谷胱甘肽过氧化酶4在胃肠道肿瘤中的作用与治疗

胃肠道肿瘤发病率逐年上升,其病死率在我国癌症中位居前列,严重危害国民健康。只有提前预防加有效治疗双管齐下,才能更好地降低癌症负担。铁死亡是一种铁依赖的,区别于细胞凋亡、坏死、自噬的细胞程序性死亡方式。近几年,肿瘤耐药性的增加引起了学者对诱导癌细胞铁死亡的兴趣,因为铁死亡固有的生理功能之一就是肿瘤抑制。铁死亡受到氧化系统和抗氧化系统的平衡调节,谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)是抗氧化系统的核心因子之一,在多种恶性肿瘤中异常表达,与肿瘤的不良生物学行为相关。在胃肠道肿瘤中,GPX4表达异常,并参与肿瘤的发生发展、治疗和耐药。作为胃肠道肿瘤中许多分子的作用靶点(例如小分子化合物、miRNA和纳米反应器等),GPX4在多个水平上受到调节,并参与调控多种复杂的信号通路。以GPX4为靶点的策略有望成为治疗胃肠道肿瘤的新途径。本文就GPX4在胃肠道肿瘤中的国内外研究进展进行综述,阐明其分子调控机制和目前的药物研究进展,为胃肠道肿瘤的研究及防治提供新的思路。

外源谷胱甘肽对镉胁迫下4种紫花苜蓿光合作用和抗氧化酶活性的影响

试验旨在探究在镉污染严重牧区添加外源谷胱甘肽(GSH)对紫花苜蓿的光合作用和抗氧化酶的影响。试验以中苜1号、WL525HQ、甘农3号、甘农9号为试验材料,设置对照组(CK组,Hoagland培养液)、镉处理组(Cd组,Hoagland+15 mg/L Cd)和混合处理组(Cd+GSH组,Hoagland+15 mg/L Cd+25 mg/L GSH)进行水培试验。测定叶片相对含水量(RWC)、叶绿素含量(SPAD)、气孔导度(Gs)、净光合速率(Pn)、胞间CO_(2)浓度(Ci)、蒸腾速率(Tr)以及丙二醛(MDA)含量、脯氨酸(Pro)含量和抗氧化酶活性。结果表明:与Cd组相比,Cd+GSH组各品种紫花苜蓿的RWC、SPAD、Gs、Pn、Ci、Tr均有一定程度的提高。与Cd组相比,Cd+GSH组各品种的MDA含量显著降低(P<0.05),WL525HQ、甘农3号、中苜1号添加外源GSH后Pro含量显著降低(P<0.05)。与Cd组相比,Cd+GSH组各品种过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性显著降低(P<0.05),甘农9号和甘农3号超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.05),WL525HQ、甘农9号、甘农3号过氧化氢酶(CAT)的活性显著提高(P<0.05)。研究表明,添加外源GSH后可缓解镉污染严重牧区紫花苜蓿受到的镉的毒害作用,降低氧化损伤,提高其适应能力,且紫花苜蓿各生理指标间具有一定的相关关系。

谷胱甘肽过氧化酶4及铁蛋白重链1在甲状腺乳头状癌组织中的表达

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中谷胱甘肽过氧化酶4(GPX-4)和铁蛋白重链1(FTH-1)的表达情况,分析二者在PTC发生发展中的生物学意义。方法采集2019年6月至2023年8月合肥市第三人民医院40例PTC病人的手术切除标本,分别为癌组织和癌旁组织。应用免疫组织化学染色检测PTC组织和癌旁组织中GPX-4和FTH-1的表达情况,然后利用SPSS 22.0软件进行统计分析。结果GPX-4在PTC组织与癌旁组织中的阳性表达率分别为80.00%(32/40)和15.00%(6/40),GPX-4在癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ^(2)=18.38,P<0.001)。同样,FTH-1在PTC组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为72.50%(29/40)和10.00%(4/40),FTH-1在癌组织中的阳性表达率也显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ^(2)=18.58,P<0.001)。GPX-4和FTH-1在PTC组织中的表达与PTC的TNM分期及淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论GPX-4和FTH-1在PTC组织中均呈阳性高表达,与PTC的TNM分期和淋巴结转移有关,提示其与PTC的发生发展密切相关,二者检测可作为评估PTC临床预后的辅助指标,也为PTC的分子靶向治疗提供新的方向。

