体外神经干细胞培养过程中蛋白激酶磷脂酰肌醇-3激酶/AKT信号途径的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3kinase,PI3K)/AKT信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法:实验于2001-11/2004-04在重庆医科大学神经病学研究所完成。分为对照组、PI3K特异性抑制剂wortmannin组和LY294002组;采用间接免疫荧光法检测nestin,NF-200和GFAP的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;WesternBlot法检测磷酸化的AKT,caspase-9和bad的表达。结果:随着wortmannin和LY294002浓度增大,神经干细胞的形态变化逐渐明显,而且细胞凋亡率也逐渐增加。低浓度时(wortmannin浓度为5nmol/L,LY294002浓度为2μmol/L),神经干细胞凋亡率与对照组无显著性意义(P>0.05);高浓度时(wortmannin浓度为50,100nmol/L,LY294002浓度为50,100μmol/L),神经干细胞凋亡率与对照组、低浓度组有非常显著性意义(P<0.01)。WesternBlot结果提示,随着PI3K特异性抑制剂浓度增大,磷酸化AKT的表达逐渐减弱。当高浓度wort-mannin(20nmol/L)和LY294002(10μmol/L)抑制了AKT磷酸化后,磷酸化的caspase-9,Bad表达减弱。此外,将wortmannin组和LY294002组存活的细胞接种后,分化后细胞的NF-200,GFAP表达无显著性意义。结论:神经干细胞存活依赖于PI3K/AKT途径的活化,其机制可能是PI3K/AKT活化后。

磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号途径及其在肌肉生长发育中的调控机制

磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)是一类特异性催化磷脂酰肌醇(PI)的激酶,其信号途径是细胞内重要的信号转导通路之一,广泛参与动物机体的新陈代谢过程。本文就PI3K/Akt信号途径的结构、活化机制及其在细胞凋亡和肌肉生长发育中的调控机制进行综述。

二甲双胍对胰岛素抵抗小鼠肝组织中胎球蛋白A表达及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路的影响

目的探讨二甲双胍对胰岛素抵抗(IR)小鼠肝组织中胎球蛋白A(FA)表达及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法将30只无特定病原体级健康雄性小鼠适应性喂养1周后,随机选择10只小鼠为正常组,给予普通饲料喂养8周;另外20只小鼠给予高脂饲料喂养8周,制备IR模型。将造模成功的16只小鼠随机分为模型组(n=8)和二甲双胍组(n=8),二甲双胍组小鼠给予二甲双胍灌胃,102.75 mg·kg^(-1),每日1次,连续给药4周;正常组和模型组小鼠给予同等剂量的生理盐水灌胃。造模8周期间和给药4周期间,每周称量小鼠体质量。给药4周后,3组小鼠禁食12 h,采用腹腔注射葡萄糖耐量实验(IPGTT)检测小鼠糖耐量。给药4周后,使用小鼠胰岛素酶联免疫吸附试验法测定小鼠血清空腹胰岛素(FINS)水平,并计算稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肝组织中胎球蛋白A(FA)、PI3K、Akt mRNA相对表达量;采用Western blot法检测小鼠肝组织中FA、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白相对表达量。结果造模8周后,模型组和二甲双胍组小鼠的体质量显著高于正常组(P<0.05);给药1、2、3、4周后,模型组和二甲双胍组小鼠的体质量显著高于正常组(P<0.05);给药3、4周后,二甲双胍组小鼠的体质量显著低于模型组(P<0.05)。给药4周后,模型组和二甲双胍组小鼠的IPGTT曲线下面积显著高于正常组,二甲双胍组小鼠的IPGTT曲线下面积显著低于模型组(P<0.05)。给药4周后,模型组小鼠的FINS水平及HOMA-IR显著高于正常组和二甲双胍组(P<0.05);给药4周后,二甲双胍组与正常组小鼠的FINS水平及HOMA-IR比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药4周后,模型组小鼠肝组织中FA、PI3K、Akt mRNA相对表达量及FA蛋白相对表达量显著高于正常组和二甲双胍组,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著低于正常组和二甲双胍组(P<0.05);二甲双胍组与正常组小鼠肝组织中FA、PI3K、Akt mRNA相对表达量、FA蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论二甲双胍可改善IR小鼠的肥胖状态,提高机体对血糖浓度的调节能力,降低FINS水平及HOMA-IR,其机制可能为二甲双胍通过降低肝脏FA表达,激活PI3K/Akt通路,从而缓解IR。

