放射免疫分析法与磁性酶联免疫法检测PRL的比较

目的 :比较放射免疫分析法 (放免法 )和磁性酶联免疫法 (磁酶免法 )检测人血清中泌乳素 (PRL )的含量。方法 :对患者的血清同时用放免法和磁酶免法检测泌乳素 (PRL)含量 ,然后对两组数据进行 χ2检验、直线回归和直线相关分析。结果 :检测 80例临床标本 ,χ2 检验两方法结果 P<0 .0 1 ,直线回归方程 Y=0 .85 X+32 .9,相关系数 r=0 .982。结论 :放免法与磁酶免法检测 PRL有显著性差异 。

流式细胞仪法与磁性酶联免疫吸附法检测HLA-B27的对比研究

目的:对比分析磁性酶联免疫吸附法与流式细胞仪法检测AS患者HLA-B27的临床价值。方法:选取2010年5月-2013年5月笔者所在医院门诊及住院疑诊为AS患者164例,分别应用磁性酶联免疫吸附法和流式细胞仪法检测HLA-B27,以临床诊断为参照,对比分析两种方法的特异性、敏感性及准确性等指标。结果:164例疑诊为AS患者中,确诊143例,排除21例。以临床诊断为参照标准,流式细胞仪法及磁性酶联免疫法敏感性分别为96.5%、84.6%,两方法敏感性比较差异有统计学意义(字2=11.820,P=0.001);特异性分别为71.4%、95.2%,流式细胞仪法特异性低于磁性酶联免疫吸附法(字2=4.286,P=0.038);准确性分别为93.3%、86.0%,两种方法比较差异有统计学意义(字2=4.725,P=0.030);关于阳性预测值及阴性预测值,两种方法比较差异无统计学意义(字2=2.887,P=0.090;字2=0.625,P=0.419)。结论:磁性酶联免疫吸附法及流式细胞仪法各有优缺点,两者结合对早期AS的诊断有着重要的参考价值。

磁性磷脂酶D交联酶聚集体的制备及其酶学性质

以磁性Fe3O4为载体,采用吸附-聚集-交联的方法固定来源于Streptomyces chromofuscus的磷脂酶D(scPLD),制备了磁性磷脂酶D交联酶聚集体(MCLEA)。该方法制备的MCLEA酶活回收率可达72.89%,酶活为(437.00±6.60)U/g。与游离酶相比,MCLEA在不同温度和pH下的稳定性都得到了一定程度的提升,但由于与底物的亲和力降低,需要更高浓度的磷脂酰胆碱(PC)和Ca^(2+)作为反应底物与MCLEA结合。乙醇、四氢呋喃、叔丁醇、乙酸乙酯、乙醚和甲苯对MCLEA的酶促反应具有促进作用,MCLEA在进行连续13次酶促反应后,酶活仍可保留在76%以上,其半衰期为331.67min,该固定化方案可以提高酶的稳定性,从而提高其在催化反应过程中的重复利用性。

氨基末端磁性载体固定化中性蛋白酶的研究

以氨基末端磁微粒为载体 ,用戊二醛作交联剂 ,通过共价交联结合法固定化AS1 398中性蛋白酶 .可以制备出活力达 45 0 0 0U/ g磁性固定化酶 .探讨了该载体对中性蛋白酶的最适固定化条件 ,并对磁性固定化酶的热稳定性 ,储存稳定性、操作稳定性等进行了研究 ,确定了此载体对酶的固载能力大于 2 0 0mg/ g (载体 ) ,及固定化磁性酶最适 pH为 7 5 ,最适温度为 6

食品安全检测中的磁性纳米酶显色技术

在食品安全检测领域,为解决纳米酶催化活性低的问题,各种磁性纳米酶得到了研制,利用其结构、形貌提升类酶活性,能够为显色技术运用创造有利条件。本文对磁性纳米酶显色技术展开分析,且探讨了该技术在农兽药残留、食源性病原体等食品安全检测领域的应用情况,确认其具有活性可控、稳定性高等应用优势,展望技术的应用前景,为新型模拟酶生物传感器设计、改良等工作开展提供理论依据。

用吸附-交联法在磁性胶体粒子上固载中性蛋白酶

利用吸附-交联法,在磁性胶体粒子表面固载 ASl.398 中性蛋白酶,可以制备出活性达 2500U/g 的磁性固定化中性蛋白酶.该固定化酶具有较好的耐热性和操作稳定性,最适作用 pH6.0—6.5,最适作用温度60℃.考察了交联剂用量、温度、pH及酶与载体比例对 AS1.398 中性蛋白酶固定化的影响.

