外科ICU与内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药性、碳青霉烯酶基因检测及流行病学研究

目的分析外科ICU和内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、常见的碳青霉烯酶基因及菌株之间的亲缘性关系。方法收集2019年1月至2020年12月从某三甲医院外科ICU和内科ICU分离鉴定的CRKP非重复菌株,采用自动仪器法对菌株进行药物敏感性试验;采用mCIM联合eCIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,并通过PCR技术联合DNA测序检测碳青霉烯酶基因;利用多位点序列分型(MLST)方法对碳青霉烯酶阳性菌株进行同源性分析。结果共收集15株CRKP菌株,其中外科ICU 8株,内科ICU 7株。CRKP菌株对临床多数抗菌药物表现高耐药性,仅对替加环素表现较高敏感性。mCIM联合eCIM试验并经PCR验证,共有14株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中7株单纯携带KPC⁃2基因,主要来源于内科ICU;5株单纯携带NDM⁃5基因,来源于外科ICU;1株携带KPC⁃2基因合并少见金属酶基因来源于内科ICU;1株携带NDM⁃1基因合并OXA⁃181基因来源于外科ICU。MLST结果显示,医院ICU分离的CRKP菌株为ST11、ST15、ST163个序列型别。内科ICU优势序列为ST11(6/6),全部携带KPC⁃2基因;外科ICU优势序列为ST15(5/8),主要携带NDM⁃5基因。结论医院外科ICU和内科ICU分离的CRKP菌株耐药性高,其携带的耐药基因和优势流行菌株存在差异。应加强多重耐药菌的监测及流行病学研究,及时采取有效治疗方案和防控策略,防止耐药菌株产生和流行播散。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测的研究进展

近年来,细菌耐药已经成为公共卫生的一项重大挑战,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对抗生素的耐药形势尤为严峻。CRE的主要耐药机制是碳青霉烯酶的产生,不同菌株携带的耐药基因不同,产生的碳青霉烯酶也不同,因此,碳青霉烯酶和耐药基因的早期检测对于控制耐药菌的传播起到重要作用。目前对于碳青霉烯酶的表型检测方法有改良Hodge实验、改良碳青霉烯灭活试验、Carba NP试验、免疫学技术、质谱技术,对于耐药基因型的检测方法有实时荧光定量PCR技术、微阵列技术、等温扩增技术、测序技术,这些方法在碳青霉烯酶的检测中均具有广泛应用。了解各检测技术的优缺点对于在实际应用中选择最适检测方法是非常重要的。本文主要对CRE碳青霉烯酶检测方法的研究进展和各方法的优缺点进行综述,为CRE的检测、预防以及院内感染控制提供数据支持。

南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型与基因型检测

目的了解南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及碳青霉烯酶产生情况,为CRKP感染防控提供依据。方法收集2021年1月至2022年2月临床分离的CRKP共46株,用PhoenixM50全自动微生物鉴定药敏分析仪进行药敏试验,采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行碳青霉烯酶表型筛选,用PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因。结果46株CRKP对厄他培南100%耐药,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为76.1%和78.3%,对除氨曲南外的其他β-内酰胺类药物的耐药率均为100%,对替加环素耐药率为0,对多黏菌素B(4.3%)及阿米卡星(32.6%)耐药率较低;碳青霉烯酶表型筛选试验检出单产A类碳青霉烯酶菌株33株(71.7%),单产B类金属β-内酰胺酶9株(19.6%),单产D类OXA-48型碳青霉烯酶2株(4.3%),同时产A类和B类碳青霉烯酶2株(4.3%);46株CRKP均检出碳青霉烯酶耐药基因,其中,33株(71.7%)仅携带KPC-2基因,7株(15.2%)仅携带NDM-1基因,2株(4.3%)仅携带VIM-1基因,2株(4.3%)仅携带OXA-48基因,2株(4.3%)同时携带KPC-2和NDM-1基因,未检出IMP型。结论某院分离的CRKP对常见抗菌药物具有高度耐药性,主要产KPC-2型碳青霉烯酶,应加强抗菌药物合理使用、CRKP酶型检测与感染控制,有效防范院内感染。