磷脂酶在植物逆境胁迫信号传导中的作用

磷脂酰肌醇是构成细胞膜的重要组分,它在磷脂酶的作用下水解产生三磷酸肌醇、二酰基甘油、磷脂酸、溶血磷脂、不饱和脂肪酸等,不仅可以作为磷脂的合成原料,而且在细胞感受外界刺激及其信号传导过程中也起着重要作用.磷脂酰肌醇信号传导途径与光合作用、激素调控等影响植物生长发育过程及抗逆信号传导关系密切,由于磷脂酶的活性直接影响这些信号分子的产生,磷脂酶在磷脂酰肌醇信号传导途径中处于一个中心地位,根据磷酯不同水解位点所分类的磷脂酶PLA2,PLC和PLD具有多种同功酶形式,分别在植物生长发育的不同阶段及对外界环境因子应答的信号传导过程中起着重要的调节作用.

Notch信号途径对放疗后骨髓谱系造血重建的影响及其机制

目的探讨Notch信号途径对放疗后骨髓谱系造血重建的影响及其机制。方法通过交配获得骨髓造血细胞特异性敲除Notch信号MxCre^+RBP-J^(flox/flox)的双转基因小鼠(敲除组)和未敲除MxCre^+RBP-J^(flox/+)对照小鼠(未敲除组),给予全身一次性^(60)Co-γ射线电离辐照,观察辐照后第7天两组生存状态、造血重建情况。C57/B6小鼠接受全身一次性^(60)Co-γ射线电离辐照,通过腹腔注射Notch配体重组蛋白D1R或PBS分别建立Notch信号激活小鼠(激活组)和未激活小鼠(未激活组),观察给药第7天重组蛋白D1R的体内活性、两组造血重建情况以及髓系前体细胞周期、增殖信号通路变化。另取C57/B6小鼠随机分为阴性对照组、D1R组、阳性对照组,D1R组和阳性对照组同时接受等剂量^(60)Co-γ射线电离辐照后腹腔注射D1R和PBS,阴性对照组不予处理,停药3个月,观察重组蛋白D1R长期毒性。结果与未敲除组比较,敲除组生存状态更差,骨髓造血干/祖细胞、骨髓和外周血有核细胞及髓系细胞形态正常,但数量明显减少(P均<0.05)。与未激活组比较,激活组骨髓造血细胞Notch信号活化片段ICN1的核表达增多,Notch信号激活,骨髓造血干/祖细胞、骨髓和外周血有核细胞及髓系细胞数均明显高于对照组(P均<0.05),骨髓髓系前体细胞G_0/G_1期比例减少,S期比例增多,PI3K蛋白表达增加(P均<0.01)。停药3个月,D1R组细胞形态、组织构架及造血谱系与阴性对照组无明显差别,但骨髓造血干/祖细胞、骨髓和外周血髓系细胞数明显高于阳性对照组(P均<0.05)。结论 Notch信号途径可正向调控放疗后造血重建,尤其髓系重塑,其机制可能与Notch信号激活髓系前体细胞PI3K增殖信号通路、加快细胞周期进程有关。

