磷脂酰肌醇蛋白多糖-3在肝癌组织中的表达及其临床病理学特征

目的:分析人肝细胞癌(HCC)组织中磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)的表达、胞内分布及其临床病理学特征.方法:以自身配对法分别收集36例HCC患者经手术切除后的癌灶、癌旁和远癌组织,以免疫组织化学法检测组织中GPC-3表达及胞内分布与临床病理学特征.结果:HCC的癌灶组织GPC-3表达于胞质和细胞膜;癌旁组织GPC-3阳性表达主要定位于胞质,而远癌组织未见明显表达.癌灶组织GPC-3表达强度明显高于癌旁和远癌组织(χ2=11.445,P<0.01),表达阳性率分别为80.6%、41.7%和0.结论:HCC组织GPC-3过表达与其的发生、发展密切相关.

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3在肝细胞癌中的特异性和敏感性以及表达

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC3)在高、中/低分化的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组中的表达强度、特异性和敏感性。方法挑选首都医科大学附属北京佑安医院2009年12月至2010年9月收治的肝细胞癌病例70例,经过免疫组化染色,观察GPC3在肝细胞癌内以及其周围非肝细胞癌的着色情况和GPC3在所有肝细胞癌病例中的检出率。将70个病例根据癌分化程度分为高、中/低两组。观察GPC3在两组中的着色强度与Ki67在两组中的表达强度是否有相关性。结果①所有肝细胞癌病例的GPC3染色只在肝细胞癌中,肝细胞癌周围非癌组织中均不着色;GPC3在高、中/低两组中总检出率为85%,高分化组中阳性率73.0%,中/低分化组阳性检出率90.2%。②GPC3中强着色度(++、+++)在高分化组中只有2例,占10.5%;在中/低分化组中38例,占74.8%。GPC3在高,中/低分化的肝细胞癌中的表达强度差异有统计学意义(P<0.01)。③Ki67在高分化组中(++、+++)中强度表达是0例,占0%;在中/低分化组中中强度表达是37例,占72.5%,Ki67在高、中/低分化组肝细胞癌中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。GPC3在这两组中的着色强度和Ki67在这2组中的的表达强度具有相关性(P<0.01)。结论 GPC3在肝细胞癌中的表达具有高度特异性和敏感性,对肝细胞癌诊断有重要价值。

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3异常表达与肝细胞癌变相关

肝细胞癌(HCC)预后极差,延长患者生存期的关键是早期(小肝癌)诊断和早期(手术)治疗。HCC通过肝癌标记和影像检查建立诊断。甲胎蛋白(AFP)是主要肝癌标记,但有假阳性和假阴性;AFP异质体(AFP-L3)、AFP基因标志(AFP-mRNA)以及GGT-Ⅱ、PIVKAⅡ、AFU等其它肝癌标记可与AFP互补诊断,尤其对AFP假阴性肝癌和小肝癌的诊断甚有帮助。磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)在细胞的生长发育中起重要的调控作用,与肝癌密切相关。本文就GPC-3分子构成、表达机制、与多种信号传导途径关系及对肝癌早期诊断价值等作一综述。

血清磷脂酰肌醇蛋白多糖-3检测对中国人群肝癌诊断价值的系统评价

目的采用系统评价的方法将血清磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)对中国肝癌患者的诊断准确性进行评估。方法通过互联网对Pubmed、Embase、The Cochrane Library、中国知网期刊数据库(CNKI)、万方数据库进行检索,收集有关GPC-3诊断肝癌的文献,检索时限定义为建库——2015年2月。使用QUADAS量表对纳入文献质量进行评估。通过meta-disc 1.4软件对血清GPC-3诊断肝癌的敏感度(SEN)、特异度(SPE)、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)、诊断比值比(DOR)分别进行合并,并计算SROC曲线下面积(AUC)。发表偏倚的影响用漏斗图和Egger's检验评估。结果 8个研究纳入最终评价,研究对象共计1679例。纳入文献存在显著异质性(P<0.001),采用随机效应模型进行评估。血清GPC-3诊断肝癌的合并SEN为0.52(95%CI:0.49,0.55),SPE为0.84(95%CI:0.80,0.87),PLR为4.41(95%CI:1.85,10.49),NLR为0.57(95%CI:0.44,0.74),DOR为8.95(95%CI:2.81,28.52),AUC为0.6876。采用漏斗图和Egger's检验未发现发表偏倚存在(P=0.526)。结论血清GPC-3在肝癌的诊断中SEN较低,但是SPE较高,临床确诊需联合其他诊断指标,以进一步提高肝癌诊断的准确度。