脑缺血再灌注后补体C3高迁移率族蛋白B1及谷胱甘肽过氧化物酶4表达变化

目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点脑组织补体C3、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的变化。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠72只,按数字随机法分为假手术组36只和模型组36只,线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,根据再灌注时间分为3、6、24 h及3 d共4个时间点,每个时间点9只。参照Zea Longa评分法行神经功能学评分。每组行R2StarMap成像、弥散加权成像(DWI)、T_1加权成像、T_2加权成像扫描。测量DWI异常信号体积,检测脑梗死体积。R2StarMap原始图经后处理生成R2^(*)伪彩图,测量双侧大脑中动脉供血区R2^(*)值,检测脑铁沉积含量。采用蛋白免疫印迹法检测C3、HMGB1、GPX4表达。结果假手术组大鼠无神经功能损伤,模型组大鼠3、6、24 h及3 d神经功能评分较假手术组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠3、6、24 h及3 d右侧脑梗死体积较假手术组明显增大,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组3、6、24 h及3 d右侧大脑中动脉供血区R2^(*)值明显高于左侧(P<0.05,P<0.01)。模型组3、6、24 h及3 d右侧大脑中动脉供血区R2^(*)值明显高于假手术组右侧(P<0.05,P<0.01)。模型组3、6、24 h及3 d的R2^(*)比值明显高于假手术组(1.82±0.82 vs 1.12±0.31,P<0.05;1.31±0.26 vs 1.04±0.14,P<0.05;1.94±0.74 vs 1.06±0.10,P<0.01;1.99±0.39 vs 1.02±0.11,P<0.01)。与假手术组比较,模型组3、6、24 h及3 d补体C3和HMGB1表达明显升高,GPX4表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能对脑组织中补体C3、HMGB1、GPX4表达有显著影响。

还原型谷胱甘肽联合多烯磷脂酰胆碱治疗急性药物性肝损害的疗效

目的:探讨急性药物性肝损害(DILI)患者接受还原型谷胱甘肽(GSH)联合多烯磷脂酰胆碱治疗的疗效及安全性,并观察该联合方案对患者肝功能、炎症反应等指标的影响。方法:纳入2020年9月至2022年12月于河南省安阳市滑县人民医院接受治疗的80例DILI患者,按照随机数字表法分为对照组与观察组,各40例。对照组予以多烯磷脂酰胆碱治疗,在此基础上,观察组加用GSH治疗。对比两组疗效及安全性,并比较治疗前后两组肝功能[总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)]、肝脏储备功能及炎症反应[C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-2(IL-2)]。结果:治疗4周后,观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);两组治疗4周后TBil、ALT、AST水平及Child-Pugh评分较治疗前低,且观察组比对照组更低(P<0.05);两组治疗4周后CRP、IL-6、IL-2水平较治疗前低,且观察组比对照组更低(P<0.05);两组不良反应发生率比较相当(P>0.05)。结论:急性DILI患者采用GSH联合多烯磷脂酰胆碱治疗疗效确切,可有效促进肝功能恢复,提升肝脏储备功能,减轻炎症反应,且用药安全性较高。

还原型谷胱甘肽配合多烯磷脂酰胆碱治疗NAFLD的疗效及对患者血清PTX3、SOD、GSH-Px水平的影响

目的探讨还原型谷胱甘肽配合多烯磷脂酰胆碱治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的疗效及对患者血清正五聚体蛋白3(PTX3)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响。方法选取2020年3月—2023年2月招远市人民医院治疗的60例NAFLD患者作为研究对象,按随机数表法分为对照组和观察组,每组30例。对照组采取多烯磷脂酰胆碱治疗,观察组采取还原型谷胱甘肽与多烯磷脂酰胆碱联合治疗,两组均用药1个月。比较两组临床疗效、临床指标、血清PTX3、SOD、GSH-Px水平、肝功能指标、血脂水平及不良反应发生情况。结果观察组的总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组腰围/臀围(WHR)及身体质量指数(BMI)均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组PTX3、SOD、GSH-Px水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与单一使用多烯磷脂酰胆碱相比,采取还原型谷胱甘肽与多烯磷脂酰胆碱联合治疗NAFLD患者的临床效果显著,可进一步促进患者减重,调节患者体内PTX3、SOD、GSH-Px水平,改善肝功能及血脂,且安全性良好。

