磨牙牙根发育模式基因1在大鼠多脏器中的表达及其结构分析

目的了解磨牙牙根发育模式基因1（molar root patterning gene 1，Mrp1）的组织表达特征并对其结构进行预测、分析，从而为进一步研究磨牙牙根发育模式基因1的功能奠定基础。方法通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法对Mrp1基因的表达情况进行研究，并通过染色体分析、基因组定位及其他生物信息学手段对该基因进行结构分析。结果经RT-PCR检测发现，Mrp1 mRNA除了在大鼠磨牙牙胚组织表达外，在发育中的胰、肝、肺、肾组织中也有表达；生物信息学分析显示，Mrp1定位于大鼠18号染色体长臂18q12．3区，且Mrp1蛋白序列同尿道上皮细胞分化标志膜蛋白Uroplakin Ⅲb（p35）有37％的同源性，跨膜区分析及序列疏水性分析都印证了Mrp1蛋白质序列的第10～40位氨基酸间有一段跨膜序列及疏水区域。结论Mrp1基因编码产物可能是C端带有多个磷酸化位点的跨膜蛋白，且在多个脏器的发育中可能具有一定的生物学意义，值得进一步研究。

大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1的克隆及其原核表达载体的构建

目的:从大鼠磨牙胚组织中克隆大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1,构建原核融合表达载体,利用大肠杆菌表达其C端肽。方法:从生后 3dSD大鼠仔鼠磨牙胚中提取总mRNA,通过RT-PCR扩增出mrp1C端肽段基因并克隆进中间载体,然后将插入基因克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,在 28℃下进行IPTG诱导。结果:克隆载体序列酶切鉴定、序列测定完全正确;含重组质粒的工程菌经诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,Mr为 36×103,与预期C端肽Mr大小一致,约占菌体总蛋白的 19%。结论:成功地鉴定了mrp1C端肽段基因,通过基因克隆构建了其原核表达载体pGEX-4T-mrp1,并在大肠杆菌中得到了高效表达。

Cwc15家族同源基因mED1在小鼠早期胚胎发育中的表达模式(英文)

RNA选择性剪接机制涉及基因表达模式的多样性、胚胎发育的调控和疾病的发展与转归.Cwf15/Cwc15蛋白家族与RNA剪接体的功能相关,其基因序列在很多物种之间是十分保守的.然而,在哺乳类,Cwf15/Cwc15基因的表达模式和生物学功能研究至今未见实验性研究报道.本文首次报道了Cwc15家族同源基因mED1在小鼠早期胚胎发育过程中的表达规律.RT-PCR结果表明,mED1基因的转录水平从小鼠桑葚胚到器官形成期呈逐渐上升趋势;整体原位杂交结果显示mED1基因主要在小鼠6.5-dpc胚胎的ICM、8.5-dpc胚胎的神经褶衍生物和10.5-dpc的头部、鳃弓和体节中表达.说明mED1基因参与了小鼠胚胎的早期发育.此外,GFP-融合蛋白的亚细胞定位实验表明,mED1蛋白具有核定位的功能(剪接体蛋白的必要特性),验证了其核定位序列(NLS)的预测.本文是关于Cwc15家族基因的首次实验研究报道.

MSX1 mRNA在犬恒牙牙根发育过程中的表达及意义

目的 :观察同源异形盒基因MSX1在狗年轻恒牙牙根发育过程中的时空表达 ,初步探讨其对牙根形态形成的调控作用。方法 :采用原位杂交技术 ,对犬恒牙牙根不同发育时期MSX1mRNA的表达进行观察。结果 :在牙根发育不同时期内 ,MSX1mRNA不仅在牙乳头、牙囊组织及成牙本质细胞中有阳性表达 ,而且在牙附着组织 ,如成牙骨质细胞、上皮根鞘、牙周组织及根周牙槽骨组织中也有表达。结论 :MSX1作为牙齿发育过程中重要的转录因子 ,参与牙根形态发育的调控作用。

新生猪磨牙牙根发育cDNA消减文库的建立

目的 :分析新生猪前后牙基因的表达差异并获取新的表达序列。方法 :以新生猪第一恒磨牙牙胚为检验方 ,恒中切牙牙胚为驱动方 ,进行消减杂交 ,经克隆筛选获得新生猪恒磨牙的消减文库。结果 :随机挑选出 6 0个阳性克隆 ,酶切后获得 2 0 0～ 2 0 0 0bp的插入片断。结论

leptin基因在团头鲂成鱼各组织和早期发育中的表达分析

应用荧光定量PCR方法检测团头鲂leptin及其相关基因—瘦素受体(leptin receptor,leptin-R)和瘦素受体重叠转录产物类似物1基因(leptin receptor overlapping transcript like-1,leprotl-1)在胚胎发育早期及成鱼各组织的表达量。结果显示,3个基因在团头鲂成鱼所有检测组织中均有所表达,表明3个基因在团头鲂机体中具有多重生理功能。早期发育过程中的表达量结果显示leptin-R和leprotl-1基因在胚胎阶段的表达水平变化趋势一致,而leptin在破膜后5d前一直处于较低并呈波动性变化;出膜后12d时leptin-R和leprotl-1基因表达量均达到了峰值,而leptin基因从破膜后第5天开始表达量持续上升,在第15天到达峰值,表明3个基因可能涉及到胚胎发育早期阶段的能量调控。Pearson相关分析显示3个基因在团头鲂胚胎发育早期中的表达均为显著正相关关系(P<0.05)。

