磁分离免疫法测血HCG出现后带现象1例

患者女 32岁.因自然流产后18月,停经4月,腹胀腹痛2周,于2000年12月19日来我院就诊.B超示子宫15.2cm×14.4cm×7.6cm,内膜厚0.3cm,宫壁探及多处大小不等的实性稍强回声团块,直径3.0cm～3.5cm,边界清楚,子宫右后方查见5.4cm×4.4cm×3.1cm的囊性占位.壁稍厚,欠光滑,内见多个分隔,子宫直肠陷凹查见2.0cm液性暗区,左附件未见占位,超声诊断:子宫增大,宫内实性占位,结合病史考虑绒毛膜癌(以下简称绒癌);右附件囊性占位,考虑黄素囊肿;尿HCG(-),磁分离免疫法查血HCG为296.5mIU/ml,以绒癌收入院.

磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用

目的探讨磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)用于检测日本血吸虫病血清抗体的效果。方法用MPAIA测定日本血吸虫病血清中特异性抗体。结果用MPAIA检测384例非血吸虫病流行区阴性血清,均为阴性;检测61例急性血吸虫病人血清、788例慢性血吸虫病人血清、32例晚期血吸虫病人血清其阳性率分别为100%、94.2%、90.6%;检测14例并殖吸虫病人、13例囊虫病人、9例旋毛虫病人血清,均未发现交叉反应。结论MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度,可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测,该方法具有广阔应用前景。

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。

磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立

建立磁分离酶联免疫法定量检测人白细胞介素 4 (IL - 4 )的方法。用异硫氰酸荧光素 (FITC)和碱性磷酸酶(AP)分别标记识别不同表位的两种抗IL - 4单克隆抗体 (mAb) ,用抗FITC多抗或mAb包被免疫磁珠。结果显示 :检测标准品浓度在 0 - 3ng/mL范围内线性关系良好 ,敏感性达 10pg/mL ,平均回收率为 10 1.7% ,批内批间CV均为 3.6 % ,与ELISA比较相关系数为 0 .912 4。此法所需样本量少 ,方法稳定 ,敏感性高和特异性强 ,又无放射性污染 ,在临床检验和基础研究中有较大应用价值。

磁分离酶联免疫法检测AFP

目的建立检测甲胎蛋白(AFP)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)。方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗FITC mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法。结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2 IU/ml,线性范围0.2-510 IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%。添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%。与雅培AxSYM及i2 000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985。结论MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒。

磁分离酶联免疫法测定多囊卵巢综合征患者血清性激素的结果分析

目的 :研究磁分离酶联免疫测定 ( MAIA)技术在临床诊断多囊卵巢综合征 ( PCOS)中的应用价值 ,建立我科生殖内分泌的临床正常参考值范围。方法 :采用 MAIA技术检测 72例 PCOS患者及 10 0例对照的血清性激素水平 ,并对其结果进行分析。结果 :早卵泡期性激素 6项的 95 %正常参考值范围 :促卵泡生成素 ( FSH) :3 .3 9～ 11.3 5 IU/L ,促黄体生成素 ( LH) :1.62 IU/L～ 5 .18IU/L 泌乳素 ( PRL) :3 .62 μg/L～ 2 3 .72 μg/L,雌二醇 ( E2 ) :10 .61ng/L～ 3 4.5 3 ng/L ,孕激素 ( P) :0 .3μg/L～ 2 .82μg/L ,睾酮 ( T) :0 .0 2μg/L～ 0 .5 2μg/L ,PCOS患者与对照组比较 ,血清 LH、T水平明显增高。结论 :用 MAIA法检测血清性激素水平 ,对 PCOS的诊断有较高的可靠性。

磁分离酶联免疫测定男性生殖激素方法性能评价

目的 :对磁分离酶联免疫测定 (MAIA)法测定男性生殖激素的方法学性能作临床和实验室评价。方法 :将本法与放射免疫测定 (RIA)法进行对比研究。结果 :MAIA法测定促卵泡生成激素 (FSH)、促黄体生成素 (LH)、睾酮 (T)和催乳素 (PRL)的线性分别为 0～ 15 0IU L、0～ 2 0 0IU L、0 .5～ 5 5ng L、0～ 2 5 0ng L ;最小检测量分别为 0 .3mIU ml、0 .2 5mIU ml、4 μIU ml、4 μIU ml;批内CV <4 % ,批间CV <8% ,平均回收率偏差 <5 % ,互感率 <3% ;与RIA法比较 ,两法相关系数分别为 0 .982 6、0 .85 5 0、0 .85 12、0 .9831。临床质控观察 6 0d ,质控稳定 ;成年健康男性 (n =95 )血清FSH、LH、T、PRL的参考范围分别为 :0 .2 5～ 10 .18IU L、0 .33～ 8.95IU L、0 .5 4～ 11.11ng L和 8.77～ 33.4 3ng L。结论 :用MAIA法测定男性生殖激素 ,方法灵敏 ,结果可靠 ,符合临床要求。

磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究

目的 ：建立检测鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag）的磁分离酶联免疫法（magnetic affinity immunoassay,MAIA）。方法：采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）分别标记识别不同表位的两种抗SCC-Ag单克隆抗体（mAb）T17和H390,以耦联羊抗FITCmAb包被的免疫磁珠作为固相载体,APS-5作为显色底物,建立检测SCC-Ag的磁分离酶联免疫法。结果：成功实现了用磁分离酶联免疫法对SCC-Ag的定量检测,其检测灵敏度为0.22μg/mL,线性范围0-50μg/mL,批内CV 7%-8%,批间CV 6%-9%。添加回收率为97%。与雅培AxSYM微粒子化学发光检测结果对比,相关系数为0.973。结论：磁分离酶联免疫法的检测结果接近进口同类试剂的检测结果,为开发一种高质量的SSC-Ag测定试剂盒提供实验数据。

