磁小体介导制备转基因猪模型

目的以磁小体（BMP）和聚乙烯亚胺（PEI）为载体，通过睾丸注射精子介导法建立转基因猪模型。方法将实验室保存的脂蛋白磷脂酶A2（Lp．PLA2）绿色荧光蛋白（GFP）质粒与BMP和PEI混匀，制备BMP—PEI-PLA2-GFP混合物，采用睾丸多点注射法接种巴马小型猪，于接种后第2周、4周、6周至第20周采集精液，分别用RT—PCR和免疫荧光鉴定外源基因的表达情况；取阳性精液，对母猪实施人工授精；PCR及RT—PCR对所产仔猪进行鉴定。结果精液中GFP基因于接种后第4周首现并持续至第16周；荧光显微镜检查可观察到GFP蛋白主要表达于精子项体后区及精子尾颈部；经人工授精所产21头仔猪中，9头猪用PCR可检测GFP片段，用RT—PCR检测PLA2表达，该9头猪的表达量明显高于其它猪，总阳性率达42．86％。结论BMP和PEI结合可作为良好的携带外源基因的非病毒性载体，用该载体通过精子介导法可以达到迅速制备转基因猪的目的，其成本低、方法简单、便捷。