B(4.3%)及阿米卡星(32.6%)耐药率较低;碳青霉烯酶表型筛选试验检出单产A类碳青霉烯酶菌株33株(71.7%),单产B类金属β-内酰胺酶9株(19.6%),单产D类OXA-48型碳青霉烯酶2株(4.3%),同时产A类和B类碳青霉烯酶2株(4.3%);46株CRKP均检出碳青霉烯酶耐药基因,其中,33株(71.7%)仅携带KPC-2基因,7株(15.2%)仅携带NDM-1基因,2株(4.3%)仅携带VIM-1基因,2株(4.3%)仅携带OXA-48基因,2株(4.3%)同时携带KPC-2和NDM-1基因,未检出IMP型。结论某院分离的CRKP对常见抗菌药物具有高度耐药性,主要产KPC-2型碳青霉烯酶,应加强抗菌药物合理使用、CRKP酶型检测与感染控制,有效防范院内感染。

临床分离碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌菌株的分子流行病学及碳青霉烯酶抑制剂增强试验的应用

目的:碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)的流行已成为临床抗感染治疗的巨大挑战。本研究探讨本地区CRE耐药情况及分子流行病学特征,并评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验在临床实验室的应用价值,旨在为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:收集中南大学湘雅医院临床标本中分离的非重复性CRE,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,KB)检测菌株的药物敏感性,PCR方法检测13种碳青霉烯酶基因。使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对126株经PCR确定为产碳青霉烯酶的菌株进行表型检测,了解该方法与金标准PCR结果的符合程度。结果:704株CRE呈现出高度耐药的情况,经检测,501株为产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌(carbapenemase producing Enterobacterales,CPE);CPE菌株以肺炎克雷伯菌为主,其次为阴沟肠杆菌和大肠埃希菌;碳青霉烯酶有9种,包括肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemase,KPC)、新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)、维罗纳整合子金属酶β-内酰胺酶(Verona integronencoded metallo-β-lactamases,VIM)、亚胺培南酶(imipenemase,IMP)、苯唑西林酶48型(oxacillinase-48,OXA-48)以及罕见的亚胺培南水解β-内酰胺酶(imipenem-hydrolyzingβ-lactamase,IMI)、阿德莱德亚胺培南酶(adelaide imipenemase,AIM)、圭亚那超广谱β-内酰胺酶(guiana extended-spectrumβ-lactamase,GES)和Bicêtre碳青霉烯酶(bicêtre carbapenemase,BIC),KPC型丝氨酸酶检出率最高,为61.7%(309/501);碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测单产A类丝氨酸碳青霉烯酶、单产B类金属酶以及同时产A类和B类酶菌株的符合率均为100%。结论:湖南省长沙市CRE菌株分布非常广泛,产碳青霉烯酶(特别是KPC型丝氨酸酶)是这类细菌对碳青霉烯类药物耐药的主要机制。在湖南省长沙市首次检出了肠杆菌目细菌携带GES、IMI型基因。碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示该方法能准确检测产A类丝氨酸酶和B类金属酶的CRE,且操作简单、结果容易判读,能满足临床微生物实验室丝氨酸碳青霉烯酶和/或金属酶检测的需求,为临床精准用药提供依据。

外科ICU与内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药性、碳青霉烯酶基因检测及流行病学研究

目的分析外科ICU和内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、常见的碳青霉烯酶基因及菌株之间的亲缘性关系。方法收集2019年1月至2020年12月从某三甲医院外科ICU和内科ICU分离鉴定的CRKP非重复菌株,采用自动仪器法对菌株进行药物敏感性试验;采用mCIM联合eCIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,并通过PCR技术联合DNA测序检测碳青霉烯酶基因;利用多位点序列分型(MLST)方法对碳青霉烯酶阳性菌株进行同源性分析。结果共收集15株CRKP菌株,其中外科ICU 8株,内科ICU 7株。CRKP菌株对临床多数抗菌药物表现高耐药性,仅对替加环素表现较高敏感性。mCIM联合eCIM试验并经PCR验证,共有14株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中7株单纯携带KPC⁃2基因,主要来源于内科ICU;5株单纯携带NDM⁃5基因,来源于外科ICU;1株携带KPC⁃2基因合并少见金属酶基因来源于内科ICU;1株携带NDM⁃1基因合并OXA⁃181基因来源于外科ICU。MLST结果显示,医院ICU分离的CRKP菌株为ST11、ST15、ST163个序列型别。内科ICU优势序列为ST11(6/6),全部携带KPC⁃2基因;外科ICU优势序列为ST15(5/8),主要携带NDM⁃5基因。结论医院外科ICU和内科ICU分离的CRKP菌株耐药性高,其携带的耐药基因和优势流行菌株存在差异。应加强多重耐药菌的监测及流行病学研究,及时采取有效治疗方案和防控策略,防止耐药菌株产生和流行播散。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测的研究进展

