磁扭力刺激人肺微血管内皮细胞模型的建立

目的观察人肺微血管内皮细胞在磁扭力刺激后肌动蛋白骨架的变化。方法人工合成整合素胞外保守肽段序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)包被磁珠与人肺微血管内皮细胞孵育2 h后,放入磁扭力刺激仪,通过磁珠的运动牵拉细胞2 h,荧光探针鬼笔环肽(FITC-phalloidine)染色肌动蛋白纤维。结果磁珠与细胞共孵育2 h后,两者紧密结合;磁扭力刺激后应力纤维形成。结论磁扭力刺激人肺微血管内皮细胞模型是实施细胞牵拉的理想模型。

机械牵拉对人肺微血管内皮细胞单层通透性、F-肌动蛋白变化的影响

目的:探讨机械牵拉后人肺微血管内皮细胞(human pul monary microvascular endothelial cells,HPMVECs)单层通透性、F-肌动蛋白(F-actin)的变化及它们之间的关系,并探讨Rho激酶抑制剂Y27632对上述变化的影响。方法:体外培养HPMVECs,磁扭力刺激(magnetic twisting sti mulation,MTS)实施机械牵拉,随机分为3组,对照组(C组):细胞不经MTS,在细胞培养箱中培养1h、2h;机械牵拉组(M组):MTS1h、2h;抑制剂组(Y组):细胞与Rho激酶抑制剂Y27632(10μmol/L)孵育2h后给予MTS1h、2h;用FITC标记的右旋糖苷在transwell模型中的通透率检测HPMVECs单层通透性,用免疫荧光染色检测HPMVECs的F-actin分布。结果:M组的HPMVECs单层通透性较C组显著增加(P<0.05),且MTS2h后HPMVECs单层通透性较MTS1h高(P<0.05);Y组则较M组显著降低(P<0.05)。C组细胞F-actin主要分布在细胞边缘;而MTS引起F-actin聚合形成应力纤维,而以刺激2h明显;而Y组应力纤维形成较M组明显减少。结论:机械牵拉可引起HPMVECs的单层通透性增高,F-actin聚集形成应力纤维,且HPMVECs单层通透性增高的机制可能与F-actin聚集成应力纤维密切相关。Y27632可通过抑制应力纤维形成而减轻机械牵拉对HPMVECs单层通透性的影响。