磁性激活细胞分选技术分离胃癌患者外周血、门静脉血癌细胞及临床初步应用

目的 建立一种分离血液中肿瘤细胞的磁性激活细胞分选 (MACS)技术并评价其临床价值。方法 采用胃肿瘤细胞膜表位的MG7、CEA、QY和MMP9单抗分别与溴化氰活化的Sepharose 4B磁珠交联 ,从胃癌患者外周血、门静脉血中分离出肿瘤细胞。结果 应用MACS技术从外周血中分离出肿瘤细胞的阳性率为4 9.15 % (2 9/5 9) ,从门静脉血中分离出肿瘤细胞的阳性率为 90 .32 % (2 8/31) ,两者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。用MACS技术从外周血、门静脉血中分离出肿瘤细胞的阳性率与患者临床分期无关。结论 MACS技术是一种有效分离肿瘤细胞的可靠方法 ,可从胃癌患者外周血中分离出少量肿瘤细胞 ,有助于进一步探讨恶性肿瘤的发生、发展、浸润转移。

磁性细胞分选技术的应用与生物学评价

磁性细胞分选技术是一种利用超顺磁性纳米复合材料进行细胞分选的细胞高度特异性快速分选技术,在免疫学、干细胞学、肿瘤学和临床医学等领域应用广泛。本文综合阐述了磁性细胞分选技术的分类和应用,讨论了近几年出现的几项基于磁性细胞分选的新技术和面临的挑战。重点分析了磁性细胞分选产品生物学评价的必要性,并提出了10项与磁性细胞分选产品相关的生物学评价技术参数:得率、纯度、无菌、细胞毒性、细胞形态、活率、细胞的光散射特性、细胞的荧光抗体标记能力、细胞活化、细胞增殖,该评价技术参数的提出对磁性细胞分选规范化应用具有重要的推动作用。

硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对胎儿有核红细胞富集效果的比较

目的分析硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对胎儿有核红细胞(FNRBC)的富集效果。方法选取2020年1月—2022年12月拟于医院产科门诊进行产前筛查的112例孕妇为研究对象,所有孕妇均采集外周肘静脉血10 mL,分别通过硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对血液样本中FNRBC进行富集。比较两种方案富集前后细胞形态及细胞计数情况,记录两组方案对FNRBC的富集时间及富集所得FNRBC的无菌试验结果。结果硅芯片纳米微流体技术对FNRBC的富集时间长于磁激活细胞分选法(P<0.05);两种方案的无菌试验阳性发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与磁激活细胞分选法相比,硅芯片纳米微流体技术进行FNRBC富集时所得的总细胞量较少,FNRBC量较多,FNRBC比例较高(P<0.05)。结论硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法进行FNRBC富集所得样本受污染风险均较低,与磁激活细胞分选法相比,硅芯片纳米微流体技术去除混杂细胞的能力较强,且获得的FNRBC数量较多,对FNRBC的富集效果较好,但所需时间较长。

磁性细胞分选技术在纯化血小板中的应用

目的应用磁性细胞分选技术对血小板进行分选纯化,并评价分选效果,为血小板免疫功能的研究提供实验基础。方法血细胞分离机单采外周血中的血小板,分别采用磁性细胞MS柱和LD柱纯化浓缩血小板,采用白细胞绝对计数法对分选前后血小板中的有核细胞进行检测,计算有核细胞去除率。采用流式细胞术检测分选前后血小板活化膜分子CD62P的表达情况,比较分选前后血小板活化程度差异。结果分选前血小板基础活化率为(2.39±1.10)%,经LD柱负向分选后为(2.56±1.08)%,MS柱正向分选后为(16.76±4.04)%;MS柱、LD柱分选后有核细胞清除率分别为(98.44±0.24)%及(98.47±0.18)%。结论LD柱负向磁性细胞分选技术可高效去除有核细胞,且对血小板影响较小。

中科院青岛能源所发明拉曼激活单细胞液滴分选技术

科学网讯 单个细胞是地球上细胞生命体功能和进化的基本单元。单细胞精度的高通量功能分选是解析生命体系异质性机制、探索自然界微生物暗物质的重要工具。单细胞拉曼光谱（SCRS）能够在无标记、无损的前提下揭示细胞固有的化学组成，因此拉曼激活细胞分选技术（RACS）日益受到广泛关注。但是分选通量是当前限制其广泛应用的最重要的瓶颈之一。

携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定

目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。

人肺腺癌细胞系(LAC)中SP细胞亚群的分选及其干细胞特性分析

目的:分选人肺腺癌细胞系(LAC)中SP细胞(side population cells)亚群并分析其具有的干细胞特性。方法:运用流式细胞荧光激活分选技术(FACS)分选LAC中SP细胞亚群和非SP细胞亚群,利用MTT、体外克隆形成和皮下移植瘤试验分析其体内、外增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期及细胞分化,RT-PCR方法检测其ATP结合盒转运蛋白(ABCG2)基因的表达情况。结果:流式细胞荧光激活分选结果显示:LAC中含有约1.88%的SP细胞亚群。MTT和体外克隆形成试验表明:SP细胞亚群的体外增殖能力显著强于非SP细胞亚群。同时,裸鼠皮下接种SP细胞亚群,其体内成瘤能力也要显著强于非SP细胞亚群。流式细胞仪分析结果表明:SP细胞亚群的G0/G1期比例显著高于非SP细胞(P<0.05)。细胞分化实验结果表明:两个亚群中SP细胞比率分别为(1.46±0.08)%和(0.12±0.04)%。RT-PCR结果显示:ABCG2基因mRNA在SP细胞亚群中的表达水平是其在非SP细胞亚群中的3.3倍(P<0.05)。结论:利用LAC中SP细胞亚群具有肺癌干细胞的特性,流式细胞荧光激活分选肺腺癌SP细胞亚群可能是分离肺腺癌干细胞的有效方法。

单细胞分离方法及仪器研究进展

如何从复杂异质且数量众多的细胞背景中分离出具有某种特征的纯净细胞实验样本,是长期困扰生命科学和临床病理学研究者的难题。纯净无损高特异性的细胞分离方法对解析生命过程、研究病理机制、确定治疗方案、分析药物疗效具有重要的作用。综述了单细胞分离方法及分离仪器的研究进展,重点梳理荧光激活细胞分选、微流体、激光显微切割、显微操作4种方法。首先,阐述方法的工作原理和部分理论模型。其次,分析几种典型仪器的结构、研究进展及主要性能参数。最后,讨论各种单细胞分离方法的优点和局限性,并展望单细胞分离仪器的发展趋势。

中枢神经系统细胞分离方法的研究进展

中枢神经系统细胞是由神经细胞和胶质细胞组成的混合体,在脑的正常生理活动和疾病发展过程中起不同作用,实现对每一种细胞特异性分离成为研究其功能的基础。随着科技发展,出现很多分离细胞的新技术,如磁性细胞分选法(magnetic cell sorting,MCS)、激光显微解剖术(laser-capture microdissection,LCM)、微流控技术等,这些技术的应用将为中枢神经系统细胞的研究提供很大帮助。