近年来,细菌耐药已经成为公共卫生的一项重大挑战,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对抗生素的耐药形势尤为严峻。CRE的主要耐药机制是碳青霉烯酶的产生,不同菌株携带的耐药基因不同,产生的碳青霉烯酶也不同,因此,碳青霉烯酶和耐药基因的早期检测对于控制耐药菌的传播起到重要作用。目前对于碳青霉烯酶的表型检测方法有改良Hodge实验、改良碳青霉烯灭活试验、Carba NP试验、免疫学技术、质谱技术,对于耐药基因型的检测方法有实时荧光定量PCR技术、微阵列技术、等温扩增技术、测序技术,这些方法在碳青霉烯酶的检测中均具有广泛应用。了解各检测技术的优缺点对于在实际应用中选择最适检测方法是非常重要的。本文主要对CRE碳青霉烯酶检测方法的研究进展和各方法的优缺点进行综述,为CRE的检测、预防以及院内感染控制提供数据支持。

多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析

探究多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析。方法 在2021年1月至2023年11月期间,本研究对黄河中心医院采集的78株肺炎克雷伯菌(一种多重耐药菌)进行深入研究。为了探究这些菌株中是否存在碳青霉烯酶基因,进行碳青霉烯酶表型试验。随后,为了进一步验证这些基因的存在,利用聚合酶链反应对它们进行检测,并对扩增产物进行DNA测序,确保能够准确地确定它们的基因型。经分析发现这78株肺炎克雷伯菌中,有48株被明确鉴定为超广谱β内酰胺酶(ESBL)阳性菌,而另外30株则为ESBL阴性菌。这一研究结果对肺炎克雷伯菌的耐药机制提供了更为精确的认识,对于指导临床用药和防控耐药菌的传播具有重要意义。结果 经过严格的检测,发现所检测的菌株中,产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的阳性率高达61.54%。药敏分析结果显示,产ESBL菌株对第一,二代头孢菌素及青霉素类抗菌药物具有较高的耐药性。特别是针对单环类氨曲南,耐药率达到惊人的100.00%。值得注意的是,除了亚胺培南、厄他培南、美罗培南及左氧氟沙星外,产ESBL菌株相较于非产ESBL菌株具有更高的耐药性。在78株肺炎克雷伯菌中,Hodg试验阳性菌共有10株,占比12.82%;阴性菌68株,占比87.18%。在10株Hodg试验阳性菌中,仅有1株金属酶试验呈阳性。通过PCR扩增技术,成功确认10株阳性菌中的4株,其中3株为KPC型,阳性率为3.85%,另1株为IMP型,阳性率为1.28%。进一步的PCR产物测序分析显示,3株产KPC型菌株均携带KPC-2基因亚型,而产IMP型菌株携带的基因亚型为MP4。这些数据为研究和应对肺炎克雷伯菌的抗药性提供宝贵的线索和依据。结论 碳青霉烯酶在克雷伯菌中的检出率较高,尤其以KPC-2为最高,因此,在临床用药时应给予足够的关注,合理应用碳青霉烯,尽量减少耐药株,提高治疗效果,具有一定的意义。

新型抗KPC-2型碳青霉烯酶纳米抗体的筛选与鉴定

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体。通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定。结果:构建了一个库容为5.47×10^(8)cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L。且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位。结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断。

