评价快速碳青霉烯酶灭活试验在肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型检测中的应用价值

目的评价快速碳青霉烯酶灭活试验(rCIM)与改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)在肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型检测中的应用价值。方法选择86株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌,使用聚合酶链式反应(PCR)检测常见碳青霉烯酶基因,比较rCIM与mCIM法检测碳青霉烯酶表型的性能。结果共检测到61株碳青霉烯酶基因型,检出率为70.9%。mCIM法发现阳性菌株61株,阴性菌株25株,rCIM法发现阳性菌株62株,阴性菌株24株。以PCR结果作为金标准,mCIM法的准确度、灵敏度和特异度分别为100.0%、100.0%和100.0%,rCIM法的准确度、灵敏度和特异度分别为98.8%、100.0%和96.0%。结论rCIM法检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型,操作简便,不需过夜培养,不需特殊的仪器或试剂,准确度较高。

mCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测CRE和CRPA产酶表型的方法学评价

目的综合评估改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验对碳青霉烯酶检测和分型能力。方法采用mCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测中山大学肿瘤防治中心2019~2022年临床分离并保存的47株耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)和42株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)的产酶表型,胶体金法对检测结果进行验证比对,通过卡方检验进行统计分析,并从多角度综合评价。结果mCIM检测CRE和CRPA的阳性率分别为70.2%和35.7%,碳青霉烯酶不确定占比为25.5%和11.9%。增强试验检测47株CRE:44.7%产B类金属β内酰胺酶,17.0%产A类碳青霉烯酶,不产A或B类碳青霉烯酶的菌株占38.3%;增强试验检测42株CRPA:2.4%产B类金属β内酰胺酶,90.4%产A类碳青霉烯酶,同时产A类碳青霉烯酶和B类金属β-内酰胺酶的菌株占4.8%,不产A或B类碳青霉烯酶的菌株占2.4%。两种方法检测CRE差异有统计学意义(χ^(2)=17.803,P=0.01),检测CRPA差异无统计学意义(χ^(2)=4.632,P=0.592)。胶体金法验证:产碳青霉烯酶的阳性符合率为84.6%,产丝氨酸酶的阳性符合率为80%,产金属酶的阳性符合率为100%。结论检测CRE两种方法均适用且差异不大,CRPA更推荐碳青霉烯酶抑制剂增强试验,胶体金值得推广,临床实验室应根据实际条件选择检测方法。

改良Hodge试验、CNPt及mCIM筛选肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值

目的探讨改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验(CNPt)及改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值。方法收集某院2016年12月—2017年11月临床分离的117株肺炎克雷伯菌,所有菌株进行药敏试验,其中碳青霉烯类耐药57株,敏感60株。以PCR法检测碳青霉烯酶基因为标准,评价3种方法检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的价值。结果 57株对碳青霉烯耐药的菌株中,PCR阳性40株,包括39株KPC,1株NDM-1,未检出其他耐药基因。MHT、CNPt、mCIM阳性率分别为87.7%(50/57)、89.5%(51/57)、91.2%(52/57)。60株敏感菌PCR均未检出碳青霉烯酶基因,3种表型筛选试验结果均为阴性。以PCR为金标准,MHT、CNPt、mCIM灵敏度分别为97.5%(39/40)、100%(40/40)和100%(40/40),特异度分别为85.7%(66/77)、85.7%(66/77)和84.4%(65/77)。结论 CNPt是一种可靠的表型筛选方法,可用于流行病学和医院感染的监测。mCIM操作简单,结果判断明确,更适合临床微生物实验室常规开展。

临床克雷伯菌属碳青霉烯酶三种检测方法的实验比较研究

目的对聚合式酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、改良碳青霉烯酶灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)+EDTA碳青霉烯酶灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)和GeneXpert三种方法检测碳青霉烯酶的性能进行了比较,为临床选择合适的检测方法提供依据。方法收集2019年1月~2021年5月临床分离的43株碳青霉烯类抗生素耐药及37株碳青霉烯类抗生素敏感克雷伯菌属菌株,用PCR法和GeneXpert试验检测碳青霉烯酶基因,mCIM+eCIM试验检测碳青霉烯酶。以PCR法为金标准,对三种试验方法检测结果进行比较。结果43株耐碳青霉烯克雷伯菌属经PCR扩增检测有40株携带碳青霉烯耐药基因,blaKPC 30株,blaNDM 8株,blaIMP 2株;37株碳青霉烯类敏感克雷伯菌属经PCR扩增均未检出碳青霉烯酶基因。与PCR法结果相比,mCIM+eCIM试验检测丝氨酸酶及金属酶表型结果敏感度和特异度均为100%,Kappa值为1;GeneXpert技术敏感度和特异度分别为94.9%,97.6%,Kappa值为0.925。结论mCIM+eCIM试验和GeneXpert与PCR结果一致程度强,但鉴于临床诊断的时效性,GeneXpert技术操作简单,耗时短,结果准确可信且易于判读,对于有条件的医院,可以用于临床微生物实验室常规开展。

131株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床特征分析

目的回顾性分析131株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床特征,通过改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM试验)与EDTA改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM试验)分析其产酶类型,为院内感染防控和优化临床用药提供依据。方法收集2017年1月1日至2018年12月31日分离的131株CRE,分析其菌种构成、标本来源、科室分布等临床特征,采用mCIM试验对其进行快速表型分析,并通过eCIM试验确定其产酶类型。结果收集到的131株CRE菌株中,以肺炎克雷伯菌(86.2%)为主,其次分别为大肠埃希菌(7.6%)、弗劳地枸橼酸杆菌(2.3%)等。标本来源以痰液(36.6%)为主,其次为尿液(17.5%)、血液(13.0%)等。科室分布以重症监护病房(37.4%)为主,其次分别为神经外科(16.8%)、特诊病房(6.2%)等。mCIM试验阳性率为84.73%,以肺炎克雷伯菌为主(91.89%),eCIM试验分析其产酶类型,其中肺炎克雷伯菌主要以产丝氨酸酶为主(80.39%),大肠埃希菌以产金属碳青霉烯酶为主(88.89%)。结论CRE临床感染现状较为严峻,应加强监测,防止并控制传播;mCIM试验与eCIM试验检测快速简便,有较高的应用价值。

肺炎克雷伯菌耐药表型及分子分型特征分析

目的探讨肺炎克雷伯菌耐药表型及通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析其分子分型,为完善肺炎克雷伯菌分子流行病学特征提供依据。方法收集2018年1-12月肇庆市第二人民医院非重复分离的51株肺炎克雷伯菌为研究对象,采用微量肉汤法进行药敏试验;采用改良产碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测CRKP表型;采用PFGE进行分子分型,建立PFGE DNA指纹图谱数据库,并运用Bionumeries6.6生物软件进行聚类分析。结果51株肺炎克雷伯菌根据耐药谱可以分为4个耐药表型,其中产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(产ESBLsKP)28株(54.9%)、耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌(CRKP)4株(7.8%)、多重耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)9株(17.7%)、高毒力肺炎克雷伯菌(HvKP)10株(19.6%)。PFGE聚类分析结果显示,51株菌株间相似度为47.8%~100.0%,可分为47个PFGE型别,PFGE型别相似度>85.0%共10株,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型具有100.0%相同PFGE图谱,可以视为4个具有分子流行病学意义的单一克隆群。结论肇庆市第二人民医院肺炎克雷伯菌耐药表型以产ESBLsKP为主,PFGE分型呈多样性,并存在院内散发感染风险,需要注意菌株型别变异趋势。