骨桥蛋白诱导的黏着斑激酶信号途径参与大肠癌的侵袭与转移

目的观察并分析大肠癌中骨桥蛋白(OPN)、整合素β3、黏着斑激酶(FAK)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)的表达特点、相互关系以及与大肠癌进展的相关性,试图揭示介导大肠癌侵袭的信号途径。方法采用SABC免疫组织化学方法,检测这4种抗原在14例结肠癌组织和16例直肠癌组织以及相应的正常组织中的表达。结果OPN在正常组织中主要表达于间质,而在大肠癌组织中主要分布于实质,且随Dukes分期的进展,实质中OPN的阳性染色颗粒逐渐增多,间质中却明显减少;整合素β3在正常组织中呈中等量表达,而在肿瘤组织中几乎检测不到其存在;FAK和PI3K在正常组织中基本无表达,而在肿瘤组织中其表达量明显升高,其表达水平与肿瘤Dukes分期密切相关,二者在肿瘤实质中的表达模式与OPN具有明显的一致性。结论OPN诱导的FAK和PI3K信号途径参与了大肠癌中晚期发生的侵袭与转移过程。

FOXO3相关信号途径影响细胞自噬的研究进展

叉形头转录因子O亚型3(FOXO3)是FOXO家族的重要成员,其广泛参与机体的许多生物学过程,如细胞自噬、氧化应激反应、细胞周期调控及细胞凋亡,但具体的调控机制尚未明确。FOXO3参与自噬调控的活性受磷酸化及乙酰化等修饰的影响,并多与AMP活化的蛋白激酶、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B等信号转导通路相关。此外,FOXO3还通过调节一些自噬相关基因如微管相关蛋白1轻链3、磷脂酰肌醇-3-激酶/囊泡蛋白分选相关蛋白34、γ氨基丁酸受体相关蛋白1等的转录调控自噬。因此,了解转录因子FOXO3在自噬调节中的作用有助于对经典自噬模型进行探究,也可对自噬相关疾病如肿瘤、衰老以及神经退行性变,包括帕金森病、阿尔茨海默病等疾病的治疗提供线索。

辛伐他汀调控DAC-PKC及MAPK信号通路改善2型糖尿病肾病患者肾功能的研究

目的探讨辛伐他汀对2型糖尿病肾病患者磷脂肌醇信号途径-酰甘油（protein kinase C／diacylglycerol，DAG／PKC）信号通路及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路的影响。方法选择2010年6月到2014年12月在黄石市中心医院住院、并且经。肾活检确诊为2型糖尿病肾病的16例患者，住院后给予辛伐他汀治疗3个月，随后抽取患者血液15ml，用全自动生化仪检测肾功能，相关试剂盒检测血脂、白细胞介素1α（interleukin-1α，IL-1α）、IL-6、IL-1β及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factors α，TNF-α）等，比较治疗前后DAG／PKC信号通路以及MAPK信号通路相关酶蛋白表达。结果16例患者血尿素氮、血肌酐以及血尿酸三个指标治疗后较治疗前明显降低（P〈0．05），肌酐清除率治疗后明显高于治疗前（P〈0．05），总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇三个指标治疗后明显低于治疗前（P〈0．05），高密度脂蛋白胆固醇含量治疗后明显高于治疗前；炎性因子IL-1α、IL-1β、IL-6以及TNF-α治疗后明显低于治疗前（P〈0．05）；PKC-η及PKC-ζ蛋白及mRNA表达，治疗后明显低于治疗前（P〈O．05）；MAPK、MKK以及MAKK蛋白和mRNA表达，治疗后明显低于治疗前（P〈0．05）。结论辛伐他汀可明显改善2型糖尿病肾病患者肾功能，其机制可能是通过调控DAC-PKC及MAPK信号通路改善。肾功能。

磷脂酶C基因家族研究进展

磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因是磷脂酶基因家族中的一个成员,它能够水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成两个重要的信使分子肌醇三磷酸和二酰甘油。在动物中磷脂酶C基因可以通过调节胞内钙离子的释放以及激活蛋白激酶C来起作用,而植物中磷脂酶C可以参与植物对生物及非生物胁迫的调节,但其作用的具体方式仍不清楚。综述了磷脂酶C基因的研究进展,主要包括基因的分类、结构以及其在不同逆境信号转导中的作用方式。