我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌碳青霉烯酶不同检测方法的比较

目的探讨评价碳青霉烯酶的不同检测方法,为实验室检测及临床诊疗提供依据。方法选用EDTA碳青霉烯灭活方法(mCIM/eCIM)检测耐碳青霉烯类肠杆菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)菌株耐药表型,以两种免疫层析碳青霉烯酶检测试剂盒、荧光定量PCR法检测CRE菌株基因型。统计学方法采用Kappa一致性检验,比较各种检测方法的临床可操作性。结果经荧光定量PCR扩增后基因测序显示73株肺炎克雷伯菌中71株携带KPC基因,2株携带NDM基因;7株大肠埃希菌中6株携带NDM基因,1株携带KPC基因;mCIM联合eCIM检测KPC的灵敏度为68.1%(49/72),检测NDM的灵敏度为100.0%(8/8);NG-test Carba 5和免疫显色试剂盒检测KPC和NDM灵敏度为100.0%、特异性为100.0%。结论NG-test Carba 5和免疫显色试剂盒检测可以成为检测我国最常见碳青霉烯酶的快速、方便的诊断工具,从而有助于控制产碳青霉烯酶的分离株在医院间的传播,为院感防控工作起到至关重要的意义。

mCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测CRE和CRPA产酶表型的方法学评价

目的综合评估改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验对碳青霉烯酶检测和分型能力。方法采用mCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测中山大学肿瘤防治中心2019~2022年临床分离并保存的47株耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)和42株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)的产酶表型,胶体金法对检测结果进行验证比对,通过卡方检验进行统计分析,并从多角度综合评价。结果mCIM检测CRE和CRPA的阳性率分别为70.2%和35.7%,碳青霉烯酶不确定占比为25.5%和11.9%。增强试验检测47株CRE:44.7%产B类金属β内酰胺酶,17.0%产A类碳青霉烯酶,不产A或B类碳青霉烯酶的菌株占38.3%;增强试验检测42株CRPA:2.4%产B类金属β内酰胺酶,90.4%产A类碳青霉烯酶,同时产A类碳青霉烯酶和B类金属β-内酰胺酶的菌株占4.8%,不产A或B类碳青霉烯酶的菌株占2.4%。两种方法检测CRE差异有统计学意义(χ^(2)=17.803,P=0.01),检测CRPA差异无统计学意义(χ^(2)=4.632,P=0.592)。胶体金法验证:产碳青霉烯酶的阳性符合率为84.6%,产丝氨酸酶的阳性符合率为80%,产金属酶的阳性符合率为100%。结论检测CRE两种方法均适用且差异不大,CRPA更推荐碳青霉烯酶抑制剂增强试验,胶体金值得推广,临床实验室应根据实际条件选择检测方法。

耐碳青霉烯酶铜绿假单胞菌的耐药性分析及碳青霉烯酶初筛试验的应用

目的了解耐碳青霉烯酶铜绿假单胞菌(CRPA)的临床分布、对抗菌药物的耐药性及携带的碳青霉烯酶基因型。方法回顾性分析北京大学深圳医院住院患者临床样本分离的61株CRPA的科室分布、标本来源及耐药情况。随机挑取36株CRPA,采用乙二胺四乙酸(EDTA)双纸片增效法和免疫层析法进行碳青霉烯酶初筛试验。结果61株CRPA主要分布ICU 24株(39.34%)、呼吸内科9株(14.75%),脑外科7株(11.48%)。其标本来源以痰液为主,共49株(80.33%)。药敏试验结果显示,亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达100.00%和78.69%,而氨基糖苷类药物阿米卡星耐药率最低,为8.20%。61株CRPA碳青霉烯酶初筛试验检测出金属β-内酰胺酶型阳性菌株3株(1株既产丝氨酸酶又产金属酶),丝氨酸酶型阴性菌株29株;CRPA耐药基因测序结果显示,有3株CRPA携带金属β-内酰胺酶blaIMP-45基因,32株CRPA携带丝氨酸酶OXA-50基因,未检出KPC、GES丝氨酸酶型及NDM、VIM金属酶型基因。结论CRPA主要分布于ICU,以痰液标本为主,其菌株多携带丝氨酸酶OXA-50基因;应针对不同科室加强医院防控措施,临床则应根据药敏试验选择抗菌药物预防CRPA传播。

