磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成类U在卵巢癌组织中的表达及临床意义的生物信息学分析

目的通过生物信息学分析糖基磷脂酰肌醇转氨酶(GPI-T)复合物相关基因磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成类U(PIGU)在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)、基因型-组织表达(GTEx)数据库下载279例卵巢癌患者卵巢癌组织及88例卵巢正常组织的全基因组的表达量矩阵,对GPI-T复合物相关基因进行差异分析。利用Kaplan-Meier Plotter(KMPLot)网页工具进行生存分析,利用基因表达综合(GEO)数据库进一步验证PIGU在卵巢癌中的重要意义。利用GeneMANIA网站预测PIGU的蛋白质相互作用网络,使用WebGestalt网页工具对PIGU及其关键互作分子进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果与卵巢正常组织相比,卵巢癌组织中磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成类S(PIGS)表达明显下调,磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成类K(PIGK)、PIGU、磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成类T(PIGT)、糖基磷脂酰肌醇锚定附着蛋白1(GPAA1)的表达均明显上调,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。PIGU的表达与卵巢癌患者的总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)均有关(P﹤0.05),PIGU高表达卵巢癌患者的OS、PFS均低于PIGU低表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。GeneMANIA网站预测PIGU的蛋白质相互作用网络,结果发现了包括PIGS、PIGK、PIGT、GPAA1在内的20个关键互作分子。KEGG分析通路分析揭示了PIGU及其关键互作分子的潜在分子机制,证实PIGU通过参与调控生物合成与代谢通路,影响卵巢癌的发生发展。结论PIGU在卵巢癌组织中高表达,可以作为预测卵巢癌发生、发展及患者预后的标志物之一。

人类磷脂酰肌醇聚糖A类基因突变在遗传毒性研究中应用进展

基因突变是遗传毒性损伤的重要检测终点。国际人用药物注册技术协调会议(ICH)M7指南中将啮齿类动物体内磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验列为药物杂质遗传毒性试验阳性结果的追加试验。啮齿类动物Pig-a基因突变试验作为一项新的检测体内基因突变的方法,相对于转基因动物等其他体内基因突变试验,具有成本低、方法简单和检测快速的优点。基于Pig-a基因的物种保守性,近年来开发了检测人外周血以及体外人细胞的PIG-A基因突变试验的方法,以期用于临床基因突变监测以及非临床遗传毒性评价。本文主要对PIG-A基因突变试验研究常用人外周血成熟红细胞、网织红细胞和白细胞及TK6细胞和MCL-5细胞检测方法等进行简要综述。

糖基磷脂酰肌醇转酰胺酶与肝癌

肝癌是全球癌症负担的主要来源,而肝癌中最主要的组织学类型为肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)。因此,阐明HCC发生发展、复发机制以及寻找新的治疗靶点成为HCC研究的重要方向。近年来越来越多的学者对糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白合成过程进行研究,发现参与GPI锚定蛋白合成的多个亚基的表达异常不仅参与了人类疾病的发展,也参与了人类多种肿瘤的发生发展,糖基磷脂酰肌醇转酰胺酶(Glycosylphosphatidylinositol transamidase,GPI-T)作为蛋白质转移到GPI锚的关键酶,由五个亚基组成,其中PIGU于2004年被首次证明参与了膀胱癌的发生发展,随后它的五个亚基逐渐被证实参与了HCC的发生发展。本文就GPI-T的五个亚基参与HCC发生及发展的机制进行了阐述。