产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌的耐药基因检测及药敏分析

目的:研究临床分离铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶的主要基因型和药敏分布。方法:收集2020年11月~2022年1月芜湖市中医医院住院患者微生物送检标本,培养分离铜绿假单胞菌,采用最低抑菌浓度(MIC)法检测药敏结果,胶体金及PCR法检测耐药表型及基因。结果:临床分离铜绿假单胞菌共46株,科室分布构成占比以重症医学科为主(32.6%),其次为呼吸内科(21.7%);其中碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌(CRPA)分布以重症医学科构成占比最高(44.4%)。46株铜绿假单胞菌对替卡西林/克拉维酸、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、黏菌素耐药率分别为26.1%、30.4%、2.2%、19.6%、13.0%、19.6%、4.3%。9株CRPA对替卡西林/克拉维酸、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、黏菌素耐药率分别为66.7%、66.7%、11.1%、55.6%、66.7%、100.0%、0%。碳青霉烯酶阳性铜绿假单胞菌基因型主要为新德里金属β内酰胺酶(NDM)型、其次为亚胺培南酶(IMP)型。结论:铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶主要为NDM型,且耐药广泛,临床和院感应加强检测和监控。

肠杆菌目细菌常见碳青霉烯酶耐药基因多重PCR检测方法的建立及应用评价

目的探讨多重PCR检测5种常见肠杆菌目细菌碳青霉烯酶耐药基因方法的建立及应用评价。方法收集临床分离对碳青霉烯类药物耐药的非重复肠杆菌目细菌118株和对碳青霉烯类药物敏感的肠杆菌目细菌9株,以普通PCR检测blaKPC,blaNDM,blaVIM,blaIMP,blaOXA-48-like结果为参考。采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对试验菌株进行碳青霉烯酶表型检测;构建多重PCR检测5种常见碳青霉烯酶耐药基因。对多重PCR、抑制剂增强试验与普通PCR检测肠杆菌目细菌耐药的灵敏度、特异度和准确度进行比较。结果与普通PCR相比,多重PCR灵敏度为88.54%,特异度为100.00%,κ值为0.79;抑制剂增强试验灵敏度为92.71%,特异度为93.55%,κ值为0.81。在CRE的检测中,虽然多重PCR检测的灵敏度稍低于碳青霉烯酶抑制剂增强试验,但其在特异度上更具优势;二者在阳性率检测上比较差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性良好(κ=0.63)。结论该研究成功构建多重PCR体系,能快速、准确检测肠杆菌目细菌中5种常见碳青霉烯酶耐药基因,与临床现行的碳青霉烯酶抑制剂增强试验相比,二者对肠杆菌目细菌耐药检测具有良好的一致性,能极大缩短检测时间。

MAST D73C组合纸片法和PCR基因检测儿童碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌菌株中碳青霉烯酶的价值

目的探讨儿童碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)菌株中碳青霉烯酶与其分型的检测方法和价值,本研究所用检测方法包括MAST D73C组合纸片法、聚合酶链式反应(PCR)基因检测法。方法MAST D73C组合纸片法与PCR基因检测结果显示,分离出CRE菌株碳青霉烯酶基因菌株数量为240株,所选菌株为2018年6月至2019年10月采集,针对MAST D73C在碳青霉烯酶中的检测灵敏度与特异度进行分析。结果PCR基因检测中,240株CRE菌株中检测到碳青霉烯酶基因菌株数量为233株,MAST D73C组合纸片MβL酶检出率达47.16%、OXA-48酶检出率达27.07%、KPC酶检出率达8.73%,无法解释其他17.03%细菌的抑菌圈结果。以PCR结果为金标准,以MAST D73C分别计算MβL酶及OXA-48酶的灵敏度和特异度,灵敏度>80%,特异度>95%。通过Youden指数与Kappa值可知,区分产MβL酶及OXA-48酶菌株均具有较好的一致性和真实性。KPC酶特异度达98.85%,灵敏度为32.14%,一致性及真实性均较差。通过MAST D73C组合纸片法总计检出CRE 39株,无法对所得结果进行准确解释,PCR检测结果确认CRE产KPC酶总计31株、产OXA-48酶CRE数量为8株。若B-A、C-A及D-A不足5 mm,E超过10 mm,对法罗培南耐药时可判定为产KPC酶,可使KPC酶检测灵敏度得到显著提高。结论儿童分离CRE菌株所检出的碳青霉烯酶类型包括NDM-1酶及OXA-232酶,MAST D73C组合纸片法可以简便、快速、准确地对碳青霉烯酶进行检测,还能够迅速分型,而且操作简单,值得应用。

碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌的耐药特点与碳青霉烯酶基因类型分析

目的:分析碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)的耐药特点与碳青霉烯酶基因类型,为临床CRPA感染患者的抗感染治疗提供参考。方法:收集2022年1月—12月苏州市立医院临床上检出的58株CRPA作为研究资料,以改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)观察CRPA是否为产碳青霉烯酶CRPA(carbapenemase-producing CRPA,CP-CRPA),比较CP-CRPA和非CP-CRPA的耐药情况,同时采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法和肠杆菌基因间重复共有序列基因聚合酶链反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR,ERIC-PCR)技术分析CP-CRPA的碳青霉烯酶基因类型。结果:58株CRPA中,mCIM表型阳性的有16株(即为CP-CRPA),而mCIM表型阴性的有42株(即为非CP-CRPA);PCR结果显示,16株CP-CRPA中携带bla_(KPC-2)基因的有13株,携带bla_(VIM-2)基因的有2株,携带bla_(IMP-4)基因的有1株;ERIC-PCR结果显示,16株CP-CRPA可分为3种基因型菌株(设为A型、B型和C型),其中A型有13株(均携带bla_(KPC-2)基因,其中9株具有克隆亲缘),B型有2株(均携带bla_(VIM-2)基因),而C型有1株(携带bla_(IMP-4)基因);药敏试验结果显示,CP-CRPA对头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦钠、氨曲南和美罗培南的耐药率显著高于非CP-CRPA(P<0.05),而对庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星和多黏菌素的耐药率与非CP-CRPA无显著差异(P>0.05)。结论:当前医院临床上检出的CRPA以非CP-CRPA为主,而在CP-CR‐PA中则以携带bla_(KPC-2)基因为多见,此外CP-CRPA与非CP-CRPA对部分抗菌药物的耐药情况存在,临床在诊治CRPA感染患者时应尽量明确其耐药特点和碳青霉烯酶基因类型,以便临床更正确地进行抗感染治疗,从而确保患者得到有效的治疗。

多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉稀酶耐药基因及共同源性分析

探讨多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因及共同源性分析。方法 选择2022年1月至2023年6月耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌作为研究对象,另选2021年6月至2021年12月期间的耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌作为对照,统一对其进行抗菌药物敏感实验,并分析菌株的同源性。结果 研究结果显示,2022年以后鲍曼不动杆菌耐药性显著高于2021年,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。RAPD分型结果显示,耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌可分为6个基因型,其中A型的占比情况最大。结论 OXA-51基因是本次实验中耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌的主要基因,存在院内交叉感染现象。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药基因检测及同源性分析

目的探讨耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistan Escherichia coli,CREco)的耐药基因分布情况,并进行同源性分析,为细菌感染的治疗和预防其传播提供理论依据。方法自2016年1月至2022年7月济宁医学院附属医院住院患者分离出的大肠埃希菌1311株中筛选出CREco 16株。最低抑菌浓度法进行药敏试验,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增碳青霉烯酶基因及喹诺酮类耐药基因,对阳性基因进行测序比对,用脉冲场凝胶电泳检测菌株间的同源性。结果16株CREco仅对个别抗生素敏感,对多数抗生素表现为耐药,其中对β-内酰胺类和喹诺酮类耐药率最高。经PCR扩增发现,100%携带碳青霉烯酶基因,包括NDM-1型13株,NDM-5型3株,KPC-2型8株,未检测出OXA、IMP和VIM。喹诺酮类耐药基因中,5株扩增出qnrS基因,14株扩增出aac(6’)-Ib基因。脉冲场凝胶电泳分型共获得12种谱型,C谱型最多,为流行谱型。结论CREco耐药形势严峻。碳青霉烯酶以NDM-1最常见,其次为KPC-2。喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib阳性率最高。脉冲场凝胶电泳分型呈现多态性,C谱型在院内存在流行趋势。应加强CREco耐药基因的监测,采取感染控制措施以帮助遏制耐药菌的传播。