大鼠牙根发育模式相关基因cDNA消减文库的建立

目的 :建立大鼠牙根发育模式决定期磨牙和切牙差异表达基因的cDNA文库。方法 :采用改良消减杂交技术 ,以E19SD大鼠下颌第一磨牙牙胚组织总mRNA为实验组 ,采用改良的SMARTPCRcDNA合成技术进行反转录 ,下颌切牙牙胚组织总mRNA为驱动组 ,进行扣除杂交 ,筛选出两组差异表达的cDNA ,与T载体进行T/A连接构建文库 ,然后转化高效感受态大肠杆菌DH5а进行文库扩增 ,随机挑取阳性克隆进行酶切鉴定。结果 :扩增消减cDNA文库获得 12 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取的 10 0个阳性克隆酶切后 ,含 5 0 0bp以上插入片段的克隆 68个 ,占 68%。结论 :用改良消减杂交技术成功构建了大鼠牙根发育模式决定期磨牙和切牙差异表达基因的消减cDNA文库 ,该文库的建立为进一步筛选、克隆大鼠牙根发育模式相关基因奠定了基础。

同源盒基因Msx-1、Msx-2和Dlx-2在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达

目的 观察同源盒基因Msx 1、Msx 2和Dlx 2mRNA在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达。方法 取胎龄E11～E18和新生P1～P3小鼠的头或下颌 ,制备 5 μm连续冠状切片。体外转录合成地高辛标记的Msx 1、Msx 2和Dlx 2RNA探针。原位杂交后观察Msx 1、Msx 2和Dlx 2在小鼠下颌第一磨牙中的表达。结果 在牙胚发育过程中 ,Msx 1转录信号始终只在间质细胞中观察到 ,在上皮细胞中呈阴性。Msx 2和Dlx 2在牙源性上皮和间质中均表达 ,在磨牙发育起始期二者表达相似 ,但在随后的牙胚发育过程中 ,它们出现不同的表达特征。结论 牙胚发育过程中 ,Msx 1、Msx 2和Dlx 2有不同的表达特征 ,可能共同参与调控上皮和间质间的相互作用。

中华蜜蜂foraging基因Acfor的克隆与发育差异表达

[目的]本研究克隆了中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricius foraging(Acfor)基因,并对其进行了序列和基因表达分析,为研究该基因参与蜜蜂劳动分工的分子机理及蜜蜂采集行为调控奠定基础。[方法]利用RT-PCR技术扩增和克隆获得Acfor的全长序列,采用生物信息学软件对其蛋白进行结构特点分析;采用qRT-PCR对Acfor基因的表达特性进行分析;环鸟苷酸依赖的蛋白激酶(PKG)活性采用比色法检测。[结果]Acfor cDNA全长为3 029 bp(GenBank登录号为,KP662686.1),ORF序列长度为2169 bp,编码722个氨基酸。预测该蛋白分子量为81.80 ku,理论等电点(PI)5.50,为酸性、稳定的、亲水性蛋白,无信号肽和跨膜结构,存在2个糖基化位点和38个潜在磷酸化位点,主要分布在细胞质中;二级结构中,有卷曲环、α-螺旋和伸展链3种结构,三者比例分别为57.06%、28.12%和14.82%;系统发育树结果显示,中华蜜蜂Acfor和其它膜翅目for组成了一个大的分支,分支由7个亚支构成,Acfor与Amfor分子距离最近。不同日龄工蜂Acfor mRNA的表达和PKG活性的趋势一致,1~30日龄均有表达和PKG活性,1~10日龄表达量和活性下降,10日龄后开始上升,25日龄表达量和活性最高,然后随着日龄的增加而下降。[结论]可见,Acfor基因表达和PKG活性水平影响中华蜜蜂与日龄有关的采集行为。

蓖麻RcWD40家族鉴定与表达分析

植物中的WD40蛋白家族通过蛋白质-蛋白质及蛋白质-DNA的互作,参与生物过程,该家族的重要成员TTG1在拟南芥中抑制种子脂肪酸的过早积累。为揭示油料作物蓖麻中RcWD40基因家族及RcTTG1基因的表达特征,利用生物信息学手段在全基因组水平鉴定到182个RcWD40家族成员,其中RcWD40-181为RcTTG1基因,并对它们的系统发育、保守结构域及表达模式等进行分析。根据进化树结构和保守域组成分别将RcWD40家族成员分为8个cluster和28个亚家族。此外,转录组分析显示RcWD40在蓖麻的花、叶、根、茎以及各发育时期种子中具有多样的表达模式,预测家族基因可能调节这些组织的生长发育。启动子区域转录因子结合位点及种子发育表达分析结果预测RcTTG1可能承担与AtTTG1相似的脂肪酸积累负调节功能。