梭鱼草叶片抗氧化酶、抗坏血酸-谷胱甘肽循环与乙二醛酶系统对铅胁迫的响应

为了探明梭鱼草叶片细胞应对Pb^(2+)胁迫的生理机制,研究以液培法考察了不同浓度Pb^(2+)胁迫下梭鱼草叶片丙二醛(MDA)与叶绿素含量,以及抗氧化酶活性、抗氧化剂含量和乙二醛酶系统的变化规律。结果表明,(1)5.0 mg/L Pb^(2+)胁迫第14天和第21天时,梭鱼草叶片叶绿素含量,过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)等抗氧化酶活性,抗坏血酸(AsA)、脱氢抗坏血酸(DHA)、谷胱甘肽(GSH)、非蛋白巯基总肽(NPT)和植物螯合肽(PCs)等抗氧化剂含量没有发生明显变化;第21天时叶片细胞中甲基乙二醛(MG)含量显著增加,而MDA含量无明显增加。(2)10.0 mg/L Pb^(2+)处理至第21天时,梭鱼草叶片MDA、MG、GSH及NPT含量及过氧化物酶(POD)活性明显增加,而脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)、甲基乙二醛酶Ⅱ(GlyⅡ)活性呈相反变化趋势。(3)在15.0 mg/L Pb^(2+)处理期间,梭鱼草叶片MDA含量显著增加,其GSH、NPT、PCs被诱导合成以螯合细胞中过量积累的Pb^(2+);同时叶片POD、SOD、APX活性和AsA含量显著增加。15.0 mg/L Pb^(2+)处理第21天时,乙二醛酶系统已经不能缓解高浓度Pb^(2+)胁迫诱发的羰基胁迫。可见,梭鱼草叶片对5.0 mg/L Pb^(2+)具有良好的耐受性;在较高浓度(≥10.0 mg/L)Pb^(2+)胁迫下,梭鱼草叶片细胞膜脂过氧化作用加剧,此时其主要通过合成非蛋白巯基化合物、增加抗氧化酶活性及AsA含量来减缓氧化损伤;本试验条件下梭鱼草叶片乙二醛酶系统没有表现出明显的解毒作用。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期谷胱甘肽过氧化酶、丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷测定价值探讨

目的分析外周血谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)与慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)病情严重程度的相关性。方法我院收治的128例AECOPD患者为观察组,100例健康体检者为对照组,根据简化急性生理学评分Ⅱ(SAPSⅡ)评分系统将观察组患者分为轻度组(20~29分,n=42)、中度组(30~39分,n=46)及重度组(≥40分,n=40),根据预后分为存活组(n=98)和死亡组(n=30),检测外周血GSH-PX、MDA、8-OHdG水平,分析外周血GSH-PX、MDA、8-OHdG水平与AECOPD严重程度相关性,分析GSH-PX、MDA、8-OHdG水平对AECOPD及预后的预测价值。结果观察组GSH-PX水平低于对照组,MDA、8-OHdG水平高于对照组(P<0.05);重度组GSH-PX水平低于中、轻度组,MDA、8-OHdG水平高于中、轻度组,中度组GSH-PX水平低于轻度组,MDA、8-OHdG水平高于轻度组(P<0.05)。AECOPD严重程度与GSH-PX水平呈负相关,与MDA、8-OHdG水平呈正相关(P<0.05)。GSH-PX、MDA、8-OHdG联合预测AECOPD的灵敏度为95.32%%、AUC为0.943,均高于单独诊断(P<0.05)。存活组GSH-PX水平高于死亡组,MDA、8-OHdG水平低于死亡组(P<0.05);GSH-PX、MDA、8-OHdG联合预测AECOPD预后的敏感度为88.50%,AUC为0.863,高于单独检测(P<0.05)。结论AECOPD患者外周血GSH-PX降低和MDA、8-OHdG水平升高与病情严重程度有关,且三者联合预测AECOPD及预后价值较高,可为临床诊治提供参考,可进一步推广。