PIGS基因突变所致的发育性癫痫性脑病家系的临床表现及遗传学分析

目的总结和分析磷脂酰肌醇聚糖锚定生抑合成S类(PIGS)基因突变所致的发育性癫痫性脑病(DEE)家系中2名患儿的临床表型及遗传特点。方法收集2021—2022年因“反复抽搐”就诊于广东医科大学附属医院门诊的2例患儿的临床资料及家族史,提取患儿及其家系成员的外周血样,采用全外显子组测序技术筛查患者致病基因,对可疑致病突变进行Sanger测序验证。结果例1,女,姐姐(先证者),8岁;例2,女,妹妹,6岁。均为婴儿期起病,表现为频繁全面性强直阵挛发作,伴严重发育落后,查体均发现特殊面容(拱形眉、杏仁眼、眼距宽、鼻梁低平、长人中、宽舌)及肌张力低下,异常视频脑电图及头颅磁共振结果。基因检测均提示PIGS基因c.1141_1164dup(p.Asp381_Val388dup)纯合突变,Sanger验证父母为杂合突变,结合临床表型和基因检测结果,2例患儿确诊为DEE-95(PIGS基因突变),经联合抗癫痫加用维生素B6治疗后抽搐改善。结论PIGS基因纯合突变是DEE-95致病原因,全外显子组测序有重要诊断价值,抗癫痫联合治疗加用维生素B6可控制抽搐发作。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的功能机制研究进展

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是由核心蛋白和与之相连的硫酸乙酰肝素糖链组成,广泛分布于细胞膜与细胞外基质中。其中多配体蛋白聚糖(syndecan)和糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白聚糖(glypican)存在于细胞膜上,而串珠蛋白聚糖(perlecan)和组合蛋白聚糖(agrin)表达在细胞外基质中。该类蛋白在生理与病理历程,如发育、伤口愈合、肿瘤发生发展、感染、免疫应答等过程中担任重要作用,这些功能是其核心蛋白和糖链共同作用的结果。概述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的功能及其机制研究进展,同时强调其在作为药物靶标和临床诊断研究中的应用。

血清GPC3、GS和HSP70检测在乙肝相关肝癌诊断中的应用

目的探讨磷脂酰肌醇聚糖3(glypican3,GPC3)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)在血清中的浓度及对乙肝相关肝癌(HCC)的诊断价值。方法收集100例乙肝相关HCC患者(HCC组)、20例乙肝肝硬化者(肝硬化组)、20例慢性乙肝患者(慢性乙肝组)及20例正常健康人(正常对照组)血清,用ELISA方法检测GPC3、GS、HSP70的水平。结果 HCC组血清GPC3水平与其余3组差异有统计学意义,GPC3诊断乙肝相关肝癌ROC曲线示AUC为0.697,敏感度84.21%,特异度55.1%。HCC组与肝硬化组及慢乙肝组间血清GS水平差异无统计学意义,GS诊断乙肝相关肝癌ROC曲线示AUC为0.603,敏感度46.67%,而特异度79.66%;HCC组与其余3组血清HSP70水平差异有统计学意义,HSP70诊断乙肝相关肝癌ROC曲线示AUC为0.725,敏感度58.06%,特异度89.55%;针对AFP<200 ng/m L的HCC患者,仅HSP70的血清检测AUC达0.725,其他指标对于小肝癌的诊断AUC均未达0.7。结论 ELISA法检测血清GPC3、GS、HSP70水平对诊断乙肝相关肝癌无临床实际价值。

血清GPC3、GS和Hsp70检测在乙肝相关肝癌诊断中的应用价值

为了探讨血清磷脂酰肌醇聚糖3(GPC3)、热休克蛋白70(Hsp70)、谷氨酰胺合成酶(GS)检测在乙型肝炎(以下简称“乙肝”)相关肝癌诊断中的应用价值,本研究于2015年1月至2016年1月对在本院接受诊断与治疗的乙肝相关肝癌患者、乙肝肝硬化患者、慢性乙肝患者及健康者采用ELISA法进行血清GPC3、GS和Hsp70检测,比较不同组别之间血清GPC3、GS、Hsp70水平差异,现将研究结果报道如下。

索拉非尼联合经导管肝动脉化疗栓塞治疗中晚期肝癌的疗效分析

目的观察索拉非尼联合经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗中晚期肝癌患者的临床疗效。方法将150例中晚期肝癌患者分为单纯治疗组和联合介入组。比较2组治疗后的疗效,不良反应以及1、3、5年存活率。比较2组治疗前后血清磷脂酰肌醇聚糖3(GPC3)、转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)表达情况。结果联合介入组疗效优于单纯治疗组,3、5年存活率高于单纯治疗组,血清GPC3、LTBP2表达水平以及不良反应发生率低于单纯治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论索拉非尼联合TACE可以有效延长中晚期肝癌患者的存活时间,且不良反应发生率较低。