革兰阴性杆菌血流感染的病原菌分布、耐药性及碳青霉烯酶基因的检测与分析

目的调查复旦大学附属华山医院革兰阴性杆菌血流感染的病原菌分布情况、对常用抗菌药物的耐药性以及碳青霉烯酶基因的流行现状。方法收集2012年3月1日—2013年2月28日该院血流感染分离获得的132株非重复革兰阴性杆菌菌株,按统一方案采用纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验,共筛选出33株碳青霉烯类不敏感菌株。采用PCR方法检测KPC、NDM、VIM、IMP、GIM、SPM、OXA23、OXA24、OXA51、OXA58型碳青霉烯酶基因。结果革兰阴性杆菌血流感染前5位的病原菌依次为克雷伯菌属(28.0%,37/132)、大肠埃希菌(26.5%,35/132)、不动杆菌属(13.6%,18/132)、铜绿假单胞菌(9.8%,13/132)和肠杆菌属(7.6%,10/132)。33株碳青霉烯类不敏感革兰阴性杆菌中有75.8%(25/33)的菌株检测出碳青霉烯酶基因,KPC、OXA23、OXA51、NDM型碳青霉烯酶基因检出率分别为42.4%(14/33)、30.3%(10/33)、30.3%(10/33)、3.0%(1/33),未检测到其他类型碳青霉烯酶基因。13株对碳青霉烯类药物不敏感的肺炎克雷伯菌100%携带KPC型耐药基因,10株对碳青霉烯类药物不敏感的鲍曼不动杆菌100%携带OXA23、OXA51型基因。结论革兰阴性杆菌血流感染中肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药形势严峻。携带KPC、OXA23型碳青霉烯酶基因是导致肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。

重症监护病房耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型的检测

目的分析重症监护病房(intensive care unit,ICU)临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的基因型,为临床的防控提供依据.方法收集云南省第二人民医院ICU临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌138株,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51、ISAba1-oxa-23、ISAba1-oxa-51共五种碳青霉烯酶基因.结果在138株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中,OXA-51型的检出率是97.1%;OXA-23型的检出率是81.3%;ISAba1-oxa-23基因的检出率是65.94%;ISAba1-oxa-51基因的检出率是21.0%.OXA-51+OXA-23+ISAba1-oxa-23型碳青霉烯酶基因表达模式的检出率为44.7%;其次是OXA-51+ISAba1-oxa-51+OXA-23+ISAba1-oxa-23型表达模式,检出率为21.0%.结论OXA-51+OXA-23+ISAba1-oxa-23型碳青霉烯酶基因表达模式是云南省第二人民医院重症监护病房耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的主要表达模式;产OXA-23型碳青霉烯酶是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因.

低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的筛选及耐药基因检测

目的:了解临床分离碳青霉烯类表型敏感的肠杆菌科细菌碳青霉烯酶耐药基因携带情况。方法:VITEK-2系统进行药物的最低抑菌浓度(MIC)检测;改良Hodge试验(MHT)筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌;EDTA双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶(MBL);PCR法检测相关耐药基因。结果:115株实验菌有12株MHT阳性;12株阳性菌中,3株EDTA双纸片增效试验阴性,9株阳性,这9株菌除阿米卡星、多粘菌素B敏感外,其他抗菌药物均呈耐药,含I类整合子,且检出IMP-4(blaIMP-4)和IMP-1(blaIMP-1)型的MBL基因,未检出KPC型碳青霉烯酶基因及其他MBL基因。结论:厄他培南对肠杆科细菌产碳青霉烯酶的筛选比亚胺培南、美洛培南敏感;经MHT筛选阳性的,潜在产碳青霉烯酶的肠杆科细菌,应进一步用基因检测法确认。

鲍曼不动杆菌的耐药情况及碳青霉烯酶基因检测

了解佳木斯大学附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶包括苯唑西林酶和金属酶相关耐药基因分布情况,为临床抗菌药物的合理选择提供依据。2013年9月至2014年12月使用VITEK-II全自动微生物鉴定/药敏测试系统筛选出佳木斯大学附属第一医院临床标本鲍曼不动杆菌69株;采用多重PCR方法检测鲍曼不动杆菌携带的碳青霉烯酶相关耐药基因16S rRNA、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP、VIM、SIM,并对耐药基因扩增的阳性产物进行DNA序列分析。69株AB对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为36.2%、37.68%,对其他抗菌药物的耐药率均高于50%。6种耐药基因的检测结果为69株(100%)携带OXA-51基因,32株(46.4%)携带OXA-23基因,17株(24.6%)携带OXA-24基因,5株(7.2%)携带OXA-58基因,1株(1.4%)携带IMP基因。25株碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌中,22株(88%)携带OXA-23,1株(4%)携带OXA-58,10株(40%)携带OXA-24,6株(24%)同时携带OXA-23、OXA-24。DNA序列分析结果显示:OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58分别与NCBI的序列同源性均为99%。产OXA-23型碳青霉烯酶可能是佳木斯大学附属第一医院鲍曼不动杆菌对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药的主要原因,另外佳木斯大学附属第一医院存在OXA-24型耐药基因鲍曼不动杆菌的区域性流行。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌基因型检测研究

