硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对胎儿有核红细胞富集效果的比较

目的分析硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对胎儿有核红细胞(FNRBC)的富集效果。方法选取2020年1月—2022年12月拟于医院产科门诊进行产前筛查的112例孕妇为研究对象,所有孕妇均采集外周肘静脉血10 mL,分别通过硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对血液样本中FNRBC进行富集。比较两种方案富集前后细胞形态及细胞计数情况,记录两组方案对FNRBC的富集时间及富集所得FNRBC的无菌试验结果。结果硅芯片纳米微流体技术对FNRBC的富集时间长于磁激活细胞分选法(P<0.05);两种方案的无菌试验阳性发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与磁激活细胞分选法相比,硅芯片纳米微流体技术进行FNRBC富集时所得的总细胞量较少,FNRBC量较多,FNRBC比例较高(P<0.05)。结论硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法进行FNRBC富集所得样本受污染风险均较低,与磁激活细胞分选法相比,硅芯片纳米微流体技术去除混杂细胞的能力较强,且获得的FNRBC数量较多,对FNRBC的富集效果较好,但所需时间较长。

磁激活细胞分选技术用于结直肠癌外周血癌细胞富集的研究

目的用磁激活细胞分选技术富集并定量分析结直肠癌患者外周血循环中的癌细胞。方法术前抽取 2 1例结直肠癌患者和 9例对照者的外周血样 ,标记带磁珠的细胞角蛋白 (Cytokeratin ,CK)抗体 ,经磁柱富集CK+ 上皮细胞 ,用流式细胞仪检测其含量。结果在未经富集的标本中均未发现CK+ CD45 -细胞 ;在经富集的标本中其含量在对照组与患者组间 (P <0 0 1)以及DukesA B期与DukesC D期患者间 (P <0 0 1)均差异有显著意义。结论本方法能有效地富集上皮来源细胞 ;CK+ CD45 -细胞能反映外周组织中肿瘤细胞情况 ;其与恶性肿瘤的存在。

磁激活分选法双重分离大鼠外周血单个核细胞CD4^+CD25^+调节性T细胞

目的:应用磁激活细胞分选(MASC)技术从卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出大量高纯度CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg),以研究其在支气管哮喘中的作用。方法:从OVA免疫耐受大鼠外周血中分离出PBMCs,应用MASC技术阴性分选CD4+T细胞,再阳性分选出CD4+CD25+Treg;流式细胞仪检测。结果:分选前的CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的11.07%,CD4+T细胞占总数的21.88%;CD4阴性分选后,CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的10.95%,CD4+T细胞占总数的89.28%;CD25阳性分选后,CD4+T细胞超过总数的95%,而CD4+CD25+Treg细胞占总数的90.92%,CD4+CD25+Treg细胞纯度大于90%。结论:应用MASC技术成功从OVA免疫耐受大鼠的PBMCs中分选出了高纯度的CD4+CD25+Treg细胞。

磁激活细胞分选术联合混合抗体提高模拟恶性腹水中游离癌细胞检出效率的分析

背景磁激活细胞分选术（magnetic activated cell sorting，MACS）是一种新的免疫磁性分离技术。其原理是基于抗体对抗原的特异性识别，将50nm磁性微珠直接或者间接耦联在抗体上，与有相应抗原表达的细胞相连，在高强度、高梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的。该法具有分离纯度和回收率均较高的优势，也能分离出体液中存在的少量肿瘤细胞。目的评价MACS联合一组肿瘤细胞标志物的方法对提高模拟恶性腹水中游离癌细胞检出效率的作用。方法选择5种与恶性腹水病因有关的肿瘤细胞株作为研究对象，采用免疫荧光反应和流式细胞仪（FCM）检测上皮相关抗原（epithlial-related antigen，EpCAM）、CA125、癌胚抗原和TAG-72共4种单克隆抗体及其混合抗体在各肿瘤细胞的表达。将肿瘤细胞以不同比例掺入单个核细胞中模拟恶性腹水细胞成分，与联合单个抗体进行分选对比，观察MACS术联合混合抗体分选肿瘤细胞的效率。结果FCM结果表明，混合抗体在5种肿瘤细胞的阳性表达率均高于4种抗体单独反应的阳性率。MACS术联合混合抗体检出模拟恶性腹水中肿瘤细胞的得率比联合单个抗体的得率要高，其中以2种胃癌细胞和结肠癌细胞的平均得率提高较多（分别为69．18％±20．84％比45．23％±11．54％、78．75％±15．42％比59．73％±16．640和85．63％±12．30％比76．88％±8．650），卵巢癌细胞次之（32．490±3．58％比31．79％±4．820），肝癌细胞最少（11．78％±0．430比7．16％±0．460）。结论与联合单个抗体进行分选相比，应用MACS术联合一组混合抗体的方法可有效提高恶性腹水中游离癌细胞的检出效率，尤其对胃肠道肿瘤所致的恶性腹水有潜在的临床应用价值。

