肺炎克雷伯菌临床分布及其碳青霉烯酶基因型检测分析

目的探讨肺炎克雷伯菌临床分布特征及检测其碳青霉烯酶基因型,为完善本院分子流行病学资料提供理论依据。方法对2015年1月~2017年12月本院患者送检的临床标本进行分离培养,采用BIOFOSUN微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏分析,采用WHONET5.6进行临床分布及耐药性分析;对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行改良碳青霉烯类失活法试验(mCIM),PCR法检测碳青霉烯酶3种基因型(blaKPC、blaNDM、blaIMP),扩增产物使用BLAST软件分析;对mCIM试验结果与PCR结果进行一致性检验。结果共分离888株肺炎克雷伯菌,标本来源主要是痰液595株(67.0%)、尿液86株(9.7%)、分泌物80株(9.0%)、血液71株(8.0%);科室分布主要是新生儿科147株(16.6%)、呼吸科107株(12.0%)、普儿科103株(11.6%)、神经外科89株(10.0%)及ICU73株(8.2%)。肺炎克雷伯菌对大多数抗菌药物存在不同程度的耐药,耐药率低于15%的只有亚胺培南、美罗培南、阿米卡星及哌拉西林/他唑巴坦。对30株(3.4%)亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行mCIM试验,其中阳性29株(敏感性为96.7%);30株亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有7株扩增阳性,检出均为blaNDM基因型(敏感性为23.3%),mCIM试验结果与PCR结果一致性Kappa值为0.766;与此同时无检出blaKPC、blaIMP基因型。结论blaNDM基因型是本院肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶主要型别及对亚胺培南耐药的主要机制。

南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型与基因型检测

目的了解南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及碳青霉烯酶产生情况,为CRKP感染防控提供依据。方法收集2021年1月至2022年2月临床分离的CRKP共46株,用PhoenixM50全自动微生物鉴定药敏分析仪进行药敏试验,采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行碳青霉烯酶表型筛选,用PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因。结果46株CRKP对厄他培南100%耐药,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为76.1%和78.3%,对除氨曲南外的其他β-内酰胺类药物的耐药率均为100%,对替加环素耐药率为0,对多黏菌素B(4.3%)及阿米卡星(32.6%)耐药率较低;碳青霉烯酶表型筛选试验检出单产A类碳青霉烯酶菌株33株(71.7%),单产B类金属β-内酰胺酶9株(19.6%),单产D类OXA-48型碳青霉烯酶2株(4.3%),同时产A类和B类碳青霉烯酶2株(4.3%);46株CRKP均检出碳青霉烯酶耐药基因,其中,33株(71.7%)仅携带KPC-2基因,7株(15.2%)仅携带NDM-1基因,2株(4.3%)仅携带VIM-1基因,2株(4.3%)仅携带OXA-48基因,2株(4.3%)同时携带KPC-2和NDM-1基因,未检出IMP型。结论某院分离的CRKP对常见抗菌药物具有高度耐药性,主要产KPC-2型碳青霉烯酶,应加强抗菌药物合理使用、CRKP酶型检测与感染控制,有效防范院内感染。

鲍曼不动杆菌的同源性及碳青霉烯酶基因分析

目的:研究临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性演变、同源性、产碳青霉烯酶类型及碳青霉烯酶基因型。方法:收集临床分离的72株鲍曼不动杆菌,采用VITEK-II药敏分析系统对72株鲍曼不动杆菌进行18种抗菌药物的敏感性检测。采用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链技术(ERIC-PCR)进行基因分型和同源性比对。用改良Hodge试验检测杆菌的产碳青霉烯酶表型,对碳青霉烯酶基因blaOXA-23,blaOXA-40和blaOXA-58进行PCR扩增及序列分析。结果:72株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,为8.33%,其次是阿米卡星,对其余抗菌药物的耐药率均高达70%以上。ERIC-PCR技术将其分为7个基因型,同源性分析显示其中4个基因型在医院内流行。产碳青霉烯酶的菌株有56株,blaOXA-23扩增阳性的有61株,blaOXA-58扩增阳性的有1株。结论:鲍曼不动杆菌耐药严重,且存在院内感染传播的现象;产碳青霉烯酶的菌株较多,主要的碳青霉烯酶基因型为blaOXA-23;湖南省存在blaOXA-58阳性鲍曼不动杆菌株。