目的 分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)不同基因型耐药性及临床特征差异,为临床预防及治疗CRKP感染提供参考。方法 回顾性分析我院2018年9月—2021年8月收治的56例分离出CRKP菌株患者的临床资料,检测其耐药基因,并分析不同基因型CRKP的耐药性和临床特征。结果 56株CRKP中检出47株KPC型耐药基因(83.93%)、9株NDM-1型耐药基因(16.07%),未检出IMP、VIM以及OXA-48耐药基因;耐药性分析结果发现,KPC和NMD-1型耐药基因对氨曲南耐药性差异有统计学意义(P<0.05);KPC和NMD-1型耐药基因对应患者年龄、性别、收治科室、标本来源分布情况、合并基础疾病、抗菌药物使用时间、3种及以上抗菌药物联用史、住院时间以及侵入性操作比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CRKP基因型主要以KPC型最常见,不同基因型CRKP临床特征无明显差异,不同基因型CRKP对常用抗菌药物耐药性存在异质性,临床抗感染治疗需结合基因检测及耐药性分析制定合理方案。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测方法及临床应用与治疗的研究进展

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶通常划分为A类、B类和D类,不同类型的碳青霉烯酶的治疗方案有所不同,故对碳青霉烯酶快速准确的检测以及抗菌药物的选择对临床治疗及患者预后十分重要。本文对肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的检测方法以及抗菌药物进行总结整理,对其优缺点进行比较,旨在为临床监测及检测方法的制定提供思路。

鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因检测

目的 探讨鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumannii，A.baumannii）耐药性及碳青霉烯酶相关耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58的分布情况，为临床抗菌药物的合理选择提供依据。 方法 2016年1至月2017年12月收集临床标本（包括痰、分泌物、脑脊液、血液、咽拭子等标本），使用VITEK2compact全自动微生物鉴定/药敏测试系统检测出371株A.baumannii;用改良Hodge试验，进行碳青霉烯酶检测。采用PCR方法检测A.baumannii携带碳青霉烯酶相关耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、OXA-143，并对耐药基因扩增的阳性产物进行DNA序列分析。 结果 本次研究共检出371株ABA，耐药率超过90%的有一代头孢唑林（99%）、第二代头孢呋辛（95.5%）和第三代头孢曲松（98.5））以及氨曲南（98%）。替加环素、阿米卡星及多粘菌素B显示较低的耐药率，分别是14.1%、7.3%及0.5%。Hodge试验阳性228株，检出率占87.7。选取46株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌作为研究对象，40株（86.96%）携带OXA-23，18株（39.13%）携带OXA-24，1株（2.17%）携带OXA-58，其中13株（28.26%）同时携带OXA-23、OXA-24。未检测到OXA-51及OXA-143。 结论 A.baumannii耐药性强，OXA-23型基因可能是A.baumannii对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药的主要原因，携带多种耐药基因是导致A.baumannii对多种常用抗菌药物耐药的重要原因。

6株携带blaIMP-4基因耐碳青霉烯香坊肠杆菌耐药性研究

目的探讨新生儿重症监护病房中香坊肠杆菌(Enterobacter xiangfangensis,E.xiangfangensis)耐药特点。方法收集2019年12月至2020年2月间新生儿重症监护病房分离的6株E.xiangfangensis,采用肉汤稀释法和纸片扩散法检测其耐药性,采用illuminanovaseq 6000150 bp多长双末端测序测略进行全基因组测序,检测其耐药基因,同时收集耐药菌株感染患儿的临床资料。结果6株E.xiangfangensis来自5例早产儿,其中1例为痰培养阳性,考虑为定植,其余4例均为败血症,4例败血症患儿均具有感染的高危因素,1例早产儿住院期间出现2次E.xiangfangensis败血症。药敏试验6株E.xiangfangensis对替加环素、阿米卡星、复方新诺明均敏感,1株对环丙沙星敏感,5株对哌拉西林他唑巴坦敏感,4株对头孢哌酮钠舒巴坦敏感,2株对米诺环素敏感,所有菌株均对美罗培南等碳青霉烯类药物耐药或中介。耐药基因检测6株均携带β-内酰胺类耐药基因blaIMP-4、laACT-55、喹诺酮类耐药基因qnrS 1,5株携带氨基糖苷类耐药基因aac(6')-Ib4,5株同时携带喹诺酮类耐药基因qnrS 1和磺胺类耐药基因sul 1,5株同时携带喹诺酮类耐药基因oqxA 9和oqxB 9。多位点序列分型提示6株E.xiangfangensis序列型均为148型。结论E.xiangfangensis对碳青霉烯类药物耐药不一定是耐碳青霉烯药物基因表达引起,需根据细菌的耐药特点合理选择抗生素,减少耐药菌的产生,而不是优先选择碳青霉烯类抗生素。