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3在肝癌中的表达及在治疗中的作用研究进展

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC3)是一个新的相对独立的肝癌标志物,其在肝癌组织和血清中高表达且具有较高的敏感性和特异性。传统治疗肝癌的方法,如手术、放化疗等仍有一定的局限性和不足,急需一种新的治疗方法来联合治疗。基于GPC3的免疫治疗或偶联化疗药物的靶向治疗将为肝癌治疗带来新的希望。

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3在肝细胞肝癌的表达及其与术后复发的相关性

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)mRNA在肝细胞癌(HCC)癌组织及癌旁组织的表达及其与术后复发的相关性。方法用逆转录聚合酶链反应测定60例HCC癌组织及癌旁组织中GPC-3 mRNA的表达。PCR产物经凝胶电泳,比较HCC组织及癌旁组织中GPC-3与-βactin条带的灰度值之比,半定量分析GPC-3 mRNA的表达水平,分析术后3年不易复发HCC患者的癌组织GPC-3 mRNA的表达水平。结果 GPC-3 mRNA在HCC癌组织中高度表达,阳性率为68.3%,癌旁组织中低表达或未见表达,术后3年内未复发的HCC患者癌组织中GPC-3 mRNA呈现低表达水平,GPC-3 mRNA表达与肿瘤大小、肿瘤数目、有无包膜、门静脉癌栓、HBsAg及AFP水平无明显相关。结论 GPC-3 mRNA在HCC癌组织中的表达明显高于癌旁组织,可能是HCC的一种新的潜在的肿瘤特异标志物;癌组织中GPC-3mRNA低表达的HCC患者不易复发,可能是判断HCC进展和评价预后的一个潜在重要指标。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在肝细胞肝癌病理诊断中的价值及应用

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的明确诊断主要依靠组织病理学和临床影像学检查,而鉴别诊断需要免疫组化标记物辅助确诊。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)是一种广泛应用于肝细胞肝癌免疫组化的标记物。随着对GPC-3研究的深入,发现它不仅在血清有表达,同样在肝细胞癌组织中表达。根据GPC-3在肝细胞肝癌及癌旁组织的表达情况,我们更新关于GPC-3在正常和肿瘤组织中的表达的当前知识,评估其在临床实践中作为肿瘤标志物的效用,探讨其作为一种新型癌胚胎蛋白的临床意义,为肝细胞肝癌的诊断提供科学依据,从而为肝细胞肝癌的靶向治疗提供新的方向和依据。