Glypican-3在胚胎及肿瘤中的生物学研究进展

磷脂酰肌醇聚糖-3蛋白（Glypican-3,GPC3,也称为DGSX,GTR2-2,MXR7,OCI-5,SDYS,SGB,SGBS和SGBS1）是硫酸乙酰肝素糖蛋白（heparan sulfate proteoglycan,HSPG）家族的成员之一,可通过共受体结合相关配基,如生长因子、细胞黏附分子、酶和酶抑制剂、基质成分等,参与调节细胞增殖、分化、黏附和迁移等过程,同时参与调节大部分中胚层组织和器官形成过程。近年来大量研究表明,

PIG-A基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的建立

目的构建含磷脂酰肌醇聚糖A类基因（PIG-A）的逆转录病毒载体并对其进行包装，获得稳定的产毒细胞系。方法采用PCR方法从质粒pEBPIG-A中扩增PIG-A基因片断，BarnHI及XhoI双酶切后连接至逆转录病毒载体pLEGFP-C1，用限制性内切酶和DNA序列测定的方法对重组质粒进行鉴定。脂质体法转染PA317包装细胞，荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达，G418筛选抗性克隆，收集病毒上清后感染NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果酶切证实PIG-A基因克隆至逆转录病毒载体，测序结果和原始序列相同。重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞，24～48h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达。经CAl8筛选得到6个稳定抗性克隆，病毒滴度最高达1．6×10^5CFU／ml。结论构建了含PIG-A基因的逆转录病毒载体，获得了稳定的产毒细胞系。

前列腺相关疾病谱系中Glypican-1的表达及临床意义

目的检测前列腺增生(prostatic hyperplasia,BPH)、前列腺上皮内瘤(prostatic intraepithelial neoplasia,PIN)和前列腺癌(prostate cancer,PCa)中磷脂酰肌醇聚糖-1(Glypican-1)的表达水平。方法采用免疫组化、ELISA法检测Glypican-1在40例BPH、60例PIN及60例PCa中的表达,并复习相关文献。结果Glypican-1在BPH和低级别前列腺上皮内瘤(low-grade prostatic intraepithelial neoplasia,LGPIN)中呈低表达,在高级别前列腺上皮内瘤(high-grade prostatic intraepithelial neoplasia,HGPIN)及PCa中呈高表达,平均秩次为46.10(BPH)、55.23(LGPIN)、89.75(HGPIN)、117.20(PCa),差异有统计学意义(P<0.001)。PCa组中血清学Glypican-1水平明显高于PIN组和BPH组(P<0.001),血清学Glypican-1诊断PCa的特异度(55.0%)高于PSA的特异度(34%)。结论Glypican-1在BPH、PIN和PCa中的表达呈递进关系,Glypican-1可能成为PCa的肿瘤标志物。

血清Hsp90α、AFP、Gpc3在原发性肝癌早期诊断中的临床应用

目的:探讨热休克蛋白90α(Hsp90α)、甲胎蛋白(AFP)及磷脂酰肌醇聚糖(Gpc3)对原发性肝癌(PHC)早期诊断及术后评估的应用价值。方法:选取2019年1月至2020年12月确诊为PHC的193例患者为PHC组,将180例慢性乙型肝炎(CHB)患者纳入CHB组,另选取同期进行体检健康者198例为对照组,分析3组人群Hsp90α、AFP及Gpc3水平,探讨以上指标在PHC中的诊断价值,并随访记录PHC组患者术后Hsp90α、AFP及Gpc3水平,分析其在术后评估中的应用价值。结果:PHC组患者血清Hsp90α、AFP及Gpc3水平及检测阳性率均明显高于CHB,均高于对照组人群(P<0.05);Hsp90α、AFP及Gpc3在早期肝癌中具有一定诊断价值,且联合诊断较单项指标检测具有更高的诊断效能;治疗后PHC患者Hsp90α、AFP及Gpc3水平均明显低于治疗前(P<0.05);Hsp90α、AFP及Gpc3与PHC呈正相关(P<0.05)。结论:联合检测Hsp90α、AFP及Gpc3可有效提高PHC诊断率,特异性较高,监测以上指标在血清中的变化情况可反应临床疗效,在PHC早期诊断及疗效评估中具有较高的应用价值。