三种方法筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的临床价值比较

目的探讨三种方法对肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶进行筛选时的临床价值。方法54株肠杆菌科细菌,均给予改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)联合EDTA碳青霉烯失活试验(eCIM)、酶抑制剂增强试验、快速碳青霉烯酶检测方法(rCDM)进行筛选。以聚合酶链式反应(PCR)结果为金标准,比较三种方法筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的灵敏度、特异度及检测时长。结果54株肠杆菌科细菌经PCR筛查,36株为阳性,18株为阴性。rCDM法筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的灵敏度、特异度分别为88.89%、94.44%,均高于mCIM联合eCIM法的50.00%、50.00%和酶抑制剂增强试验的66.67%、55.56%,差异具有统计学意义(P<0.05)。rCDM法的检测时长为(0.32±0.10)d,短于mCIM联合eCIM法的(1.21±0.25)d、酶抑制剂增强试验的(0.56±0.22)d,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在对肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶进行筛选时,应用rCDM筛选的效果和效率较好,值得临床推广。

基于免疫显色法分析137例儿童耐碳青霉烯革兰阴性菌的碳青霉烯酶表型

目的对免疫显色法与PCR检测耐碳青霉烯酶表型的结果进行对比分析;分析2019-2020年住院患儿耐碳青霉烯类革兰阴性菌的耐药性,为临床合理使用抗菌药物及控制院内感染提供参考。方法选用VITEK MS和VITEK 2 Compact全自动微生物质谱检测系统和全自动微生物鉴定仪对肠杆菌科细菌及非发酵菌开展鉴定和药敏试验;收集2019-2020年分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)75株,非发酵菌62株;选用PCR和免疫显色法分别检测这137株细菌的耐碳青霉烯酶表型。结果肠杆菌科细菌以blaKPC和blaNDM表型为主;非发酵菌中,鲍曼不动杆菌以blaNDM表型为主,铜绿假单胞菌以blaKPC为主。免疫显色法与PCR法检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论本院住院患儿分离的肠杆科细菌和非发酵菌的耐碳青霉烯酶表型有多种,免疫显色法检测结果与PCR检测结果一致。

碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌的耐药特点与碳青霉烯酶基因类型分析

目的:分析碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)的耐药特点与碳青霉烯酶基因类型,为临床CRPA感染患者的抗感染治疗提供参考。方法:收集2022年1月—12月苏州市立医院临床上检出的58株CRPA作为研究资料,以改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)观察CRPA是否为产碳青霉烯酶CRPA(carbapenemase-producing CRPA,CP-CRPA),比较CP-CRPA和非CP-CRPA的耐药情况,同时采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法和肠杆菌基因间重复共有序列基因聚合酶链反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR,ERIC-PCR)技术分析CP-CRPA的碳青霉烯酶基因类型。结果:58株CRPA中,mCIM表型阳性的有16株(即为CP-CRPA),而mCIM表型阴性的有42株(即为非CP-CRPA);PCR结果显示,16株CP-CRPA中携带bla_(KPC-2)基因的有13株,携带bla_(VIM-2)基因的有2株,携带bla_(IMP-4)基因的有1株;ERIC-PCR结果显示,16株CP-CRPA可分为3种基因型菌株(设为A型、B型和C型),其中A型有13株(均携带bla_(KPC-2)基因,其中9株具有克隆亲缘),B型有2株(均携带bla_(VIM-2)基因),而C型有1株(携带bla_(IMP-4)基因);药敏试验结果显示,CP-CRPA对头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦钠、氨曲南和美罗培南的耐药率显著高于非CP-CRPA(P<0.05),而对庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星和多黏菌素的耐药率与非CP-CRPA无显著差异(P>0.05)。结论:当前医院临床上检出的CRPA以非CP-CRPA为主,而在CP-CR‐PA中则以携带bla_(KPC-2)基因为多见,此外CP-CRPA与非CP-CRPA对部分抗菌药物的耐药情况存在,临床在诊治CRPA感染患者时应尽量明确其耐药特点和碳青霉烯酶基因类型,以便临床更正确地进行抗感染治疗,从而确保患者得到有效的治疗。

