脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响

本文旨在构建脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失株,探讨ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌致病力的影响。本研究利用同源重组技术构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,通过生物学特性试验探究ltaS基因缺失株对产单核细胞李氏杆菌生长能力和菌体形态的影响,Western blot试验探究亲本株EGDe-prfA、缺失株ΔltaS对InlA和InlB在细菌表面的锚定情况;使用鸡胚成纤维DF-1细胞进行细胞黏附侵袭试验、小鼠RAW264.7细胞进行吞噬试验与巨噬细胞内增殖试验测定ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌侵染能力的影响;小鼠脏器细菌载量和小鼠存活试验评估ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响。结果显示:利用同源重组技术成功构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,生长曲线试验和光学显微镜观察发现ltaS基因不影响产单核细胞李氏杆菌在BHI中正常生长和细菌形态,通过Western blot试验验证ltaS基因缺失导致细菌表面毒力的InlA和InlB锚定量降低。细胞黏附侵袭试验结果表明,ΔltaS对DF-1的黏附率极显著低于亲本株EGDe-prfA(P<0.01)并且侵袭率也极显著低于亲本株EGDe-prfA(P<0.01);吞噬试验结果显示,小鼠巨噬细胞RAW264.7对ΔltaS的吞噬率与亲本株EGDe-prfA相比无显著性差异(P>0.05);而在增殖试验中,ΔltaS在RAW264.7中增殖量与亲本株EGDe-prfA存在显著差异(P<0.05)。小鼠致病力试验结果显示,经ΔltaS感染的小鼠的肝、脾内细菌载量均显著低于EGDe-prfA(P<0.01)并且EGDe-prfA感染后的小鼠96 h内全部死亡,而缺失株ΔltaS感染的小鼠存活率为80%,测定出亲本株EGDe-prfA半数致死量LD 50为1.7×104 CFU,缺失株ΔltaS半数致死量LD 50为7.49×106 CFU。综上所述,ltaS基因缺失显著减少表面InlA和InlB的锚定量,减弱产单核细胞李氏杆菌对DF-1细胞的黏附侵袭能力与RAW264.7内细菌增殖能力,并且降低对小鼠的致病性。

脂磷壁酸激活奶牛乳腺中NUPR1表达及分布研究

为了探究NUPR1基因在奶牛乳房炎中的表达及分布规律,通过构建脂磷壁酸(LTA)诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)体外炎症模型,以奶牛核蛋白1(Nucleus Protein 1,NUPR1)基因为研究对象,利用免疫组织化学技术(IHC)测定NUPR1在患病奶牛乳腺组织中的分布情况。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(WB)检测炎症相关因子、NUPR1基因及其上下游基因在奶牛乳腺炎组织及乳腺上皮细胞炎症模型中的表达规律。qRT-PCR和WB结果显示,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α在乳腺病理组织及细胞炎症模型中均极显著上调表达(P<0.01),NUPR1在奶牛乳房炎病理乳腺组织及乳腺上皮细胞炎症模型中均显著或极显著上调表达(P<0.05,P<0.01),同时,DNMT1下调表达,KLF4、SESN2和SOCS3基因上调极显著表达(P<0.01)。IHC结果显示,NUPR1主要表达于奶牛乳腺上皮细胞中,并且在奶牛患病乳腺组织中的表达量高于正常组。本研究结果为进一步探究NUPR1基因在乳房炎病理进程中的调控机理提供了试验和理论基础。

脂磷壁酸对肉鸡感染鼠伤寒沙门菌的影响

本研究旨在探讨脂磷壁酸(LTA)对感染鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)的肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响。将96只1日龄体重相近的健康仔鸡随机分成空白组(Con,基础日粮),脂磷壁酸组(LTA,基础日粮+200μg/mL LTA),鼠伤寒沙门菌感染组(ST,基础日粮)和脂磷壁酸预防组(LTA+ST,基础日粮+200μg/mL LTA),每组3个重复,每个重复8只。LTA+ST组和ST组在14日龄感染鼠伤寒沙门菌,试验周期为21 d。结果显示:LTA+ST组缓解了鼠伤寒沙门菌感染导致的肉鸡体重下降(P<0.05),提高了肉鸡生存率;与ST组相比,饲喂LTA增加了肉鸡空肠和回肠的绒毛高度(P<0.05)和绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值(P<0.05),降低了空肠和回肠的隐窝深度(P<0.05);LTA+ST组肉鸡空肠和回肠中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量显著低于ST组(P<0.01);LTA+ST组肉鸡回肠中杯状细胞和潘氏细胞数量显著高于ST组,鸡黏蛋白2(Muc2)和鸡防御素α6(DEFA6)含量显著升高(P<0.05)。综上,饲喂LTA能够改善肉鸡肠道形态,降低炎症因子的表达,增加分泌细胞数量,促进抗菌肽的表达,提高机体免疫力,促进肠道屏障发育,有效缓解鼠伤寒沙门菌感染对肉鸡肠道的损伤,维护肉鸡的肠道健康。

