大鼠肝癌细胞与磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达细胞蛋白含量及增殖情况的比较

目的 比较大鼠肝癌细胞与磷脂酰乙醇胺N 甲基转移酶 2 (PEMT 2 )过表达细胞蛋白含量及增殖情况。方法 采用载体构建、质粒转染和鉴定方法 ,得到PEMT 2过表达细胞 ,用细胞培养、计数及考马斯亮蓝法分析大鼠肝癌细胞与PEMT 2过表达细胞蛋白含量及增殖情况。结果 PEMT 2过表达细胞的生长速度明显低于大鼠肝癌细胞 ,而胞浆蛋白及总蛋白含量却明显高于大鼠肝癌细胞 (P <0 .0 1)。结论 PEMT

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达对大鼠肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C表达及转位的影响

目的探讨转染磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2(PEMT2)基因抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的机制。方法采用免疫细胞化学和蛋白质印迹法观察pemt2过表达对肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C(PKC)表达及在细胞内转位的影响,同时采用高效薄板层析技术对细胞内二脂酰甘油(DAG)的水平进行检测。结果转染PEMT2使细胞CPKC α表达降低,CPKC β2表达增加,并由胞浆向质膜转位。同时细胞内DAG水平下降。转染PEMT2对其它PKC亚型的表达及细胞内转位无显著影响。结论转染PEMT2 对不同亚型PKC表达及细胞内转位的影响可能与其抑制细胞增殖,诱导凋亡的机制有关。

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达抑制磷脂酶Cγ1磷酸化及转位

目的探讨转染磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2(PEMT2)基因抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的机制。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot方法,观察转染PEMT2基因对大鼠肝癌CBRH 7919细胞磷脂酶C γ 1(PLC γ 1)磷酸化及在细胞内转位的影响;同时观察转染PEMT2基因对肝细胞生长因子受体(c- Met)自身磷酸化活化的影响。结果转染PEMT2后,质膜结合的PLC γ下降,为对照组的45％。膜结合的磷酸化PLC γ 1约为对照组细胞的27％,同时c-Met磷酸化程度显著下降,约为对照组细胞的32％。结论转染PEMT2基因可抑制细胞PLC γ 1磷酸化及由胞浆向质膜转位,抑制c-Met自身磷酸化活化,从而下调CBRH-7919细胞c-Met／PLC γ 1信号转导途经。

肝细胞与肝癌细胞中磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2表达及活性的比较

目的 比较研究原代培养的大鼠肝细胞与大鼠肝癌细胞内磷脂酰乙醇胺Ｎ－甲基转移酶２（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅＮ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒｓａｅ２．ＰＥＭＴ２）表达水平和活性，了解ＰＥＭＴ２与细胞生长、增殖的关系。方法 利用免疫细胞化学及蛋白质免疫印迹方法观察ＰＥＭＴ２蛋白的表达，以「＾３Ｈ－Ｃ 同位素掺入法测定了ＰＥＭＴ２的活性。

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶基因G175A多态性与非酒精性脂肪肝的关系

目的研究磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)基因外显子8的G175A多态性与非酒精性脂肪肝(NAFLD)的关系。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态法检测并比较51例NAFLD患者和50名健康对照者PEMT基因外显子8的G175A基因型、等位基因频率,分析不同基因型对各临床指标的影响。结果NAFLD组和正常对照组PEMT基因175位点的基因多态性分布差异有显著性(GG、GA、AA在两组中的比例分别是58.8%、78.0%和39.2%、22.0%和2.0%、0.0%,χ2=4.289,P=0.038),NAFLD组A等位基因频率高于对照组(21.6%比11.0%,χ2=4.127,P=0.042),NAFLD患者中G175A突变型的高密度脂蛋白水平低于野生型患者(2.88±1.02 vs 2.04±0.96,P<0.05),而低密度脂蛋白水平明显高于野生型(3.22±0.88 vs 3.87±0.35,P<0.01),Logistic回归分析显示基因位点pemtG175A突变型、低密度脂蛋白是脂肪肝形成的主要危险因素(P<0.05)。结论PEMT基因外显子8的G175A多态性与NAFLD发病易感性相关。

