磁珠富集法提高外周血HIV DNA检测灵敏度的研究

目的建立外周血人免疫缺陷病毒脱氧核糖核酸(HIV DNA)磁珠富集检测方法,并评估该方法在提高HIV感染患者早期抗病毒治疗(early antiretrovital treatment,ART)后外周血中HIV DNA检测灵敏度中的应用价值。方法采集1位HIV感染窗口期(window period,WP)即开展ART患者4个不同时间点的外周全血,Ficoll法分离外周全血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),阴性分选富集PBMC中CD4^(+)T淋巴细胞,应用HIV DNA检测试剂盒检测磁珠富集组和全血组HIV DNA浓度。结果采用免疫磁珠富集法从PBMC中分离纯化CD4^(+)T细胞,经流式细胞仪测定纯度达到(96.4±2.6)%,0.4%台盼兰染色细胞活力为(95.9±2.9)%。治疗后,在追踪的不同时间点,发现患者血浆中HIV RNA载量逐渐下降,至第4个追踪时间点,血浆中不再检出HIV RNA。全血组4个时间点,HIV DNA定量结果均未检出;磁珠富集组CD4^(+)T淋巴细胞HIV DNA定量结果分别为:73.4、429.3、137.1、449.9 copies/106个CD4^(+)T细胞。结论磁珠富集法更加灵敏高效检出血液标本中极限低拷贝HIV DNA,为HIV WP感染、ART治疗后突破感染提供早期确证依据。