胰岛素受体信号传递

胰岛素受体是具有酪氨酸蛋白激酶活性的膜受体。胰岛素与靶细胞相应受体结合后 ,引起受体酪氨酸残基自身磷酸化及 β亚基酪氨酸蛋白激酶活化 ,后者使靶细胞内底物如IRS1或Shc的酪氨酸残基磷酸化 ,酪氨酸蛋白激酶在胰岛素受体信号传递中发挥重要作用。胰岛素信号所激发的信号传递途径主要有二 :一为Ras MAP激酶途径 ,一为PI3 激酶途径 ,胰岛素的作用与此有关。

BRL37344对大鼠心肌成纤维细胞磷脂酰肌醇（-3）激酶-蛋白激酶B信号通路的影响

目的 探讨β3-肾上腺素能受体（β3-adrenergic receptor,β3-AR）激动剂BRL37344是否通过细胞内磷脂酰肌醇（-3）激酶-蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt）信号传导途径促进大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFbs）增殖及胶原纤维增生.方法 哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室无菌条件下剪取新生1～3 d的Wistar大鼠心脏,采用酶消化法、差速贴壁法获取CFbs.随机数字法分为5组：①空白组：不给予任何药物干预.②BRL组：给予BRL37344孵育.③LY组：给予LY294002（PI3K抑制剂）预孵育1 h后联合BRL37344共同孵育.④Akt-Ⅰ组：给予Akt-Ⅰ（Akt抑制剂）预孵育1 h后联合BRL37344共同孵育.⑤L-A组：LY294002和Akt-Ⅰ预孵育1 h后联合BRL37344共同孵育.通过MTT比色法观察细胞的增殖情况,RT-PCR法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况.组间进行单因素方差分析,组间比较采用Tukey检验.以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CFbs中存在β3-AR.②与BRL组比较,LY组和Akt-Ⅰ组增殖减低（P＜0.01）;L-A组较LY组和Akt-Ⅰ组增殖减低更明显（P＜0.01）.③与空白组比较,BRL组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显增加,给药48 h增加最显著.选取48 h点为作用时间点,与BRL组比较,LY组、Akt-Ⅰ组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减低,L-A组较LY组和Akt-Ⅰ组表达减低更显著（P＜0.01）.结论 BRL37344通过PI3K-Akt信号传导途径促进心肌成纤维细胞增殖和Ⅰ,Ⅲ型胶原表达增加.

肝糖异方通过上调肝脏IRS2/PI3K信号通路改善肝硬化大鼠的胰岛素抵抗

目的：探讨肝糖异方对肝硬化大鼠胰岛素抵抗的影响以及对肝脏中胰岛素受体底物2/磷脂酰肌醇-3-激酶（IRS2/PI3K）信号通路的影响。方法：40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、肝糖异方组和二甲双胍组,每组各10只。制备四氯化碳和高脂高糖饮食复合肝硬化大鼠模型,肝糖异方组大鼠予肝糖异方灌胃（1 m L/100 g）,二甲双胍组大鼠予二甲双胍（200 mg·kg（-1）·d（-1））灌胃。对肝组织进行苏木素-伊红染色,口服葡萄糖耐量试验,检测空腹血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR,免疫印迹法检测肝组织中IRβ和IRS2的表达,比色法检测PI3K活性。结果：四氯化碳和高脂高糖饮食复合肝硬化模型大鼠中检测到显著的葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗。肝糖异方和二甲双胍显著减轻模型大鼠的肝纤维化程度和脂肪样变,改善葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗。正常组大鼠肝组织中IRβ的蛋白表达量是模型组的3.13倍（P〈0.001）,肝糖异方组和二甲双胍组的肝脏中IRβ的表达量分别是模型组1.71倍和1.92倍（均P〈0.001）,有统计学差异。各组大鼠肝脏中的IRS2含量无显著差异,但正常组的IRS2磷酸化水平显著高于模型组,是模型组的2.02倍（P〈0.001）。肝糖异方组和二甲双胍组的IRS2磷酸化水平与模型组相比显著增高,分别是模型组的2.30倍和2.25倍（均P〈0.001）。与正常组相比较,模型组大鼠肝组织的PI3K活性显著下降（P〈0.01）,而肝糖异方组和二甲双胍组的PI3K活性比模型组显著增加（P〈0.01）。结论：肝糖异方汤能显著减轻肝硬化大鼠的肝脏损害,减轻葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗,上调肝脏中IRβ的表达及其下游的IRS2/PI3K信号通路。