多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析

目的分析多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测情况。方法于2021年1月至2022年11月将南阳市中心医院分离的肺炎克雷伯菌(多重耐药菌)78株纳入研究,行碳青霉烯酶表型试验,得出碳青霉烯酶基因,再行聚合酶链反应,同时对于扩增产物做DNA测序,最终确定基因型。结果78株肺炎克雷伯菌中一共有超广谱β内酰胺酶(ESBL)阳性菌48株,ESBL阴性菌30株,产ESBL阳性率61.54%。药敏分析结果显示:产ESBL株对于第一和第三代头孢菌素与青霉素类抗菌药物耐药率较高,除了头孢替坦只有19.59%,其他都在90.00%以上;对于单环类氨曲南耐药率达到100.00%;对于亚胺培南的耐药率低,为1.01%,敏感性最高,为99.64%。除了亚胺、厄他和美罗培南以及左氧氟沙星之外,产ESBL株均较非产ESBL株耐药率高。78株肺炎克雷伯菌,Hodge试验阳性共有10株(12.82%),阴性共68株(87.18%)。在10株阳性菌中,金属酶试验阳性的仅有1株。10株Hodge试验阳性菌用PCR扩增之后确定的菌株有4株,其中的3株为KPC型,阳性率3.85%,有1株为IMP型,阳性率1.28%。经过PCR产物测序结果显示,这3株产KPC型菌株全部携带KPC-2基因亚型,1株产IMP型菌株携带的基因亚型为IMP-4。结论在肺炎克雷伯多重耐药菌中碳青霉烯酶还有较高的检出率,主要为产KPC-2型,因此在临床应用时尤其要注意,合理应用碳青霉烯类药物治疗,尽可能减少耐药菌株,使治疗效果提高,值得借鉴。

胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测中的应用评价

目的评估胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48-like)、bla_(NDM)),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果PCR结果发现25株菌携带bla_(KPC)基因、7株携带bla_(NDM)基因、4株携带bla_(IMP)基因、4株同时携带bla_(KPC+NDM)基因、1株同时携带bla_(KPC+NDM+IMP)基因,另外24株未检出相应耐药基因。41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性。24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性。mCIM试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000;检测金属酶的敏感性为68.75%、特异性为100.00%,Kappa值为0.725。胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000。结论胶体金免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用。

2015—2020年某院CRE分布、耐药性及碳青霉烯酶基因检测结果分析

目的了解碳青霉烯耐药肠杆菌(CRE)的临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因型,为CRE感染的治疗及医院感染防控提供依据。方法收集2015年1月1日至2020年12月31日福建医科大学附属第二医院临床分离的CRE菌株,采用microflex LRF MALDI-TOF型质谱微生物鉴定仪进行菌种鉴定;采用微量肉汤稀释法或琼脂稀释法检测多黏菌素B、替加环素、头孢他啶/阿维巴坦和磷霉素等16种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。采用聚合酶链反应检测常见碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48)及黏菌素耐药基因mcr-1并测序确认;采用多位点序列分型(MLST)法确定肺炎克雷伯菌的序列分型(ST)。结果38株CRE中,肺炎克雷伯菌15株,大肠埃希菌13株,其他肠杆菌目细菌10株;主要分离自痰液、血液及尿液标本;来自普内科的分离率占比最高(23.69%);38株CRE对替加环素、多黏菌素B呈现较低耐药率(5.26%、13.16%),对阿米卡星、磷霉素、米诺环素和氨曲南的耐药率均<53%,对其他药物的耐药率均>71%。最常见的碳青霉烯酶基因型是blaNDM(65.71%),其次是blaKPC(22.86%)和blaIMP(8.57%),在15株肺炎克雷伯菌中鉴定出9种不同的ST,其中ST11型7株(46.67%)。结论该院CRE仅对替加环素、多黏菌素B等少数抗菌药物呈现较好敏感性,产blaNDM型碳青霉烯酶是肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因;ST11型肺炎克雷伯菌是碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的主要流行克隆菌株,未发现该地区的克隆菌株暴发流行。