谷胱甘肽过氧化酶4激动剂Fer-1对睡眠碎片化的老年小鼠术后认知功能障碍防治作用观察

目的 观察谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)激动剂Ferrostatin-1(Fer-1)对睡眠碎片化的老年雄性小鼠术后认知功能障碍(POCD)的防治作用,并探讨其可能作用机制。方法 (1)睡眠碎片化老年雄性小鼠POCD观察及GPX4、线粒体呼吸链相关指标检测:取24只老年C57BL/6雄性小鼠随机分为实验组和对照组,每组各12只。实验组小鼠于多平台水环境睡眠碎片化饲养3天,对照组小鼠正常睡眠3天,第4天时两组均行胫骨骨折加髓内固定术(TFS,POCD动物模型制备方法),术后第3天分别采用逃避恐惧实验和Y-maze迷宫实验评估两组小鼠的逃避恐惧能力、短期记忆能力。随后处死两组小鼠,取小鼠海马组织检测海马组织谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、线粒体呼吸链复合物Ⅰ(ComplexⅠ)及活性氧簇(ROS),取小鼠脑组织测算线粒体呼吸链功能相关指标线粒体基础呼吸率、ADP激发呼吸率及最大呼吸率。(2)加入Fer-1的睡眠碎片化老年小鼠POCD观察及海马组织ROS检测:另取12只老年雄性小鼠分为1、2组,每组各6只。两组均于多平台水环境睡眠碎片化饲养3天,1组小鼠在睡眠碎片化同时腹腔注射10 mg/kg的Fer-1,1次/天,连续3天;2组腹腔注射同体积的生理盐水,1次/天,连续3次。第4天时两组行TFS手术,TFS术后第3天采用逃避恐惧实验测试和Y-maze实验评估小鼠的逃避恐惧能力和短期记忆能力,利用线粒体荧光探针Mito SOX测算海马组织ROS。结果 与对照组比较,术后第3天实验组小鼠僵直反应时间短、进入新颖臂百分比低、海马组织GPX4相对表达量低(P均<0.05);与对照组比较,术后第3天实验组小鼠脑组织线粒体基础呼吸率低、ADP激发呼吸率低、最大呼吸率低,海马组织ComplexⅠ活性低、ROS含量高(P均<0.05)。与2组比较,术后第3天1组小鼠僵直反应时间长、进入新颖臂百分比高、海马组织ROS含量低(P均<0.05)。结论 腹腔注射Fer-1可改善睡眠碎片化的老年雄性小鼠POCD。睡眠碎片化可能通过抑制小鼠海马组织GPX4及ROS表达、抑制线粒体呼吸链功能,促进POCD的发生发展。Fer-1可能通过提高小鼠海马组织GPX4的表达,降低海马组织ROS,减轻POCD。

苦瓜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶cDNA的克隆及其特征分析

根据谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶 (PHGPX)氨基酸序列中高度保守的区段设计引物 ,采用RACE PCR从苦瓜中克隆到一个全长 92 7bp的cDNA片段 .DNA序列的数据库分析比较表明 ,该cDNA编码 16 7个氨基酸 ,含有动植物PHGPX的特征结构 ,是一个新发现的苦瓜PHGPX基因 (mocPHGPX) .RNA印迹结果显示 ,该基因在苦瓜幼苗的根中表达相对较弱 ,茎的信号较强 ,叶中最强 .

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的克隆及在大肠埃希菌中的表达

目的在大肠埃希菌中表达磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipidhydroperoxideglutathioneperoxidase,PHGPx),以期用于抗PHGPx抗体的制备。方法用特异引物从基因文库中扩增出PHGPxcDNA,与表达载体重组,转化大肠埃希菌。重组体中的PHGPx经点突变作用,编码硒半胱氨酸的密码子UGA变为编码半胱氨酸的UGU。结果序列分析表明,克隆载体中包含PHGPx的完整编码序列及3'未翻译区序列;经SDS鄄PAGE及WesternBlot证实PHGPx在大肠埃希菌中获得了成功表达。结论突变的PGPGx可以在大肠埃希菌中高效表达并可用于制备抗PHGPx抗体。

水稻磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在蛋白质水平上的组织和诱导表达特征(英文)