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶在肝脏疾病中的作用研究进展

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)能够催化磷脂酰乙醇胺(PE)转化为磷脂酰胆碱(PC),并参与肝细胞内多种代谢反应,与肝脂质代谢、内质网应激反应及细胞自噬等过程均密切相关。越来越多的研究表明PEMT酶活性的异常能促进脂肪肝炎、肝衰竭、肝癌等多种疾病的发展。文章对PEMT在肝脏疾病中的作用作一综述。

磷脂酰胆碱的合成和转运对极低密度脂蛋白分泌的调节作用

肝为脂蛋白的合成和分泌提供磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC),但同时又接受来自血浆脂蛋白中的PC。肝极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)的分泌需要PC的生物合成,最近的研究显示5'-胞苷二磷酸-胆碱途径(cytidine 5'-diphosphocholine,COD-胆碱)和磷脂酰乙醇胺甲基化途径参与了PC的生物合成。文中就PC的合成和转运对VLDL分泌功能的影响进行综述。

pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术研究c Met(HGF的受体 )及抗凋亡蛋白Bcl 2在此过程中的表达和是否诱发凋亡 .免疫组织化学及Western印迹分析显示在转染高表达细胞中 ,c Met及Bcl 2的表达下调 .流式细胞仪分析表明 ,在转染pemt2 cDNA的高表达细胞中 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 ,并在G0 期出现一个凋亡峰 .琼脂糖凝胶电泳谱显示梯状条带 .结果表明 :pemt2的转染可使大鼠肝癌细胞的c Met及Bcl 2的表达下调 ,并发生凋亡 .

PEMT2过表达抑制大鼠肝癌细胞PI3K,Akt的表达

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (PEMT2 )过表达抑制大鼠肝癌细胞增殖的机制 ,构建了PEMT2高表达细胞克隆 ,并采用半定量RT PCR、免疫细胞化学及流式细胞仪技术 ,研究了PEMT2过表达对PI3K/Akt信号转导途径的影响 .实验结果显示 ,PEMT2过表达可抑制细胞PI3K和Akt的表达 ,并诱导细胞凋亡 .这一结果提示 ,PI3K/Akt信号转导途径下调可能是PEMT2抑制肝癌细胞增殖的部分机制 .

PEMT基因G175A和rs12325817位点多态性与非酒精性脂肪肝的关系

目的:研究磷脂酰乙醇胺N甲基转移酶基因(PEMT)G175A和rs12325817位点多态性与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系.方法:运用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性检测156例NAFLD患者和188名健康对照PEMT基因G175A和rs464396基因型,等位基因频率分布,分析NAFLD患者与对照组临床各项指标的变化.结果:G175A和rs12325817位点基因型及等位基因频率分布在NAFLD组及对照组之间均存在显著性差异(G175A:P=0.03;rs12325817:P=0.00075),其中,G175A位点A等位基因和rs12325817位点C等位基因频率分布在NAFLD组显著高于对照组(G175A:P=0.002;rs12325817:P=0.00025),提示A和C等位基因为NAFLD发病的危险因子.结论:PEMT基因G175A和rs12325817位点多态性均与NAFLD的易感性相关,且rs12325817与NAFLD的相关性尤以女性更为显著.

石榴花水提物调节AHR/BNIP3改善糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号

目的:探讨石榴花水提物(pomegranate flower water extract,PFW)对2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号传导的影响及机制。方法:将C57BL/6J随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(Met)、石榴花水提物低剂量组(PFWL)和石榴花水提物高剂量组(PFWH)。连续给药11周后,称小鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)、胰岛素(INS)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;Western blot法检测肝组织中胰岛素受体底物1(IRS1)、p-IRS1(Ser307)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT(Ser473)、糖原合成酶激酶-3β(Gsk3β)、p-Gsk3β(S9)、芳香烃受体(AhR)、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)、Bcl-2/腺病毒E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)蛋白表达。结果:与模型组比较,PFWH组FBG、INS、HOMA-IR、TG和TC含量极显著降低(P<0.01);PFWH组小鼠肝细胞内脂肪滴明显减少;PFWH组极显著升高肝脏中IRS1、p-AKT(Ser473)/AKT、p-Gsk3β(S9)/Gsk3β、BNIP3蛋白表达(P<0.01),极显著降低p-IRS1(Ser307)/IRS1、AHR、PEMT蛋白表达(P<0.01)。结论:PFW可能通过调节AHR/BNIP3抑制肝脏脂质沉积,改善p-IRS1(Ser307)/p-AKT(Ser473)/p-GSK3β(S9)胰岛素信号通路转导。