儿茶素对金黄色葡萄球菌脂磷壁酸诱导的小鼠乳腺炎的影响

为了探讨儿茶素对金黄色葡萄球菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)诱导的小鼠乳腺炎症反应的调节作用,使用乳导管灌注法建立小鼠乳腺炎模型,试验选取18只7周龄的雌鼠随机分为6组,即对照组、LTA致炎组、LTA+地塞米松药物治疗组、LTA+儿茶素(低、中、高浓度)治疗组。HE染色法观察乳腺组织病理变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠乳腺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)检测NF-κB信号通路的表达,从而推测药物治疗的效果。结果表明,LTA诱导后可见腺泡显著密集增生、细胞脱落坏死、中性粒细胞浸润等,不同质量浓度的儿茶素处理后与LTA致炎组相比可减少中性粒细胞的浸润等。RT-qPCR和Western blot结果显示儿茶素质量浓度为20 mg/kg时可有效的抑制NF-κB的信号通路的激活,从而抑制促炎因子的表达。

双歧杆菌脂磷壁酸对衰老小鼠脑组织自由基代谢和器官指数的影响

目的 通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)对亚急性衰老小鼠脑组织自由基代谢及器官指数的影响 ,探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理。方法 D 半乳糖诱导小鼠衰老的同时 ,连续注射双歧杆菌LTA ,检测小鼠器官指数、脑组织自由基代谢的变化。结果 模型组小鼠的脑指数、胸腺指数、肾指数显著降低 ,脾指数显著升高 ;脑组织的SOD、NO、NOS显著下降 ,MDA显著升高。而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化。

双歧杆菌脂磷壁酸抗氧化作用的实验研究

目的通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)对D-半乳糖致衰老小鼠氧化系统指标及Klotho基因表达变化的影响,探讨双歧杆菌LTA延缓衰老的分子机制。方法在D-半乳糖诱导小鼠亚急性衰老的同时,每日腹腔注射双歧杆菌LTA。用试剂盒检测小鼠肾脏组织SOD活性及MDA的含量,同时用RT-PCR、Western blot及免疫组化方法检测各组小鼠肾脏组织Klotho基因表达情况。结果与青年对照组小鼠比较,衰老模型组小鼠SOD活性显著下降,MDA含量显著升高,Klotho基因在转录和翻译水平表达均明显下降;而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化。结论双歧杆菌LTA可能通过提高衰老小鼠的抗氧化活性及上调Klotho基因表达,从而发挥其延缓衰老的作用。

双歧杆菌脂磷壁酸对不同大肠癌细胞株转移能力及VEGF表达的影响

目的研究双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及其对大肠癌细胞株侵袭、转移能力的影响。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后大肠癌细胞株LoVo和HT-29对人工基底膜(Matrigel)的黏附能力变化;Transwell小室体外侵袭迁移实验检测经LTA处理前后两株细胞侵袭、迁移能力的改变。RT-PCR和Western blot检测经LTA作用前后,VEGF在两株细胞中的表达差异。结果经20、50、80μg/ml双歧杆菌LTA处理后,LoVo细胞和HT-29细胞在30、60、90、120min时的黏附率明显低于对照组(P<0.01);经50μg/ml双歧杆菌LTA处理24h后,LoVo细胞和HT-29细胞的侵袭能力及VEGF的mRNA和蛋白质的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论双歧杆菌LTA能抑制大肠癌细胞黏附、侵袭、迁移的能力,下调其VEGF的mRNA和蛋白质的表达。

双歧杆菌脂磷壁酸抗免疫衰老的实验研究

目的:探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理。方法:在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,每日注射双歧杆菌LTA。检测各组小鼠体重增长曲线、胸腺形态、胸腺指数、用免疫组化方法检测胸腺c-fos、p16蛋白表达及用ELISA法检测外周血IL-2的含量。结果:与青年对照组小鼠相比,衰老模型组小鼠胸腺组织形态结构异常,体重、胸腺指数、胸腺c-fos蛋白表达与外周血IL-2含量显著下降,胸腺p16蛋白表达显著升高;而双歧杆菌LTA,能显著逆转上述这些变化。结论:双歧杆菌LTA具有抗衰老作用。