蛋白质是生命活动的主要承担分子,了解蛋白质在有机体中的时空分布对于正确解析蛋白质的功能十分重要.磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是目前发现的唯一能够直接还原膜上脂类过氧化物的抗氧化酶,在保护生物膜免受过氧化损伤方面有着重要作用.采用Westernblot技术,分析了水稻PHGPx(OsPHGPx)在水稻不同组织以及多种胁迫条件下的蛋白质表达特征.结果表明,OsPHGPx在成熟水稻植株内主要分布于叶组织中,以旗叶中含量最高,而在水稻幼苗中则在茎及叶组织中均检测到较强的杂交信号.OsPHGPx在幼苗中的表达受到H2O2和NaCl的强烈诱导,但植物激素对其表达的影响较弱.H2O2和NaCl的诱导效果呈现出时间及剂量的相关性,当用0.5mmol/LH2O2处理12h或用500mmol/LNaCl处理24h,此时OsPHGPx表达量达到最大值.对H2O2清除剂二甲基硫脲处理的水稻幼苗,外源H2O2的再处理并不能诱导OsPHGPx的表达,而NaCl的诱导效果并不受影响,说明H2O2可能并不介导NaCl诱导OsPHGPx的表达.这些结果为进一步研究OsPHGPx在水稻中生物学功能奠定了基础.

麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶高效可溶性表达及其部分酶学性质

[目的]克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。[方法]采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨酸突变体DGPx4表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→ Cys),并在大肠杆菌中通过添加His标签进行可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化得到融合蛋白DGPx4;采用总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒检测DGPx4活力以研究其酶学性质。[结果]克隆获得的DGPx4基因编码序列全长516 bp,编码172个氨基酸,编码蛋白分子量约20 kD,理论等电点(pI)为8.9。构建的突变体基因原核表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→Cys)可在大肠杆菌中成功诱导表达获得融合蛋白DGPx4,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析即获得高纯度的DG-Px4。以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)为底物时,DGPx4的最适反应温度为32 ℃,最适pH为8.0,对NaCl浓度较敏感;Cu^2+和Ni^2+对DGPx4活力有较高的促进作用,Mg^2+和Mn^2+对DGPx4活力有一定的抑制作用,Ca^2+和Zn^2+对DG-Px4活力则无明显的促进或抑制作用。[结论]从鸭肝细胞中克隆获得的DGPx4基因序列经定点突变后可在原核细胞中高效表达,且纯化后的高纯度融合蛋白DGPx4具有GPx4活力,能在抗脂质氧化过程中发挥作用。

萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因结构及其调控序列分析(英文)

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)家族的重要一员,是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类.此前的研究表明,萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(RsPHGPx)编码一个有生理功能的过氧化物酶,并且RsPHGPx基因的表达可能受发育和环境胁迫信号的复杂调控.要深入了解该基因的表达调控机制首先必须阐明RsPHGPx基因的结构及其上游调控序列.DNA印迹表明萝卜RsPHGPx基因以单拷贝的形式存在于基因组中.以基因组DNA为模板,通过常规PCR与染色体步行相结合的方法克隆到了一段3.3kb长的RsPHGPx基因组序列.分析发现,该基因由7个外显子和6个内含子组成,所有内含子的剪切位点均符合真核生物GT-AG规则.另外还发现该基因的上游基因是生物素合成酶基因;位于RsPHGPx基因上游的调控序列只有不足300bp.这些结构特征与拟南芥AtGPX3基因极其相似.顺式作用元件的数据库搜索发现RsPHGPx基因的上游调控序列含有多个响应激素(如E-Box和W-Box)、胁迫(如转录因子MYB和MYC的结合位点)和光(如BoxⅡ和Ⅰ-Box)信号的元件.RNA印迹分析表明RsPHGPx基因的表达受到脱落酸(ABA)和连续光照(在黄化苗中)处理的负调控,受到冷胁迫(4℃)的正调控,这暗示了预测的顺式作用元件的调控作用.然而,除草剂paraquat对该基因表达的正调控作用,暗示了某些与氧化胁迫相关的未知元件的存在.这些结果进一步印证了RsPHGPx基因的表达受发育和环境胁迫信号复杂调控的推测.这是迄今为止首个关于植物PHGPx基因结构和上游调控序列的系统报道,为今后全面认识植物PHGPx基因的表达调控机制奠定了必要基础.