FOXO蛋白相关信号通路在卵巢癌发生发展中的作用研究进展

FOXO属于叉头框转录蛋白O亚家族,被认为是抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的肿瘤抑制因子。FOXO蛋白活性的变化可以影响卵巢癌的发生发展。调控FOXO的主要上游信号途径有磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶、I-κB激酶、c-Jun激活域结合蛋白1、硫氧化还原蛋白1等。上述信号通路通过调控FOXO蛋白活性在卵巢癌的发生发展过程中发挥了不同的作用。

基于DGKα-PA信号轴探讨扶正祛邪方对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响

目的探讨扶正祛邪方调节DGKα-PA信号轴对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法将H292细胞分为对照组和扶正祛邪方低、中、高浓度组,扶正祛邪方低、中、高浓度组分别予3、6、12 mg/mL扶正祛邪方干预48 h,对照组予等体积培养基常规培养。克隆形成实验观察H292细胞增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移和侵袭情况,ELISA检测细胞磷脂酸(PA)含量,Western blot检测细胞二酰甘油激酶α(DGKα)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)表达。结果与对照组比较,扶正祛邪方低、中、高浓度组细胞克隆形成数明显减少(P<0.05,P<0.01),细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.05,P<0.01),细胞PA含量明显减少(P<0.01),DGKα、p-AKT、mTOR蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),且以扶正祛邪方高浓度组抑制作用最明显(P<0.01)。结论扶正祛邪方可能通过DGKα-PA信号轴抑制人肺癌H292细胞增殖、迁移,其机制与抑制下游AKT/mTOR信号通路有关。

地榆皂苷Ⅱ通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的作用研究

目的探讨地榆皂苷Ⅱ通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号调控线粒体凋亡途径诱导神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的机制。方法将神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分成对照组、低剂量实验组(40μmol·L^(-1)地榆皂苷Ⅱ处理)、高剂量实验组(80μmol·L^(-1)地榆皂苷Ⅱ处理)、低剂量实验组+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组(40μmol·L^(-1)地榆皂苷Ⅱ+10 ng·mL^(-1) IGF-1处理)、高剂量实验组+IGF-1组(80μmol·L^(-1)地榆皂苷Ⅱ+10 ng·mL^(-1) IGF-1处理)。用蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号相关蛋白和胞浆、线粒体中细胞色素C(CytC)蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)法检测线粒体膜电位水平。结果对照组、低、高剂量实验组、低剂量实验组+IGF-1组、高剂量实验组+IGF-1组细胞中p-PI3K/PI3K蛋白表达水平分别为0.85±0.09,0.63±0.06,0.36±0.04,0.77±0.06和0.53±0.05,p-AKT/AKT蛋白表达水平分别为0.75±0.07,0.56±0.05,0.32±0.03,0.68±0.06和0.49±0.04,细胞存活率分别为(100.00±11.47)%,(80.65±7.15)%,(62.95±4.81)%,(92.68±6.84)%和(75.94±7.82)%,细胞凋亡率分别为(4.56±0.45)%,(8.94±0.86)%,(13.84±1.12)%,(5.95±0.52)%和(8.62±0.61)%,胞浆中CytC蛋白表达水平分别为0.30±0.04,0.42±0.05,0.59±0.05,0.37±0.04和0.44±0.06,线粒体中CytC蛋白表达水平分别为0.45±0.05,0.33±0.02,0.23±0.03,0.38±0.03和0.30±0.04,线粒体膜电位分别为1.00±0.09,0.75±0.07,0.60±0.06,0.87±0.08和0.72±0.07。对照组的上述指标与低、高剂量实验组比较,低剂量实验组的上述指标与高剂量实验组、低剂量实验组+IGF-1组比较,高剂量实验组的上述指标与高剂量实验组+IGF-1组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论地榆皂苷Ⅱ通过抑制PI3K/AKT信号激活线粒体凋亡途径促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡。