Toll样受体在双歧杆菌脂磷壁酸诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对Toll样受体(TLRs)表达的影响及其与诱导结肠癌细胞凋亡之间的关系。方法用Annexin V检测在双歧杆菌LTA处理前后结肠癌Lovo细胞凋亡的变化;流式细胞术检测Lovo细胞表面TLRs的表达,并用相应的TLRs封闭抗体作用后,Annexin V检测经双歧杆菌LTA诱导的Lovo细胞凋亡的变化。结果经双歧杆菌LTA处理后,结肠癌Lovo细胞发生了明显的凋亡,并有一定的时间和剂量依赖关系;结肠癌Lovo细胞有TLR受体的基础表达,经双歧杆菌LTA处理后,TLR2和TLR4在Lovo细胞上的表达增加,其中尤以TLR2增加更为明显;用相应的TLRs抗体封闭作用后,双歧杆菌LTA诱导Lovo细胞凋亡的能力下降。结论双歧杆菌LTA能诱导肿瘤细胞凋亡,并且TLRs特别是TLR2在LTA诱导肿瘤细胞凋亡中可能发挥着主要作用,TLR4可能仅起着协同作用。

双歧杆菌脂磷壁酸延缓细胞衰老的作用机制

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸(Lipoteichoic acid,LTA)在延缓H2O2诱导细胞衰老中的作用。方法H2O2诱导WI-38细胞衰老,β-半乳糖苷酶细胞化学染色计算衰老细胞百分率变化,RT-PCR和Western印迹检测衰老细胞p21、细胞周期蛋白E(cyclin E)和周期蛋白依赖性蛋白激酶2(CDK2)表达水平的变化。结果双歧杆菌LTA处理后,β-半乳糖苷酶细胞化学染色阳性细胞百分率较衰老模型组降低(P<0.01)。与年轻对照组相比,衰老模型组细胞中p21的表达增高,cyclin E和CDK2表达降低,而双歧杆菌LTA能够逆转上述变化(P<0.01)。结论双歧杆菌能延缓H2O2诱导的细胞衰老,机制可能与改变p21,cyclin E和CDK2表达水平有关。

双歧杆菌脂磷壁酸对D-半乳糖致衰老小鼠表型的影响

目的通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)对D-半乳糖致衰老小鼠生物表型的影响,探讨双歧杆菌抗衰老的作用。方法雄性昆明系小鼠,随机分组,在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,每日注射双歧杆菌LTA。各组小鼠连续处理8周后处死,观察器官组织形态的变化并测定脏器指数、骨指标、血清指标。结果青年组小鼠骨干重与体重比值为1.52±0.09,血清中NO为(18.79±0.99)μmol/L;模型组小鼠骨干重与体重比值为1.27±0.13(P<0.01),血清中NO为(14.03±2.41)μmol/L(P<0.01);此外,与对照组相比,模型组小鼠活动减少,胸腺、肾脏、脑及睾丸萎缩;骨钙、骨磷严重减少(P<0.01),血钙升高、血尿素氮和肌酐升高(P<0.05);而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化。结论双歧杆菌LTA能改善D-半乳糖致衰老小鼠的衰老表型,具有一定的抗衰老作用。

磷壁酸在细菌黏附、定植及免疫调节过程中的作用

磷壁酸是革兰氏阳性菌细胞壁的主要成分,在细菌自我保护、离子平衡、细胞分裂及其与宿主细胞互作等过程中发挥着重要生理作用。本文综述了磷壁酸在革兰氏阳性菌黏附、定植及免疫调节过程中的作用,阐述了磷壁酸识别的细胞膜受体蛋白,旨在为深入解析细菌在肠黏膜细胞膜上的黏附定植机制提供新线索。

粪肠球菌脂磷壁酸对人牙周膜成纤维细胞表达Toll样受体2及白细胞介素-1β的影响

目的探讨体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)在粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)刺激下表达Toll样受体2(TLR2)及白细胞介素-1β(IL-1β)的情况。方法体外分离培养HPDLCs,采用流式细胞术检测0.1、1、10μg.mL-1粪肠球菌LTA刺激24h后HPDLCs表面TLR2表达的改变,酶联免疫吸附法检测12、24、48 h后IL-1β的分泌情况,并用相同质量浓度的大肠杆菌内毒素作为对照;用TLR2中和抗体预处理HPDLCs 1 h,观察1μg.mL-1 LTA刺激24 h后其IL-1β的分泌量。结果 LTA可致HPDLCs表面TLR2表达增加(P<0.05);与对照组相比,粪肠球菌LTA可致HPDLCs分泌IL-1β增加(P<0.05),刺激12 h后可检测到IL-1β,48 h内呈上升趋势。TLR2中和抗体对粪肠球菌LTA诱导HPDLCs分泌IL-1β无明显封闭作用。结论粪肠球菌LTA可引起HPDLCs表面TLR2表达及IL-1β分泌增加。