微小核糖核酸-155对肝癌细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响

目的探究微小核糖核酸(miR)-155靶向蛋白酪氨酸磷酸酶非受体21型(PTPN21)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养Huh7人肝癌细胞并通过miR-155沉默慢病毒(sh-miR-155)转染下调miR-155。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Huh7细胞miR-155沉默效果,获得稳转细胞株后将细胞株随机分为:Blank组(正常Huh7细胞)、shNC组(Huh7细胞+miR-155空载体)、sh-miR-155组(Huh7细胞+miR-155沉默)、sh-miR-155+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155沉默+PI3K-AKT激动剂)、shNC+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155空载体+PI3K-AKT激动剂)。双荧光素酶实验检测PTPN21是否为miR-155的下游;溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡水平;Transwell实验分析各组细胞侵袭与迁移能力;蛋白质印迹检测各组PTPN21、通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3表达变化差异。结果sh-miR-155组中miR-155的表达水平低于Blank组及shNC组(P<0.0001),miR-155在Blank组及shNC组表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,sh-miR-155组中Huh7细胞在2、3、4、5 d时A值均低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而Blank组与shNC组差异无统计学意义(P>0.05);sh-miR-155组在2、3、4、5 d时A值低于sh-miR-155+Recilisib组及shNC+Recilisib组(P=0.0052,P<0.0001),而sh-miR-155+Recilisib组在2、3、4、5 d时A值低于shNC+Recilisib组(P<0.0001)。Blank组与shNC组迁移及侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05),激活PI3K-AKT信号通路后,与Blank组相比,shNC+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力显著增加(P<0.0001)。相反,沉默miR-155后Huh7细胞的迁移及侵袭细胞数明显低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而PI3K激动剂逆转了这一现象,与sh-miR-155组相比,sh-miR-155+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力增强(P=0.0002)。慢病毒转染Huh7人肝癌细胞以沉默miR-155,下调miR-155抑制PTPN21调控PI3K-AKT信号通路从而抑制肝癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,促进肝癌细胞凋亡。结论miR-155通过靶向PTPN21调控PI3K-AKT信号通路抑制肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖。miR-155可能是未来肝癌治疗潜在靶点。

基于PI3K/Akt/GSK-3β通路探讨蒲公英多糖对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

本研究通过观察蒲公英多糖(dandelion polysaccharide,DP)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,探讨DP抑制乳腺癌细胞的分子机制。用DP处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞及正常乳腺上皮细胞MCF-10A后,采用CCK-8方法检测不同浓度的DP(0、100、200、400、800μg/mL)对细胞活力的影响;采用平板克隆实验检测DP对乳腺癌细胞克隆形成能力的影响;采用划痕实验和Transwell实验分别检测DP对乳腺癌迁移和侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测DP作用MDA-MB-231细胞48 h后,该细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成激酶-3β(p-GSK-3β)蛋白表达情况,上皮间质转化(EMT)相关标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达情况。结果显示,与空白组相比,DP组(100、200、400、800μg/mL)能够显著抑制MDA-MB-231细胞存活率(P<0.05或P<0.01),而对MCF-10A细胞的存活率无显著影响;与空白组相比,DP组(200、400μg/mL)细胞克隆形成能力显著减弱(P<0.01);与空白组相比,DP组(200、400μg/mL)迁移能力显著降低;与空白组相比,DP组(200、400μg/mL)侵袭能力显著减弱(P<0.01);与空白组相比,DP组(200、400μg/mL)p-PI3K、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.01),而PI3K、Akt及GSK-3β总蛋白无明显变化;与空白组相比,DP组(200、400μg/mL)E-cadherin表达水平上调,N-cadherin和Vimentin表达水平下调,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。综上,DP能够有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活性有关。

金钗石斛多糖对多柔比星肾病大鼠肾纤维化及PI3K/Akt/HIF-1α通路的影响

目的:探讨金钗石斛多糖对多柔比星肾病大鼠肾组织纤维化及磷脂酰肌醇3激酶/丝氪酸-苏氪酸蛋白激酶/缺氧诱导因子-1α(PI3K/Akt/HIF-1α)信号通路的影响,并分析其可能的作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(依那普利,4 g·kg-1·d-1)、金钗石斛多糖低(5 g·kg-1·d-1)、中(10 g·kg-1·d-1)、高(20 g·kg-1·d-1)剂量组,每组各8只。除正常对照组外,其余各组大鼠制备多柔比星肾病大鼠模型。造模成功后灌胃给药,1次/d,连续给药4周,正常对照组和模型组给予等量生理盐水。采用Masson染色观察多柔比星肾病大鼠肾脏纤维化程度;检测各组大鼠肾功能指标;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平;Western blot法检测α-SMA、FN、CTGF、PI3K及磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)、HIF-1α蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平、24 h尿蛋白含量、胶原纤维阳性区占观察视野面积比、肾组织中α-SMA、FN、CTGF及p-PI3K、p-Akt、HIF-1α表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组与金钗石斛多糖不同剂量组大鼠Scr、BUN水平、24 h尿蛋白含量、胶原纤维阳性区占观察视野面积比、肾组织中α-SMA、FN、CTGF及p-PI3K、p-Akt、HIF-1α表达水平均显著降低(P<0.05),且金钗石斛多糖高剂量组与阳性对照组均显著低于金钗石斛多糖低、中剂量组(P<0.05),阳性对照组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:金钗石斛多糖可改善多柔比星肾病大鼠肾功能并减缓肾纤维化,其机制可能与抑制PI3K/Akt/HIF-1α信号通路有关。