circRNA 103809通过miR-620/GPC5通路抑制肝癌细胞系增殖的分子机制

目的研究肝癌细胞系Hep-3B中环状(circ)RNA 103809通过miR-620/磷脂酰肌醇聚糖(GPC)5通路调控肝癌细胞系增殖的分子机制。方法通过实时荧光定量PCR检测肝癌细胞系Hep-3B中的circRNA-103809、miR-620、GPC5的RNA水平;通过Western印迹检测GPC5蛋白水平;CCK8试剂盒、细胞集落形成试验检测细胞增殖情况。结果Hep-3B中,circRNA-103809表达水平明显下调(P<0.01),miR-620明显上调(P<0.01);GPC5的RNA和蛋白表达水平均明显表达下调(P<0.01)。在细胞水平过表达circRNA-103809,检测miR-620表达水平明显下调(P<0.01),GPC5表达明显上调,细胞增殖活性降低(P<0.01);下调miR-620使GPC5表达明显上调,细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。结论过表达circRNA-103809可以通过下调miR-620然后上调GPC5的途径抑制Hep-3B细胞增殖活性,可能成为临床治疗潜在靶点。

GSTM1、PIGF、GDF-15联合对妊娠期高血压的诊断价值

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶Mu1(GSTM1)、磷脂酰肌醇聚糖锚生物合成F类(PIGF)、生长分化因子15(GDF-15)联合对妊娠期高血压的诊断价值。方法 选取妊娠期高血压患者30例为妊娠期高血压组,子痫前期患者30例为子痫前期组,同时选取正常晚期妊娠妇女30例为正常晚期妊娠组,检测3组研究对象血清中GSTM1、PIGF、GDF-15的表达量。采用受试者工作特征曲线分析GSTM1、PIGF、GDF-15检测在妊娠期高血压疾病中的诊断意义。结果 妊娠期高血压组患者血清中GSTM1的表达量明显低于正常晚期妊娠组(P<0.05);而子痫前期组患者血清中GSMT1的表达量明显低于正常晚期妊娠组和妊娠期高血压组(P<0.05);妊娠期高血压组患者血清中PIGF和GDF-15的表达量均明显高于子痫前期组(P<0.05),但低于正常晚期妊娠组(P<0.05)。妊娠期高血压组和子痫前期组GSTM1、PIGF、GDF-15单独检测的灵敏度分别为87.00%、90.00%、90.00%,特异度分别为70.00%、80.00%、77.00%。妊娠期高血压组和正常晚期妊娠组GSTM1、PIGF、GDF-15单独检测的灵敏度分别为87.00%、80.00%、83.00%,特异度分别为87.00%、87.00%、83.00%。GSTM1、PIGF、GDF-15联合检测对妊娠期高血压疾病诊断的灵敏度为86.67%,特异度为81.67%,准确度为83.33%。结论 血清中GSTM1、PIGF、GDF-15联合检测可作为诊断妊娠期高血压的潜在标志物。

GPC3-CAR-T疗法干预甲胎蛋白阳性胃癌的体外研究

为了探究治疗甲胎蛋白阳性胃癌(alpha-fetoprotein producing gastric carcinoma,AFPGC)的新方法,以临床病理筛选的AFPGC患者为研究对象,选取AFP、磷脂酰肌醇聚糖3(glypican 3,GPC3)高表达胃癌细胞FU97为阳性对照,AFP、GPC3不表达胃癌细胞MGC-803为阴性对照,构建靶向GPC3嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T)对上述肿瘤细胞进行体外杀伤试验并检测CAR-T分泌细胞因子的能力。结果显示,在10∶1效靶比状态下,GPC3-CAR-T对GPC3阳性的AFPGC和FU97细胞具有显著的杀伤效应,而对GPC3阴性的MGC-803细胞无显著杀伤效应。同时,在靶细胞为AFPGC或FU97时,GPC3-CAR-T分泌IL-2和IFN-γ水平较靶细胞为MGC-803时显著升高(P<0.05)。该研究提示,AFPGC对GPC3-CAR-T体外干预治疗敏感,GPC3-CAR-T疗法具有进一步深入研究的价值。

