大鼠心肌肥厚中磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶和磷酸化蛋白激酶B蛋白表达与心肌纤维化的关系

目的:研究异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚中磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达与心肌纤维化的关系,为探讨大鼠心肌肥厚中心肌纤维化的信号转导机制和改善心功能提供形态学资料.方法:健康成年SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素,造成心肌肥厚模型;取心肌组织,常规石蜡切片,Masson染色,观察心肌组织的成纤维细胞变化;免疫组织化学显色和免疫荧光显色,检测p-PI3K和p-Akt的表达及分布.利用图像分析软件对p-PI3K和p-Akt的表达结果进行定量分析.结果:大鼠实验组的心肌肥厚指标明显高于对照组;Masson染色结果显示实验组心肌细胞较对照组心肌细胞直径明显变大,细胞间距变大,细胞间纤维细胞增多,呈现区域性纤维化;免疫组织化学检测显示,实验组心肌组织p-PI3K和p-Akt蛋白表达面积和平均光密度较对照组高,两者差异有统计学意义;免疫荧光检测实验组心肌组织p-PI3K和p-Akt蛋白表达较对照组高.结论:p-PI3K和p-Akt蛋白表达增高可能在心肌纤维化的发生和发展过程中起重要作用.

ART调节PI3K/AKT通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的探究青蒿琥酯(artesunate,ART)调节磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法体外培养HepG2细胞,分为对照组以及不同浓度(30μg/mL、60μg/mL和120μg/mL)ART组。比较不同组别HepG2细胞的细胞增殖率、细胞迁移数量、侵袭数量以及Ki-67蛋白、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和PI3K/AKT通路相关蛋白[磷脂酞肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化的蛋白酶B(p-AKT)]的表达水平。结果不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞增殖率分别为(81.73±8.39)%、(65.26±6.48)%、(44.27±4.66)%,Ki-67蛋白表达分别为0.76±0.11、0.43±0.09、0.29±0.04,分别与对照组的(100.00±10.51)%、0.98±0.16比较均明显降低,且ART浓度越高,细胞增殖率和Ki-67蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞凋亡率分别为(24.84±4.91)%、(36.02±7.35)%、(50.27±10.02)%,Bax蛋白表达分别为0.26±0.05、0.39±0.06、0.58±0.08,Bcl-2蛋白表达分别为0.62±0.07、0.48±0.06、0.33±0.04,Caspase-3蛋白表达分别为10.26±0.68、12.47±0.77、14.96±0.81,分别与对照组的(5.75±1.63)%、0.17±0.03、0.83±0.09、8.73±0.46比较,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2表达明显降低,且ART浓度越高,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达越高,Bcl-2表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞迁移数量分别为(189.11±16.73)个、(162.29±15.03)个、(134.26±13.26)个,细胞侵袭数量分别为(144.13±13.46)个、(121.61±10.23)个、(90.26±8.71)个,MMP2蛋白表达分别为0.46±0.08、0.38±0.06、0.29±0.05,MMP9蛋白表达分别为0.41±0.09、0.33±0.06、0.24±0.03,分别与对照组的(234.28±20.64)个、(187.55±16.31)个、0.83±0.19、0.74±0.16比较均明显降低,且ART浓度越高,细胞迁移数量、侵袭数量和MMP2、MMP9蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的PI3K蛋白表达分别为0.51±0.13、0.36±0.09、0.19±0.05,p-P13K蛋白表达分别为0.54±0.12、0.41±0.08、0.22±0.03,p-AKT蛋白表达分别为0.56±0.11、0.38±0.09、0.21±0.04,分别与对照组的0.85±0.17、0.79±0.16、0.75±0.19比较均明显降低,且ART浓度越高,PI3K、p-P13K和p-AKT蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ART在肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭过程中能够发挥一定的抑制作用,同时可诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的活性有关。

肾透明细胞癌组织中PI3K、PTEN、AKT蛋白的表达及其临床意义

目的检测PI3K、PTEN和Akt蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达,分析三者之间的相关性及其表达与肾透明细胞癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测60例肾透明细胞癌组织和癌旁组织中PI3K、PTEN和Akt的蛋白表达情况,分析三种蛋白的表达与肾细胞癌临床病理特征之间的相关性。结果①肾透明细胞癌组织中PI3K和Akt蛋白的阳性表达率分别为81.67%(49/60)和78.33%(47/60),明显高于癌旁组织中的10%(6/60)和15%(9/60)(P<0.05);PTEN蛋白在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率为38.33%(23/60),明显低于癌旁组织中的88.33%(53/60)(P<0.05)。②在60例肾透明细胞癌组织中不同年龄、不同大小肿瘤的PI3K、AKT、PTEN蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。而在病理分级、临床分期方面,三种蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);③PTEN与PI3K、Akt蛋白表达之间均呈显著负相关(r=-0.338和r=-0.325),PI3K与Akt蛋白表达呈显著正相关(r=0.391)。结论 PI3K,Akt蛋白在肾透明细胞癌组织中高表达,而PTEN则存在高比例丢失现象。

吡格列酮对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的影响

目的研究吡格列酮通过磷脂酞肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的影响。方法将30只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组和实验组,每组10只。空白组大鼠给予双蒸水并喂以普通饲料,模型组和实验组用高脂饮食喂养,同时给予来曲唑构建多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(Polycystic ovary syndrome insulin resistance,PCOS-IR)大鼠模型。建模成功后,实验组大鼠给予吡格列酮20 mg·kg^(-1),灌胃;模型组和空白组大鼠分别给予生理盐水20 mL·kg^(-1)·d^(-1),灌胃。用放射免疫法(RIA)测定大鼠血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的水平;用自动生化分析仪测定大鼠空腹血糖(FBG)水平;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清空腹胰岛素(FINS)水平;用抗胰岛素性稳态模式评估法评估大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);用蛋白质印迹(Western blot)法检测PI3K磷酸化蛋白(p-PI3K)及AKT磷酸化蛋白(p-AKT)的表达。结果空白组、模型组和实验组大鼠血清T水平分别为(0.28±0.17),(3.82±0.79),(1.74±0.99)ng·mL^(-1);FSH水平分别为(4.08±1.36),(5.98±1.42),(4.51±0.94)mU·mL^(-1);LH水平分别为(3.18±0.84),(10.21±3.94),(6.77±0.40)mU·mL^(-1);FBG水平分别为(4.39±1.50),(7.21±1.54)和(5.97±0.70)mmol·L^(-1);血清FINS分别为(21.85±5.38),(56.42±7.21),(42.43±7.01)mU·L^(-1);HOMA-IR分别为3.84±2.48,15.02±6.42,8.56±1.78;以上指标,空白组与模型组比较,模型组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吡格列酮可有效降低PCOS-IR大鼠血清T、FSH、LH、FBG及FINS水平,从而改善多囊卵巢综合征大鼠的胰岛素抵抗。