磁性高分子微球共价结合中性蛋白酶

磁性高分子微球内含磁核，外部是表面带羧基的聚苯乙烯高分子外壳，不仅可以共价偶联酶分子，而且易于磁场分离，是固定化酶的理想载体。采用碳化二亚胺法，在磁性高分子微球上固载ＡＳ１．３９８中性蛋白酶，制备活性达７００Ｕ／ｇ的磁性固定化中性蛋白酶，缓冲液的ｐＨ６．０、离子强度较高时，磁性固定化酶（ＭＩＥ）的活性最高。载体性质对ＭＩＥ活性影响很大，磁性微球粒径愈小，表面羧基含量愈大，ＭＩＥ活性愈高。

磁性分离酶免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用

目的 :探讨磁性分离酶免疫分析技术 (magnetic -separatedenzymeimmunoassay ,MEIA)在唐氏综合征产前筛查中的实用性。方法 :对MEIA方法测定孕中期母血清甲胎蛋白 (AFP)和游离 β -绒毛促性腺激素 (β -HCG)含量进行方法学检测 ,同时与酶联免疫吸附法 (ELISA)和放射免疫法 (RIA)相比较。并通过检测及随访 1745例孕产妇建立了青岛地区孕中期母血清各孕周AFP、β-HGC中位数值。结果 :MEIA -AFP方法的灵敏度 <0 .2 1IU/ml,批内平均变异系数 (CV)为 4.7% ,批间平均CV为 6 .8% ,平均回收率为 97.4% ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .90 0和 0 .986 )。MEIA - β -HCG方法的灵敏度为 1mIU/ml,批内平均CV为 2 .4% ,批间平均CV为 2 .4% ,平均回收率为 99.6 % ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .942和 0 .976 )。建立了青岛地区孕中期产前筛查各孕周中位数值 ,其随孕周变化趋势与文献报道一致。筛查中暂未发现漏检病例。结论 :MEIA方法适用于测定孕中期母血清AFP和 β -HCG含量 ,进行唐氏综合征和开放性神经管畸形的产前筛查。

磁性载体用于酶固定化方面的研究

合成了具有磁响应性的两亲性聚乙二醇胶体粒子，并以此为载体，用吸附交联法固定化了α淀粉酶．最适交联条件研究表明：缓冲液ｐＨ值、戊二醛浓度及加酶量都对固定化酶活力、比活有一定影响．在最适固定化条件下，固定化酶的活力为３４０００Ｕ·ｇ－１干胶，蛋白载量为１００ｍｇ·ｇ－１干胶，比活为３４０Ｕ·ｍｇ－１蛋白，活性回收率为３７．７％．最适反应温度比天然酶（５０℃）提高３０℃．最适ｐＨ比天然酶（７．０）提高１个ｐＨ单位．并且对酸、碱、热的稳定性大大增强，贮存及操作稳定性也大大提高．该载体合成简单，固定化方法简单，且具有磁性，便于分离．

磁性分离酶联免疫测定在糖尿病中的临床应用

目的 :观察磁性分离酶联免疫测定技术水平。方法 :使用磁性分离酶联免疫测定 (IEMA )技术 ,测定糖尿病患者 C-肽、胰岛素。 1型糖尿病 (IDDM) 12例 ,2型糖尿病 (NIDDM) 90例 ,健康人正常对照 2 0例 ,做 OGTT试验 ,使用BIOCHEM IMMU NOSYSTEMS公司发明的 SEROZYME酶联免疫双抗体夹心检测系统和 BIODATA试剂测定胰岛素(INS)和 C-肽 (C-P)。结果 :IEMA批内变系数 (CV% )为 3.95 % ,批间变系数为 6 .72 % ,灵敏度分别为 0 .5 7m U / L和0 .39pmol/ L。 IEMA结果与放射免疫法 (RIA )之间有显著的直线相关性 (P<0 .0 1)。健康人 OGTT试验时 ,空腹胰岛素和 C肽分别为 (15 .76± 6 .32 ) m U/ L 和 (8.71± 16 3.38) pm ol/ L,在 30～ 6 0分钟达到峰值 ,平均为 (5 9.6 4± 7.84) m U/ L 和(2 0 73.83± 2 88.0 9) pm ol/ L。IDDM患者胰岛素和 C-肽空腹水平低 ,OGTT试验无峰值出现 ,而 NIDDM患者峰值延迟。结论 :IEMA是一种灵敏、特异、有效、可与免疫放射法相匹敌的非放射标记的免疫化学检测技术。