噬菌体展示全人源抗GPC3的单链抗体的筛选及鉴定

使用全人源噬菌体单链抗体文库进行筛选,获得特异性靶向磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)的单链抗体,并对单链抗体的生物学活性和抗原表位进行鉴定。经过4轮"结合-淘洗-洗脱-扩增"后,利用噬菌体ELISA和IMGT数据库分析抗体序列的靶向性和完整性。单链抗体的基因序列与表达载体p ET-22b进行双酶切并连接,重组载体转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3),抗体表达后经Ni^(2+)柱亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对单链抗体分子质量进行鉴定。抗体对抗原的亲和力常数通过ELISA和SPR实验获得,流式细胞术分析其与细胞膜受体的结合能力。经筛选获得4个单链抗体(1F7、1D7、1D4和1B10)具有良好的靶向性和亲和力,其中1F7单链抗体的亲和力和结合能力最高。本课题抗GPC3单链抗体为双特性抗体和免疫毒素等新一类免疫治疗药物的开发奠定基础。

肝再生终止相关分子机制的研究进展

肝脏是人体内唯一可以在部分切除后完全再生，并恢复至与术前相同体积、质量的脏器。此前，相关的基础研究主要集中在肝再生的起始或增殖阶段。近年来，随着肝再生终止机制的重要性被广泛认可，相关研究也逐渐开展。探究肝再生终止机制一方面能够帮助我们进一步了解肝脏适应性生长的原理，另一方面可以更深入地探索肝再生终止过程破坏与肿瘤发生发展的潜在联系。本文就近年来有关肝切除后肝再生终止阶段相关机制的研究进展做一综述。

Pig-a基因突变在遗传毒性评价中的应用进展

近年来,遗传毒理学界对磷脂酰肌醇聚糖A(Pig-a)基因突变的研究提示其可成为量化体内和体外突变事件的潜在工具。本文综述近年来发表的Pig-a相关的研究文献,从Pig-a基因突变检测方法进展、药物遗传毒性评价中的应用进行归纳,详细地总结了Pig-a基因突变在大鼠中的应用,并对Pig-a基因突变试验跨物种研究的探索以及NGS技术对Pig-a基因突变检测作一阐述,为后续研究提供参考。

体内Pig-a基因突变试验方法的开发

体内基因突变是遗传毒理试验中非常重要的检测终点。国际人用药物注册技术协调会议(ICH)新版遗传毒性指导原则的出台,对体内遗传毒性检测方法的发展提出了更高的要求。新的检测体细胞突变的体内实验方法即磷脂酰肌醇聚糖A(Pig-a)基因突变试验,有望成为一项新药遗传毒性评价的标准试验。本文简要综述Pig-a体内基因突变试验的特点及其在新品种开发遗传毒性检测中的应用。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病机制、诊断及治疗进展

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种罕见的获得性造血干细胞基因突变引起的疾病。已明确磷脂酰肌醇聚糖A（PIGA）基因突变是PNH患者血管内溶血的分子病因，但克隆性增殖的机制仍有待揭示。PNH与再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征关系密切。流式细胞术检测锚连蛋白缺陷是诊断PNH的金标准，但基于细胞表型诊断的PNH在病因上仍是一组异质性疾病。依库珠单抗可有效减少PNH血管内溶血，显著改善患者的生命质量，但仍属对症治疗。对PNH发病机制的进一步研究有助于正确认识患者的内在病因、提高鉴别诊断能力和改善治疗。文章对结合近年来的研究进展进行综述。