基于TLH重组蛋白单抗的磁性免疫层析试纸条构建

为了检测不耐热溶血毒素TLH,以His-TLH重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备TLH单克隆抗体,然后将纯化后的单抗与磁珠偶联制备免疫磁珠,以此免疫磁珠为标记物构建了TLH重组蛋白的磁性免疫层析检测试纸条。结果表明,该磁性免疫层析试纸条实现了TLH重组蛋白的快速定性和定量检测,具有快速、操作简便、灵敏度高(检测限12.5 ng/mL)等特点。本研究所构建的磁性免疫层析试纸条为重组溶血毒素的快速鉴定、诊断和检测提供了一种新途径。

哈维弧菌抗体的制备及其在磁性免疫层析试纸条的应用

目的建立快速检测哈维弧菌的免疫学方法。方法以甲醛灭活的哈维弧菌菌体为免疫抗原,对新西兰大白兔进行免疫得到哈维弧菌多克隆抗体;将多克隆抗体用间接ELISA法对创伤弧菌、副溶血性弧菌等进行特异性检测;将哈维弧菌多克隆抗体与磁珠结合,并将多克隆抗体标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针,再分别以哈维弧菌多克隆抗体和山羊抗兔Ig G作为检测线T线和质控线C线,初步实现了双抗体夹心模式的磁性免疫层析试纸条,并对磁珠偶联抗体添加量进行优化。结果经ELISA法检测,哈维弧菌多克隆抗体效价为1∶80 000;其特异性良好,即此多克隆抗体与不同致病类型的食源性致病菌无交叉反应;最佳偶联抗体添加量为140μg;半定量检测时间为10 min,检测的准确性和灵敏度已达到最优,通过单纯的肉眼观察,可实现5×104CFU/ml哈维弧菌的检测。结论成功制备高效价哈维弧菌多克隆抗体并与纳米磁性材料进行了结合,为深入研究哈维弧菌的免疫原性与免疫学快速检测方法提供了基础。