肝细胞癌变过程中磷脂酰肌醇蛋白多糖-3 mRNA扩增及临床价值

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)在肝细胞性肝癌(HCC)形成过程中的表达特点及对HCC的早期诊断价值。方法以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌变,观察肝组织病理学改变,并从肝组织中提取总RNA,将GPC-3mRNA以随机引物经逆转录合成GPC-3cDNA,再以巢式聚合酶链反应扩增GPC-3基因片段。结果肝细胞在癌变过程中,形态学上呈肝细胞变性、癌前病变到肝癌形成三个发展阶段,肝组织总RNA表达水平呈动态梯度表达,表现为癌变组>癌前组>变性组;肝组织GPC-3mRNA扩增阳性率在癌前组和癌变组均为100%,肝细胞变性组为83.3%,正常对照组未见阳性;肝组织GPC-3mRNA阳性率与肝总RNA表达水平,两者呈明显的正相关(r=0.475,P<0.01)。结论GPC-3参与肝细胞的癌变过程,GPC-3mRNA异常表达是HCC早期诊断有价值的分子标志物。

松乳菇多糖通过PI3K/Akt信号通路对人骨肉瘤细胞MG-63裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究松乳菇多糖对裸鼠皮下移植瘤生长、凋亡及相关蛋白表达的影响。方法:采用MG-63细胞建立裸鼠皮下移植瘤,随机分为5组:模型对照组、阳性对照组(氟尿嘧啶,20 mg·kg-1)、松乳菇多糖低(10 mg·kg-1)、中(20 mg·kg-1)、高(30 mg·kg-1)剂量组,每组10只。各组腹腔注射给药,模型对照组给予等量0.9%Na Cl溶液,连续14 d。每日观察各组裸鼠生活状态和肿瘤生长情况,给药第14天后,处死裸鼠,剥瘤称质量并计算抑瘤率;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡;Western blot法检测瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和蛋白激酶B(Akt)含量。结果:与模型对照组相比,松乳菇多糖各组裸鼠的饮食状况、活动度和精神状态均较好;瘤重明显降低(P<0.05或P<0.01);凋亡率明显增加(P<0.01);PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达均明显下调(P<0.05或P<0.01)。与阳性对照组相比,松乳菇多糖各组裸鼠的饮食状况、活动度和精神状态无明显差异;松乳菇多糖低剂量组的抑瘤率和凋亡率均相对较低(P<0.05或P<0.01);高剂量组的凋亡率相对较高(P<0.05);PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:松乳菇多糖通过PI3K/Akt信号通路促进骨肉瘤移植瘤裸鼠肿瘤细胞凋亡。