胶体金免疫层析法在碳青霉烯酶检测中的价值及应用

目的系统性评价胶体金免疫层析法在耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)碳青霉烯酶型检测中的价值及性能情况,为实验室进行CRE碳青霉烯酶快速检测提供可靠依据。方法对收集的70株无菌部位分离的CRE菌株同时使用PCR扩增、基因测序和胶体金免疫层析法进行碳青霉烯酶型检测,以测序结果为参考标准,评价胶体金免疫层析法的实验室检测性能。结果检出碳青霉烯酶基因69株,其中KPC型49株,OXA-48型12株,IMP型1株,NDM型3株,同时检出KPC和OXA-48型2株,同时检出OXA-48和NDM型1株,同时检出KPC和NDM型1株,未检出以上5种基因型1株。胶体金免疫层析法结果与测序结果相比灵敏度100%,特异度97.1%。不符合2株,其中1株为测序结果同时存在KPC和OXA-48两种型,胶体金检测结果为KPC型;1株为测序结果同时存在KPC和NDM两种型,胶体金检测结果为KPC型。结论胶体金免疫层析法作为一种新的CRE碳青霉烯酶型检测方法,操作简单,结果容易判读,能够短时间内检测出CRE中的产KPC、OXA-48、VIM、IMP和NDM型碳青霉烯酶的情况,灵敏度和特异度能够满足临床需求,可作为实验室进行碳青霉烯酶型快速检测的方法,指导临床诊治CRE。

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶研究进展

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemases,KPC)能水解几乎所有的β-内酰胺类抗生素,是临床上最重要的碳青霉烯酶,常见于以肺炎克雷伯菌为代表的肠杆菌科细菌。自首次分离以来,KPC酶已产生多种亚型,其编码基因位于质粒和转座子等可移动元件上,并迅速传播至世界各地。产KPC酶的细菌所引起的感染非常棘手,给患者带来巨大危害。该文就KPC酶的结构和流行特点、耐药特征、传播机制、感染人群分布及检测技术等方面进行综述,以期为临床合理用药及阻止产KPC酶细菌的传播提供依据。

耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的流行病学特点及药物敏感性分析

目的 通过多角度分析本地区耐药碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)的相关数据,了解其临床流行病学特征和耐药特点。方法 收集我院2017年1月至2021年9月临床分离的CRKP,对年龄、科室分布和样本类型进行分析,并从不同科室和不同年龄段多个角度分析其药敏结果。结果 CRKP在2021年的检出率从2020年的3.30%明显升高至2021年的12.23%,菌株有流行趋势;检出的疾病类型以呼吸系统疾病(41.71%)为主,其次为心脑血管疾病(18.59%);CRKP在2017年≤17岁(65.71%)是主要检出年龄段,但此后≥66岁年龄段的检出量逐年增加,2020年和2021年均高于50%,位居第一;呼吸道样本的菌株检出量最多(146株,73.37%),主要科室分布是成人及儿童ICU(74株,37.19%和24株,12.06%);CRKP在年龄段≥41岁,复方新诺明的耐药率较低(49.4%),其次为阿米卡星(54.5%和68.2%),≤17岁年龄段则是妥布霉素的耐药率最低(4.3%)。成人ICU耐药率最低是复方新诺明(47.3%),其次为阿米卡星(52.7%),儿童病区暂未发现妥布霉素耐药,阿米卡星的耐药率也不超过8.3%。结论 CRKP对氨基糖苷类抗菌药物和复方新诺明的敏感性较高,其次,对氟喹诺酮类药物的耐药率相对β内酰胺类药物较低,成人感染CRKP可首选复方新诺明抗感染,儿童可首选氨基糖苷类的妥布霉素及阿米卡星。

产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌的耐药基因检测及药敏分析

目的:研究临床分离铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶的主要基因型和药敏分布。方法:收集2020年11月~2022年1月芜湖市中医医院住院患者微生物送检标本,培养分离铜绿假单胞菌,采用最低抑菌浓度(MIC)法检测药敏结果,胶体金及PCR法检测耐药表型及基因。结果:临床分离铜绿假单胞菌共46株,科室分布构成占比以重症医学科为主(32.6%),其次为呼吸内科(21.7%);其中碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌(CRPA)分布以重症医学科构成占比最高(44.4%)。46株铜绿假单胞菌对替卡西林/克拉维酸、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、黏菌素耐药率分别为26.1%、30.4%、2.2%、19.6%、13.0%、19.6%、4.3%。9株CRPA对替卡西林/克拉维酸、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、黏菌素耐药率分别为66.7%、66.7%、11.1%、55.6%、66.7%、100.0%、0%。碳青霉烯酶阳性铜绿假单胞菌基因型主要为新德里金属β内酰胺酶(NDM)型、其次为亚胺培南酶(IMP)型。结论:铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶主要为NDM型,且耐药广泛,临床和院感应加强检测和监控。