鲍曼不动杆菌耐药分析及碳青霉烯酶检测研究

目的:分析河南大学第一附属医院鲍曼不动杆菌耐药情况,并进行碳青霉烯酶检测。方法:分析河南大学第一附属医院2008年1月至2017年12月1000株鲍曼不动杆菌的耐药情况,另外在2018年1月至2018年12月本院住院患者中收集40株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)进行碳青霉烯酶基因型检测。结果:从2008年至2017年,本院鲍曼不动杆菌对头孢尼西、头孢他定、复方新诺明、环丙沙星的耐药率均逐渐升高。40株鲍曼不动杆菌有35株携带OXA-23基因条带片段,大小大约1067 bp,而VIM、IMP、OXA-24等基因没有检出特异性片段。35株OXA-23扩增阳性的PCR产物纯化后实施测序,在BLAST上比对测序结果,显示和基因库中鲍曼不动杆菌GQ268326.1基因序列99%同源,表明为OXA-23基因。结论:本院存在比较严重的鲍曼不动杆菌耐药,碳青霉烯酶检测显示鲍曼不动杆菌的耐药基因条带片段为OXA-23。

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因分析

目的了解太仓市第一人民医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对常用抗菌药物的敏感性及常见碳青霉烯类耐药基因的流行。方法收集2017年1-12月临床分离的全部CRE菌株,微量肉汤稀释法测定CRE对常用抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)特异性扩增blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA基因,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序分析,经BLAST比对确定耐药基因的基因型。结果共收集到54株CRE菌株,主要为肺炎克雷伯(57.4%,31/54)、阴沟肠杆菌(16.7%,9/54)、大肠埃希菌(14.8%,8/54)。药敏试验结果表明54株CRE菌株除了对多粘菌素、替加环素、阿米卡星的耐药率分别为0、3.7%、33.3%以外,对其他临床常用抗菌药物耐药率高达50.9%~100%;基因扩增结果表明57.4%(31/54)的菌株检出blaKPC基因;5.5%(3/54)的菌株检出blaNDM基因;其他基因未检出。结论CRE对多黏菌素和替加环素之外的大多数临床常用抗菌药物呈高度耐药;产KPC型碳青霉烯酶是CRE对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要耐药机制,基因型主要为blaKPC-2。

KPC型碳青霉烯酶基因荧光定量PCR快速鉴定

目的建立一种准确地鉴定肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因的方法。方法比对11种KPC型碳青霉烯酶基因,在保守区设计引物和探针,优化PCR反应体系,评价特异性、灵敏度和重复性,对样本分离株进行检测,通过测序、药敏实验等验证该方法的正确性。结果该方法可准确、特异地鉴定KPC型碳青霉烯酶基因,其他不携带该基因的菌株均无阳性结果;阳性质粒、纯培养细菌和模拟样本的灵敏度分别为10 copies/μL、10 CFU/mL和102CFU/mL;检测489株临床痰液样本分离菌,产KPC型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌阳性7例,大肠埃希菌阳性11例、枸橼酸杆菌阳性1例,与测序结果完全一致。结论荧光定量PCR法能准确、特异、快速地鉴定KPC型碳青霉烯酶基因,操作简便,可用于产KPC型碳青霉烯酶菌株的临床诊断及流行病学调查,同时,检测结果表明浙江地区目前以携带产KPC-2型碳青霉烯酶为主的菌株。

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌同源性及碳青霉烯酶基因分析

目的研究云南省昆明地区碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药性、同源性及碳青霉烯酶基因的携带情况。方法收集2009年10月-2010年10月云南省昆明地区临床分离的碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌215株。应用改良Hodge试验、EDTA双纸片增效试验筛选产碳青霉烯酶的菌株,PCR扩增分析碳青霉烯酶的基因型,随机扩增多态性技术(RAPD)分析菌株的同源性。结果 215株多重耐药鲍曼不动杆菌中,190株(88.4%)检出OXA-51基因;150株(69.8%)检测出OXA-23基因,其中140株OXA-23表达菌在改良Hodge试验中为阳性;12株(5.6%)检出VIM基因且EDTA协同实验均为阳性。RAPD技术将215株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌分为7个基因型,其中A型为主要克隆。结论 OXA-23和OXA-51是本地区碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的主要基因型,已出现VIM型碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,且多重耐药鲍曼不动杆菌存在院内感染的现象。