用磁捕法快速分离HCV-mRNA

目的 :寻找一种操作简便、快速、敏感性高、重复性好且特异性强的RNA分离纯化方法。方法 :磁捕法是用亲和素包被的磁珠交联带有生物素标记的丙型肝炎病毒 (HCV)寡核苷酸探针 ,与血清HCV mRNA(以异硫氰酸胍作裂解液 )特异性结合 ,经洗涤分离纯化HCV mRNA模板 ,作逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,用于检测HCV患者血清。并用蛋白酶K消化法作对照。结果 :磁捕法检测抗 HCV阳性肝病患者血清5 0例 ,HCV RNA阳性 34例 (6 8% ) ,对 34例阳性标本 ,用蛋白酶K消化法提取HCV mRNA检测HCV ,结果HCVRNA阳性仅 2 8例。结论 :磁捕法分离HCV mRNA具有操作简便、快速。

磁捕法对传染性非典型肺炎冠状病毒RNA富集体系的初步研究

目的 初步研究建立磁捕法对传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒RNA的富集、纯化体系,以提高逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA的敏感性。方法 根据国际基因库公布的SARS冠状病毒基因序列,自行设计引物、探针,体外克隆目的RNA片段作为标准物质;利用标准RNA以及模拟SARS血清标本的RNA,评价自行设计的SARS冠状病毒巢式RT-PCR检测体系和磁捕法SARS冠状病毒RNA富集检测体系的检测效果。结果SARS冠状病毒巢式RT-PCR检测体系,对于模拟血清SARS标本RNA的最低检测样本浓度为20拷贝/μl,而磁捕法SARS冠状病毒RNA富集检测体系的最低检测样本浓度为1拷贝/μl。结论 初步建立的磁捕法SARS冠状病毒RNA富集检测体系,可有效地对低浓度的RNA样本进行浓缩、纯化,有效提高SARS RT-PCR检测方法的敏感性。