双歧杆菌脂磷壁酸对衰老小鼠肝脏与骨髓的影响

目的: 通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)对衰老小鼠肝脏形态、p16蛋白、c Fos蛋白表达及骨髓细胞微核率的影响,探讨双歧杆菌抗衰老的分子机制.方法:雄性昆明系小鼠,随机分组,在建立D 半乳糖诱导衰老小鼠模型的同时,每日ip双歧杆菌LTA. 40d后,采用免疫组化SABC法、Gimesa染色和其他它方法检测小鼠体质量、肝脏指数、形态、p16蛋白、c Fos蛋白及骨髓红细胞微核率的变化.结果: 与青年对照组小鼠相比,衰老模型组小鼠体质量、肝脏c Fos蛋白表达明显降低(P<0 05),p16蛋白表达及骨髓红细胞微核率显著增高(P<0 05);给予双歧杆菌LTA,衰老模型小鼠体质量与肝脏c Fos蛋白水平明显增高(P<0 05),而p16蛋白水平及骨髓红细胞微核率显著降低(P<0 05),并且肝脏组织形态结构也得到了明显改善.结论: LTA可延缓肝脏与骨髓衰老,抑制染色体畸变,上调c fos,下调p16表达.

脂磷壁酸－葡糖基转移酶－葡聚糖相互作用对口腔链球菌粘附作用的影响

采用体外实验的方法观察ＬＴＡ、ＧＴＦ和葡聚糖三因素相互作用对口腔链球菌粘附的影响，结果认为这三因素具有协同作用促进口腔链球菌的粘附。

双歧杆菌脂磷壁酸生物学活性研究进展

本文综述了双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)的免疫激活、抗肿瘤、抗突变、抗衰老及粘附等重要生物学功能。

金葡菌脂磷壁酸促进破骨细胞分化的分子机制

目的:探讨金黄色葡萄球菌脂磷壁酸(LTA-sa)促进破骨细胞分化的分子机制。方法:以浓度为200 ng/m L的LTA-sa作用于Raw264.7细胞,分别作用0、5、10、20、40、60 min及0、1、2、3 d后,用Western blot检测破骨细胞分化过程中相关信号通路的蛋白表达水平;并以100、200及400 ng/m L的LTA-sa及磷酸盐缓冲液作用于Raw264.7细胞,于作用后1、2、3 d用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α、IL-1α及IL-6的表达情况。结果:(1)Western blot显示,在LTA-sa的作用下,IκB-α在5、10 min时降低,而p-NFκB在10 min时表达明显增高;此外,NFATc1在LTA-sa作用后第2及第3天表达逐渐增高,上述结果经统计分析,差异均有统计学意义(均P<0.001)。(2)ELISA检测发现,IL-6在第2、3天表达增高,并随LTA-sa浓度的增加及作用时间的延长,其表达逐渐增多,经统计分析差异有统计学意义(均P<0.001)。结论:LTA-sa通过NF-κB信号通路及IL-6的分泌促进破骨细胞分化。

双歧杆菌脂磷壁酸对NF-κB在结肠癌细胞中表达的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对NF-κB在结肠癌细胞HCT-116中表达的影响。方法采用免疫细胞化学染色、PAGE及Western blot等,分析经双歧杆菌LTA处理前后,NFκ-B蛋白在结肠癌细胞HCT-116中表达的差异。结果经LTA处理后,NFκ-B在HCT-116细胞中的表达明显降低,且呈剂量依赖性。结论双歧杆菌LTA可下调NF-κB的表达,对了解LTA诱导HCT-116细胞凋亡的机制提供了一定的实验依据。

以脂磷壁酸为靶点的新抗筛选模型的建立和应用

目的 :根据达托霉素的作用机制 ,寻找与糖肽类抗生素无交叉耐药性的新抗生素。方法 :本实验建立了以脂磷壁酸为靶点的新抗筛选模型 ,并通过脂磷壁酸合成抑制模型对所筛得的阳性菌株进行复筛验证。结果 :从 12 0 0株放线菌中筛选到 2株阳性菌株 ,初步证明其抗菌活性显示出Ca2 + 依赖性 ,并在脂磷壁酸合成抑制模型上显示一定的抑制活性。结论 :阳性菌株 15 10和 16 15活性成分对MRSA等细菌具有良好的抗菌活性 ,值得深入研究。