磁性聚乙烯醇微球固定化α-淀粉酶的研究

磁性聚乙烯醇微球为载体,采用戊二醛交联法固定化α-淀粉酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究。结果表明,磁性固定化α-淀粉酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率分别为1107.89U/g微球、125.36mg/g微球、8.84U/mg蛋白质和37.96%;固定化α-淀粉酶的反应最适温度和最适pH分别为110℃和7.0;固定化α-淀粉酶对金属离子Mg2+、Fe2+、Zn2+和Cu2+的抑制作用的忍耐性比自由酶的明显提高;α-淀粉酶被固定化后其热稳定性、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶的明显提高。固定化α-淀粉酶在4℃,pH7.0的缓冲液中保存30d,其活力仍保持最初活力的91.6%,这比其自由酶的高12.3%。

磁性固定化胃蛋白酶水解牛奶的研究

将磁性固定化胃蛋白酶应用于牛奶的水解。结果表明,其对牛奶水解有一定的催化作用,最佳水解条件为:磁性固定化胃蛋白酶添加量1.50 g、pH值4.0、水解温度60℃、水解时间2 h,此时牛奶水解度可达40%以上。

磁性固定化漆酶在苹果汁除酚中的应用

以磁性聚苯乙烯微球为载体,戊二醛为交联剂,制备出了磁性固定化漆酶。研究表明,固定化漆酶的Km值较游离漆酶小,最适温度与游离漆酶相同,最适pH较游离漆酶下降0.4个单位,热稳定性、pH稳定性和贮存稳定性均较游离漆酶有所提高。

磁性分离酶联免疫激素在女性生殖内分泌中的应用

目的 : 引进磁分离酶联免疫测定 (IEMA)新技术 ,应用于女性生殖内分泌原发不孕患者的临床检测。方法 将患者分为 3期 :卵泡期、排卵期、黄体期。正常对照采用北京医院妇产科。使用北京倍爱康生物技术有限公司提供加拿大BiochemImmunoystems公司生产的SEOZYME I型内分泌定量测定仪及与之配套试剂盒 ,测定FSH、LH、PRL、E2、P、T6项激素。结果 与正常参考值对照 ,卵泡期FSH、PRL、E2、P、T有显著性差异 ;排卵期FSH、LH、E2、T有显著性差异 ;黄体期LH、PRL、P有显著性差异 ,有统计学意义。结论 IEMA方法稳定可靠 ,特异性高 ,无放射性污染的免疫化学检测技术 ,在生殖内分泌检测中有较大的应用价值。

漆酶在磁性壳聚糖微球上的固定及其酶学性质研究

以磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,共价结合制备固定化漆酶。探讨了漆酶固定化的影响因素,并对固定化漆酶的性质进行了研究。确定漆酶固定化适宜条件为50mg磁性壳聚糖微球,加入10mL0.8mgmL漆酶磷酸盐缓冲液(0.1molL,pH7.0),在4℃固定2h。固定化酶最适pH为3.0,最适温度分别为10℃和55℃,均比游离酶降低5℃。在pH3.0,温度37℃时,固定化酶对ABTS的表观米氏常数为171.1μmolL。与游离酶相比,该固定化漆酶热稳定性明显提高,并具有良好的操作和存储稳定性。

磁性固定化漆酶在苹果汁除酚中的应用研究

以磁性聚苯乙烯微球为载体,戊二醛为交联剂,制备出了磁性固定化漆酶。研究表明:固定化酶的Km值较游离酶小,最适温度与游离酶相同,最适pH较游离酶下降0.4个单位,热稳定性、pH稳定性和贮存稳定性均较游离酶有所提高。Fe2+、Hg2+、Cr3+对固定化酶有抑制作用,Cu2+对固定化酶有激活作用。抑制剂EDTA、DMSO对磁性固定化酶的抑制作用明显较游离酶小。固定化漆酶在40℃条件下处理2h后,苹果汁中多酚含量减少20%,而酶活力没有变化。

磁性纳米酶显色技术在食品安全检测中的应用

磁性纳米酶显色技术是指利用磁性纳米酶的类过氧化物酶性质,在显色底物的存在下,对目标物进行快速、灵敏、可视化检测的新型技术。与天然酶相比,磁性纳米酶易制备、易保存、易回收、成本低。本文简单介绍了磁性纳米酶的催化机理和活性调节,重点综述了磁性纳米酶显色技术在食品中农兽药和重金属残留、食源性致病菌及其它有害物质检测中的应用现状。目前,该技术仍存在酶活性较弱、检测应用范围较窄、选择性欠佳等问题。本文针对上述问题提出了相关建议,并对其未来发展方向进行了展望。