头颈部肿瘤干细胞的表面标志物及其分选

越来越多的研究显示,头颈部肿瘤干细胞很可能是头颈部肿瘤形成、复发、转移和耐药的根源。本文就头颈部肿瘤干细胞表面特异分子标志物,头颈部肿瘤干细胞的分选等研究进展作一综述。

细胞量少的卵巢癌腹腔液漏诊和过度诊断的实验分析

目的探讨细胞量少的卵巢癌腹腔液的漏诊及过度诊断情况及原因。方法建立卵巢癌腹水模型,分阴性组和4个阳性组,即4 ml良性腹腔冲洗液中有0、5、10、20、40个卵巢癌SKOV3细胞,每组重复3次,以观察HE和免疫细胞化学染色切片、磁激活细胞分选(magnetic activated cell sorting,MACS)联合流式细胞鉴定的方法检测该模型。结果判断阴性组的样本中无癌细胞,部分阳性组样本中有癌细胞;Ep CAM、Calretinin均阳性,Pax-8、CK5/6部分阳性;5组中均有EBA-1免疫荧光阳性的上皮细胞,阳性率分别为13.6%、6.7%、9.0%、6.2%、6.3%。结论卵巢癌腹腔液中的细胞量少时,形态学观察癌细胞易造成漏诊,免疫细胞化学染色易出现假阳性,MACS不能有效分离其中的癌细胞,应采用新方法以识别分离腹腔液中的少量癌细胞。

卵巢癌肿瘤干细胞研究进展

肿瘤干细胞(TSC)是指肿瘤组织中极少数具有干细胞特性的细胞,它们具有自我更新及分化潜能,是肿瘤形成、生长和转移的基础。目前肿瘤干细胞的研究受到越来越多的关注,并在多种组织和器官的肿瘤中证实了肿瘤干细胞的存在。本文对卵巢癌肿瘤干细胞的研究现状进行了综述,提出寻找新的卵巢癌干细胞分离及鉴定方法是目前卵巢癌干细胞研究的主要任务,有效的卵巢癌细胞原代培养方法可能是实现分离及鉴定卵巢癌干细胞及其靶向治疗的关键。

MACS法对骨髓中胃癌细胞的富集效率研究

目的探讨和比较微型免疫磁珠在胃癌微转移细胞检测方面的特异性、富集效率及回收率。方法选取2002年12月-2003年6月间行手术治疗的胃良性病变患者15例,将其骨髓有核细胞与胃癌细胞株OCUM-2MD3细胞以10种不同比例混合,使其中肿瘤细胞的频数自(0-5)×10-5作为骨髓微转移肿瘤细胞模型。以结合有CK7/8抗体的MACS微型免疫磁珠、标记异硫氰酸荧光素的抗CK抗体(CK-FITC)以及标记叶绿素蛋白的抗CD45抗体(CD45-PerCP)标记后,以MS+/RS+ 型阳性分选柱进行2次肿瘤细胞富集。在富集前后分别进行FACS分析和免疫荧光检测。结果FACS分析9组混合细胞标本中,肿瘤细胞的富集倍数为8664±1222,回收率为(61.4±8.7)%;直接免疫荧光法测得4组混合细胞的总回收率为(49.3±8.2)%,明显低于FACS测得的回收率(P=0.037)。结论MACS法可有效地富集骨髓细胞中存在的胃癌细胞; MACS免疫磁珠富集结合FACS分析敏感性高,可重复性好,是检测骨髓中胃癌微转移细胞的有效方法。

人胎盘CD133^+、CD133^-细胞组份中高增殖潜能集落形成细胞及其表型特征的初步探讨

目的研究人胎盘CD133+、CD133-细胞亚群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)频率及表型特征。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)游离细胞悬液,用Histopaque-1077分离出单个核细胞(MNCs),经磁式分选(MACS)分离纯化CD133+和CD133-细胞。将分选的CD133+和CD133-细胞分别使用H4435培养基培养4wk后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析。结果培养4wk后,PT-CD133+、CD133-细胞生成的HPP-CFC集落分别为32.4±11.2/5×103、2.0±2.3/5×103,前者细胞中HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、CD133-细胞培养至28d时CD133+CD34+、CD133+CD34-和CD133-CD34+亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+与CD133-细胞群中均存在HPP-CFC,但CD133+细胞群中的HPP-CFC明显多于CD133-细胞群,说明胎盘CD133+细胞群中存在更多的早期HSPC。