磁分离酶联免疫分析与ELISA法在梅毒抗体筛检中的应用

目的比较磁分离酶联免疫分析法(MAIA)与ELISA法在无偿献血者梅毒抗体筛检中的应用价值。方法以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。分别采用MAIA及ELISA法对评价标本作盲法筛检,以临检中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。分析真实性与可靠性,并评价2种试剂的Cut-off值的合理性。结果MAIA及ELISA法的灵敏度分别为92.3%,100.0%,特异度分别为99.1%,100.0%,约登指数分别为0.91和1.00,重复试验符合率均为100.0%。结论提高MAIA法的灵敏度与特异度,将具有更大的临床应用价值。

应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态

由于放射性免疫法(RIA)[1]检测甲状腺激素存在放射性污染及标记物125I半衰期短等不利因素,而采用非放射性免疫分析法,如磁分离酶联免疫法(MAIA)检测日益受到临床及检验科室的重视和倡导[2].为观察MAIA法测定甲状腺功能5项的临床实用价值,我们对200例甲状腺疾病患者进行测定,结果报告如下.

免疫磁分离-两重荧光定量PCR法快速检测鲜猪肉中金葡菌和志贺氏菌

本文即尝试以实验方式,利用免疫磁分离-两重荧光定量PCR法对鲜猪肉样本中的金葡萄球菌以及志贺氏菌进行检测。结果显示:免疫磁分离-两重荧光定量PCR法能够在6.0 h时间内完成对鲜猪肉样本中金葡萄球菌以及志贺氏菌的检测,具有检测过程快速性、检测结果灵敏度高、特异性高以及准确可靠等诸多优势,可作为食品样本中常见食源性致病菌的常规检测方法之一,加以推广应用[1]。

应用磁分离酶联免疫技术检测抗日本血吸虫虫卵抗体

目的建立检测日本血吸虫病患者血清中特异性虫卵抗体的磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)。方法采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Sj-SEA)为检测抗原,标记羊抗FITC抗体的磁微粒为固相载体,碱性磷酸酶(ALP)标记羊抗人免疫球蛋白G(IgG)作为酶标二抗,以单磷酸酚酞溶液为底物,检测日本血吸虫病患者血清中虫卵特异性抗体。结果用磁微粒分离酶联免疫法检测日本血吸虫虫卵抗体,阳性检出率为96.7%(116/120),与旋毛虫、并殖吸虫、嚢尾蚴等其他寄生蠕虫抗体无交叉反应现象,检测试剂4℃可保存12个月。灵敏度参考品的灵敏度为1∶1600,精密度参考品的精密度(CV)<10%。结论磁微粒分离酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、技术先进,试剂保存时间长等特点。

日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用

目的建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体。方法将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析法纯化后,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测分析rSj26。将纯化后的rSj26与磁珠偶联(100μg抗原/mg磁珠),优化反应条件,建立rSj26-MEIA方法。用rSj26-MEIA和ELISA分别检测58份低密度感染的日本血吸虫病患者血清、30份非血吸虫病流行区阴性血清和6份并殖吸虫病患者血清,并比较两者的检测结果。结果纯化后的重组蛋白含量测定结果显示,rSj26浓度为2.5 mg/ml。SDS-PAGE结果显示,rSj26相对分子质量约27 000,主要以可溶性的形式表达。Western blotting结果显示,rSj26可被感染日本血吸虫的兔血清和小鼠血清特异识别。rSj26-MEIA优化反应条件结果显示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10μg)、血清稀释度为1∶100时,阳性血清平均吸光度(A_550值)/阴性血清平均A_550值(P/N)最大,为3.97。rSj26-MEIA和rSj26-ELISA检测低密度感染日本血吸虫病患者血清的结果显示,两者的阳性检出率均为24.14%(14/58),两者P/N分别为3.61和2.56;相关分析结果表明,两者检测的抗体A_550值间存在正相关关系(r=0.658,P<0.01)。rSj26-MEIA和ELISA检测6例并殖吸虫病患者血清和30例非血吸虫病流行区阴性血清,均未出现阳性反应。结论rSj26-MEIA可作为检测低密度感染日本血吸虫血清抗体的一种新技术。

不同稀释液对血清HCG测定的影响

目的:探讨不同稀释液对高浓度血清HCG测定结果的影响。方法:将不同孕妇的血清分别用专用稀释液、混合低值血清、蒸馏水、生理盐水稀释,然后用磁分离酶联免疫法测定HCG值。结果:血清标本用蒸馏水、混合低值血清稀释后测得的HCG值与用专用稀释液稀释后测得的HCG值比较存在显著性的差异,而生理盐水与专用稀释液比较差异无统计学意义。结论:除专用稀释液外,生理盐水是磁分离酶联免疫法测定血清HCG的首选稀释液。

MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测日本血吸虫抗体效果比较

目的：评价磁微粒分离酶联免疫法（MPAIA）、日本血吸虫抗体检测试纸条（DIGFA）、间接红细胞凝集试验（IHA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）平行检测日本血吸虫抗体效果。方法：采用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA，分别对荆州市血吸虫病专科医院每日收集的血吸虫病检查血清标本进行平行检测，并对检测结果进行统计分析。结果：对医院1321例标本，采用MPAIA与DIGFA、IHA、ELISA进行平行检测，阳性率分别为36．34％、27．93％、33．23％和20．29％，差别有统计学意义（P＜0．01），MPAIA阳性率高于其他3种方法。结论：MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测血吸虫血清抗体的阳性检出率较为符合，MPAIA适用于临床检验和现场调查。