PEMT2过表达增强大鼠肝癌细胞cAMP的表达

目的:在大鼠肝癌细胞株CBRH-7919中研究磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2(PEMT2)过表达对cAMP表达量的影响。方法:利用基因转染技术建立PEMT2过表达的大鼠肝癌细胞株,用免疫细胞化学法观察cAMP的表达情况,用[3H]-cAMP掺入法测定cAMP的含量,用流式细胞术分析细胞周期的变化,并与原代培养大鼠肝细胞比较。结果:cAMP在原代培养的肝细胞中表达较高,在肝癌细胞中含量均较低,PEMT2高表达可明显提高肝癌细胞内cAMP的含量。结论:PEMT2表达抑制肝癌细胞的生长可能与cAMP介导的信号转导通路加强有关。

甲基供体代谢酶基因多态性与糖尿病并发症的关联性研究

目的探讨甲基供体代谢酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甜菜碱-同型半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)及磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶(PEMT)基因多态性与糖尿病肾病和糖尿病视网膜病变的关联。方法选取2010年1月至10月在中山大学附属第三医院内分泌科接受治疗的2型糖尿病患者184例,按并发症情况分为单纯糖尿病组、糖尿病合并视网膜病变组、糖尿病合并肾病组。通过调查问卷获取研究对象的一般特征资料,检测血清血糖、血脂等生化指标。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术分析基因多态性;高效液相色谱质谱联用法测定血清甲基供体甜菜碱和胆碱浓度;高效液相色谱法测定血清同型半胱氨酸水平。定量资料的比较采用t检验或单因素方差分析,分类变量比较采用2检验。糖尿病并发症危险因素分析采用非条件logistic回归分析。结果单纯糖尿病患者64例(男性27例,女性37例,平均年龄58.3岁),糖尿病合并视网膜病变患者61例(男性24例,女性37例,平均年龄59.3岁),糖尿病合并肾病患者59例(男性33例,女性26例,平均年龄60.4岁)。3组患者在性别、年龄方面差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病视网膜病变组PEMT G-774C的C等位基因频率(32.0%)低于单纯糖尿病组(50.0%)(P<0.01)。PEMT G-774C基因GG型血清胆碱平均水平(中位数,24.6μmol/L)低于GC+CC型(33.1μmol/L)(P<0.05);GG型血清同型半胱氨酸均值(17.0μmol/L)高于GC+CC型(13.8μmol/L)(P<0.01)。糖尿病视网膜病变组和糖尿病肾病组血清胆碱、甜菜碱平均水平(中位数)分别为8.23、25.5和10.5、24.8μmol/L,均低于单纯糖尿病组(25.0、30.8μmol/L)(P<0.05),血清同型半胱氨酸均值(18.4、19.0μmol/L)高于单纯糖尿病组(12.6μmol/L)(P<0.05);多因素logistic回归分析显示甜菜碱为视网膜病变及糖尿病肾病的保护因素(β值分别为-1.626和-1.743),同型半胱氨酸为危险因素(β值分别为5.321和2.007)。结论 PEMT G-774C GG基因型可引起甲基供体胆碱水平降低,同时引起甲基代谢副产物同型半胱氨酸水平升高。甲基供体甜菜碱为糖尿病视网膜病变和肾病的保护因素,同型半胱氨酸为危险因素。