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在精子发育中的作用研究进展

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是广泛存在于哺乳动物细胞内唯一能够直接还原生物膜上脂类过氧化物的一类含硒酶。该酶在保护细胞膜完整、维持细胞的正常功能中发挥着重要作用;同时PHGPx还作为精子的结构物质,在精子的发育和成熟过程中发挥着重要作用;精液中PHGPx活性是评价精液品质的重要参数之一。对PHGPx的基因结构、体内分布以及与精子发育与成熟相关的生物学特性和功能等研究进展进行了总结。

人类磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的真核表达及其多克隆抗体的制备

目的在真核细胞中表达人磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)并制备抗PHGPx多克隆抗体。方法用特异引物从人睾丸组织cDNA文库中扩增出人线粒体型PHGPxcDNA,与真核表达载体pcDNA3.1/His重组,在COS-1细胞内表达PHGPx。用大肠杆菌表达的突变的PHGPx免疫动物,制备抗PHGPx抗体。结果重组体pcDNA-PHGPx转染的COS-1细胞表达了人PHGPx融合蛋白,PHGPx活性为111.5μmol·mg-1·min-1,高于对照组5倍。免疫扩散测得抗PHGPx多克隆抗血清滴度为1∶16;用于蛋白印迹时稀释倍数为1∶500,可见特异免疫沉淀条带。结论人PHGPx在COS-1细胞内获得了表达,抗PHGPx多克隆抗体有特异性,可以用于重组表达的PHGPx的鉴定。

山参磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶cDNA克隆及序列分析

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)具有明显的抗氧化活性,避免细胞膜受到过氧化损伤。本研究利用RACE技术,克隆出山参phgpx基因全长c DNA。序列分析表明:该克隆片段全长490 bp,编码162个氨基酸,有3个真核生物PHGPx特有的保守亚结构域。该片段编码的蛋白为跨膜亲水性稳定蛋白质,与柑橘、蓖麻等PHGPx氨基酸序列同源性分别为76%和75%。同时建立了9种植物的系统进化树。

N末端缺失萝卜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及结构预测

将N末端定位信号缺失萝卜PHGPx(RsPHGPx)的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化至大肠杆菌内进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了用于晶体学研究的RsPHGPx.其浓度约为10 g/L,纯度超过95%,具有PHGPx活性.三维结构同源建模显示RsPHGPx的结构为典型的硫氧还蛋白折叠形式.

亚硒酸钠对枸杞幼苗磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶活性和硒含量的影响

目的探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)对宁夏枸杞幼苗磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHG-PX)活性和硒(Se)含量的影响。方法将75株宁夏枸杞幼苗随机分为对照组、Na2SeO30.5 mg.kg-1组(每千克土壤施用Na2SeO30.5 mg)和Na2SeO32.0 mg.kg-1组(每千克土壤施用Na2SeO32.0 mg),每组25株。分别于处理后24 h、48 h、72 h及96 h测定PHG-PX活性和Se含量。Se含量采用国际标准GB12399-90进行测定,PHG-PX活性以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的减少速度来表示。结果Na2SeO30.5 mg.kg-1组处理幼苗48 h和Na2SeO32.0 mg.kg-1组处理24 h后,PHG-PX活性高于对照组(P<0.05)。Na2SeO32.0 mg.kg-1组处理后各时间点PHG-PX活性均高于Na2SeO30.5 mg.kg-1组,48 h后达到显著水平(P<0.05),96 h后达到极显著水平(P<0.01)。0.5 mg.kg-1和2.0 mg.kg-1Na2SeO3处理后各时间点枸杞幼苗Se元素的含量均高于对照组(P<0.01)。Na2SeO32.0 mg.kg-1组处理后各时间点枸杞幼苗的Se含量均高于Na2SeO30.5 mg.kg-1组(P<0.01)。结论外源Se的摄入能够提高枸杞幼苗体内Se元素的含量和PHG-PX活性,从而提高枸杞幼苗的营养价值和保健价值。

动物硒蛋白-磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶

磷脂的过氧化过程与多种疾病有关,包括炎症、动脉粥样硬化、神经退行性变化、衰老等。磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶是目前发现唯一可以直接减少膜系统及脂蛋白上的磷脂氢过氧化物,联合维生素E可抑制磷脂过氧化。磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶是谷胱甘肽过氧化物酶家族中的第2个被鉴定的含硒酶,是相对分子质量为19000(M r)的单体酶,其基因位于人类19号染色体上。磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶曾被认为是一种保护质膜的普通的抗氧化酶,现在认为具有多种功能,与人类多种疾病的发生发展有关。