江西地区鲍曼不动杆菌NDM-1及其他碳青霉烯酶基因检测研究

目的了解江西地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)NDM-1及其他碳青霉烯酶基因携带情况,为预防和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2015年1月—2016年6月江西地区3所三级甲等医院临床标本分离的CRAB共64株,采用K-B法测定其对常用抗菌药物的敏感性,采用改良Hodge试验和EDTA协同试验筛查CRAB产碳青霉烯酶和金属酶的情况,采用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,对产NDM-1的鲍曼不动杆菌进行接合试验。结果 CRAB对氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星耐药率高达95.31%、98.44%、90.63%、54.69%。CRAB菌株改良Hodge试验阳性率为76.56%,EDTA协同试验阳性率为96.88%。PCR扩增结果显示,87.50%(56株)的CRAB携带OXA-23、VIM-1基因,18.75%(12株)携带SIM基因,3.13%(2株)携带OXA-24基因,26.56%(17株)携带NDM-1基因。携带NDM-1基因的CRAB均来自于南昌大学第一附属医院,其中64.70%(11/17)表现为泛耐药。接合试验结果显示,携带NDM-1基因的菌株可将NDM-1基因传递给受体菌大肠埃希菌J53,使其获得对亚胺培南的耐药性。结论该地区临床分离的CRAB耐药率高,碳青霉烯酶基因以OXA-23、VIM-1基因型为主,检出NDM-1基因阳性CRAB,NDM-1基因可能存在医院内的克隆传播,应尽快采取有效措施预防和控制NDM-1基因阳性CRAB的传播。

可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的初步应用

目的建立可视化环介导等温扩增(LAMP)方法检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2),并初步评估其应用价值。方法设计3对特异性的LAMP引物,建立25μL的LAMP检测体系并进行优化,通过与聚合酶链反应(PCR)进行比较,分析其特异性和敏感性。结果成功建立了检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的可视化LAMP方法。63℃保温40 min可实现对bla_(KPC-2)基因的快速检测。特异性与PCR一致,敏感性比PCR高约10倍。采用新建立的可视化LAMP方法检测出25株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南其中之一耐药的肺炎克雷伯菌中有12株携带bla_(KPC-2)基因,31株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南敏感的肺炎克雷伯菌中有5株携带bla_(KPC-2)基因,二者比较差异有统计学意义(P=0.009 9)。结论建立的可视化LAMP方法可作为检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的方法,但尚不能替代体外药物敏感性试验。

基于免疫显色法分析137例儿童耐碳青霉烯革兰阴性菌的碳青霉烯酶表型

目的对免疫显色法与PCR检测耐碳青霉烯酶表型的结果进行对比分析;分析2019-2020年住院患儿耐碳青霉烯类革兰阴性菌的耐药性,为临床合理使用抗菌药物及控制院内感染提供参考。方法选用VITEK MS和VITEK 2 Compact全自动微生物质谱检测系统和全自动微生物鉴定仪对肠杆菌科细菌及非发酵菌开展鉴定和药敏试验;收集2019-2020年分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)75株,非发酵菌62株;选用PCR和免疫显色法分别检测这137株细菌的耐碳青霉烯酶表型。结果肠杆菌科细菌以blaKPC和blaNDM表型为主;非发酵菌中,鲍曼不动杆菌以blaNDM表型为主,铜绿假单胞菌以blaKPC为主。免疫显色法与PCR法检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论本院住院患儿分离的肠杆科细菌和非发酵菌的耐碳青霉烯酶表型有多种,免疫显色法检测结果与PCR检测结果一致。