PI3K/Akt信号通路调节红系细胞生成的研究进展

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）家族是一类特异性催化磷酯酰肌醇脂物质的激酶,具有丝氨酸/苏氨酸激酶的活性,也具有磷脂酞肌醇激酶的活性,广泛存在于细胞中,通过激素受体、跨膜酪氨酸激酶受体和各种细胞因子应答各种细胞内、外信息,并调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等。

PI3K/Akt信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡中的意义

目的研究磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt(PI3K/Akt)信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡中的意义。方法将培养的SD大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2h复氧2h)、二氮嗪+缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100μmol/L预处理2h+缺氧2h复氧2h)、PI3K特异性阻滞剂LY294002+二氮嗪+缺氧-复氧组(LY294002组,LY294002 100μmol/L预处理2h+二氮嗪100μmol/L预处理2h+缺氧2h复氧2h)。Hoechst染色观察凋亡细胞结构,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测Akt的mRNA和蛋白表达水平。结果与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,AktmRNA和蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);与DZ组比较,LY294002组细胞凋亡率升高,AktmRNA和蛋白表达减少(P<0.01)。结论 H-R损伤引起MMECs凋亡。线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放后通过PI3K/Akt信号途径能部分抑制该作用。

PI3K／Akt信号通路对二氧化硅诱导人胚支气管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／丝氨酸府氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路在二氧化硅（SiO2）粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞（HBE）表达转化生长因子（TGF）-β和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）中的作用。方法将体外培养的HBE细胞分成5组：（1）空白对照组；（2）SiO2处理组；（3）Akt磷酸化抑制剂组；（4）同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组；（5）Akt磷酸化抑制剂处理细胞24h再用SiO2处理组；SiO2暴露浓度为100μg／ml，磷酸化抑制剂Ly294002浓度为10μmol／L；用蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、TGF-β、α-SMA表达水平。用免疫荧光技术检测上述处理过程中α-SMA蛋白在细胞中的定位和表达情况。结果SiO2可以明显促使Akt磷酸化，48hp-Akt表达增加了近1倍，72h表达最高；TGF-β在12h明显增高，48h达高峰；α-SMA表达在24h开始增高，72h表达上调了1倍。Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制Akt的磷酸化，明显降低α-SMA的表达，尤其是先加抑制剂与细胞作用24h后再加SiO2，p-Akt和α-SMA表达均明显下调，分别下调了1．5倍和7．6倍，对TGF-β表达则无明显影响。免疫荧光结果显示，SiO2可明显诱导HBE细胞内α-SMA的表达，而Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以使HBE细胞内α-SMA蛋白的荧光强度明显减弱。结论SiO2诱导HBE细胞表达α-SMA可能是通过P13K／Akt信号通路实现的，Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制SiO2诱导的α-SMA表达。

过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制

目的:探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将携带INPP4B的重组质粒载体p EAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系(Flag-INPP4B组),同时设立未处理组为对照(Mock组)。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2(Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2)以及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)下游信号分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和血清糖皮质激素调节激酶-3(serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3)蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内PI(3,4)P2和PI(3)P的水平。结果:INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升(mRNA:t=9.724,P=0.000;蛋白:t=19.520,P=0.000),提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强(F=31.870,P=0.000)。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率(t=6.999,P=0.002);使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降(t=24.710,P=0.000)、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加(t=6.398,P=0.003)。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平(t=10.470,P=0.000),而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响(t=0.285,P=0.790)。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI(3,4)P2的水平(t=4.515,P=0.011),同时明显升高PI(3)P的水平(t=5.681,P=0.005)。结论:本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。