蒺藜苜蓿MtPEAMT基因克隆及其序列比对分析

从蒺藜苜蓿中克隆得到磷酸乙醇胺甲基转移酶(PEAMT)的编码序列和启动子序列,通过序列对比,对蒺藜苜蓿、拟南芥、番茄等14种植物PEAMT的核苷酸序列及氨基酸序列进行分析。结果显示,蒺藜苜蓿与其他13种PEAMT的基因结构十分相似,除大豆PEAMT外,均含有12个外显子和11个内含子。14种PEAMT蛋白质长度为475~501个氨基酸,分子量为53.86~57.09 ku,等电点均小于7,为亲水性蛋白。14种PEAMT均无跨膜结构,无信号肽,均定位于细胞质。蒺藜苜蓿PAEMT在其N端和C端各有一个保守的甲基转移酶结构域,并包含4个SAM依赖性基序(I、p-I、II、III)。14种植物PAEMT严格按照生物种属进行聚类,其中蒺藜苜蓿PEAMT和木豆PEAMT的亲缘关系最近。蒺藜苜蓿PEAMT易被蛋白激酶C、EGFR激酶、蛋白激酶A、cdc2等激酶磷酸化。蒺藜苜蓿与其他13种PEAMT的启动子区域均含有一些逆境响应元件和植物激素响应元件。综上所述,植物PEAMT在进化过程中十分保守,都具有响应植物非生物胁迫的特性。

应用酵母双杂交系统筛选与乙型流感病毒BM2相互作用的蛋白质

目的 筛选与乙型流感病毒BM2蛋白相互作用的蛋白质。方法 应用酵母双杂交系统,以BM2 (2 6 10 9)插入载体pGBKT7作为诱铒,在四缺培养基上筛选人KidneyMATCHMAKERcDNA文库,寻找与BM2蛋白相互作用的宿主蛋白。结果 筛选得到6个阳性AD 文库质粒,并用酵母双杂交实验验证了阳性AD 文库质粒与BM2的相互作用。将阳性AD 文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析,发现它们分别是N 乙酰神经氨酸酶丙酮酸裂解酶,Angiopoietin 3、锌指蛋白2 5 1、核糖体蛋白S2 0、蛋白精氨酸N 甲基转移酶1(PRMT)、转录因子样1(TCFL1)。结论 BM2能与这些转录翻译功能相关的蛋白质相互作用,表明BM2蛋白在病毒生活周期中发挥重要作用。

pemt2-cDNA转染抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞周期相关蛋白的表达

目的探讨磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2(PEMT2)的转染抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法将带有完整pemt2-cDNA质粒转染人大鼠肝癌CBRH-7919细胞,筛选出稳定传代并高表达PEMT2的细胞株,用Western blot, 比较了细胞周期调控因子细胞周期蛋白D1／细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白E／CDK2、phospho-Rb、 caspase3、c-jun以及小窝蛋白caveolin的表达变化。结果在PEMT2高表达细胞中CDK2、CDK4、phospho-Rb和c jun表达下调,caspase3表达上调。结论 PEMT2的高表达降低CDK2和CDK4的表达水平,同时下调原癌基因phospho- Rb和c-jun的表达,抑制肝癌细胞由G1期进入S期,从而抑制肝癌细胞增殖并诱发肝癌细胞的凋亡。

PEMT基因V175M多态性与非酒精性脂肪肝易感性的关系

目的:探讨磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(phosphatidylethanolamine N-methyltransferase,PEMT)基因V175M多态性与非酒精性脂肪肝(NAFLD)易感性的关系。方法:抽取NAFLD患者外周血基因组DNA,PCR扩增获得其V175M基因,测序后分析PEMT基因V175M多态位点的基因分型。收集患者身高、体重、腰围、空腹血糖、低密度脂蛋白、空腹胰岛素等临床资料,计算体重指数和HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),同时选取年龄、性别相匹配的非NAFLD79人为对照。结果:NAFLD组和对照组在年龄、性别方面相匹配,但NAFLD组的肥胖者显著增多。NAFLD组和对照组M等位基因的频率分别为20.1%和12.0%,差异有统计学意义(P<0.05),NAFLD组和对照组VM+MM基因型的频率分别为26.6%和22.8%(P=0.05)。以BMI≥25作为肥胖的标准,将研究对象分为肥胖和非肥胖者,在肥胖的对照和NAFLD组中,V175M等位基因和基因型频率差异均无统计学意义(P>0.05);在非肥胖的NAFLD和对照组中,M等位基因的频率分别为21.9%和9.6%,VM基因型的频率则分别为43.8%及19.3 %,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过引入其他已知的非肥胖型NAFLD易感因素(腰围,LDL和HOMA-IR),再进行Logistic回归分析,V175M基因型未能进入回归方程,P=0.323。结论:广州汉族人中存在PEMT V175M多态性,且以V等位基因为主,PEMT V175M并非NAFLD的独立易感因素。