胃癌组织miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的探讨胃癌组织微小核糖核酸(miR)-23a-3p、miR-361-5p表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和预后的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测120例胃癌患者胃癌组织与癌旁组织中miR-23a-3p、miR-361-5p、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。Pearson相关分析胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性,以及分析miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析胃癌组织中不同miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者生存预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响胃癌患者生存预后因素。结果相比于癌旁组织,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达明显较低,而PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈负相关(均P<0.05)。不同肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度、术后辅助化疗及淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-23a-3p低表达胃癌患者3年总体生存率为46.77%(29/62),低于miR-23a-3p高表达胃癌患者3年总体生存率[81.03%(47/58)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=30.243,P<0.001)。miR-361-5p低表达胃癌患者3年总体生存率为50.79%(32/63),低于miR-361-5p高表达胃癌患者3年总体生存率[77.19%(44/57)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=24.932,P<0.001)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、无术后辅助化疗、miR-23a-3p低表达、miR-361-5p低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达降低,二者表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关,是潜在的胃癌预后相关的肿瘤标志物。

sICAM-1和GPC-3 mRNA对肝癌诊断与转移监测的临床价值

目的:定量分析肝病患者血可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)浓度和外周血单核细胞磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)mRNA,探讨对肝癌(HCC)诊断与预后的价值.方法:收集住院肝病患者外周血,分离单核细胞,制备总RNA,经逆转录合成GPC-3cDNA,以荧光定量PCR扩增;并以酶联免疫吸附法(ELISA)定量分析血ICAM-1水平.结果:肝病发展过程中血ICAM-1表达呈梯度增加,HCC患者血ICAM-1表达显著高于肝硬化(t=3.184,P=0.002)和慢性肝炎患者(t=3.962,P<0.001),与伴门脉癌栓(t=2.941,P=0.005)及肝外转移(t=3.282,P=0.002)明显相关,与患者年龄、性别、HBsAg阳性与否、AFP浓度及肿瘤大小间未见明显相关.GPC-3mRNA阳性仅见肝癌患者(70.9%);肝硬化、慢性肝炎患者及正常对照组中未检出(2=26.773,P<0.001).GPC-3mRNA阳性表达与HBsAg阳性(2=14.601,P<0.001)、肝癌TNM分期(2=17.732,P<0.001)、伴门脉癌栓及肝外转移(2=22.271,P<0.001)显著相关,与瘤体直径、数目、AFP浓度及分化程度未见明显相关;两者可互补诊断,提高诊断肝癌阳性率.结论:sICAM-1和GPC-3mRNA检测是肝癌诊断和转移监测的良好标志物,且对AFP阴性肝癌具有互补诊断价值.

乙酰半胱氨酸通过激活PI3K/AKT信号通路抑制脂多糖诱导的肺泡上皮细胞活力降低和炎症反应

目的研究乙酰半胱氨酸(acetylcysteine,NAC)调控磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肺泡上皮细胞活力、增殖、迁移及炎症因子的影响。方法体外培养人肺泡上皮A549细胞,采用10μg/mL LPS诱导A549细胞建立炎症细胞模型作为LPS组,之后在模型基础上加入0.5、1、2、4、8 mmol/L NAC,以不做干预的细胞作为对照组,药物干预24 h,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法筛选出最佳的NAC浓度用于后续实验研究。而后将细胞分为对照组、LPS组、NAC组(10μg/mL LPS+8 mmol/L NAC)、激活剂组(10μg/mL LPS+10μmol/L PI3K/AKT信号通路激活剂SC79)、NAC+激活剂组(10μg/mL LPS+8 mmol/L NAC+10μmol/L SC79)及NAC+抑制剂组(10μg/mL LPS+8 mmol/L NAC+10μmol/L PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002)。药物干预24 h后,CCK-8法、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)、划痕法和酶联免疫检测(ELISA)法分别测定细胞活力、增殖率、迁移率及炎症因子(IL-6、IL-8、IL-1β、IL-10)水平,蛋白免疫印迹法测定细胞中PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT水平。结果干预细胞活力的最佳浓度为8 mmol/L NAC。与对照组比较,LPS组细胞活力、增殖率、抑炎因子IL-10水平及p-PI3K、p-AKT水平降低,迁移率和促炎因子(IL-6、IL-8、IL-1β)水平升高;与LPS组比较,NAC组和激活剂组细胞活力、增殖率、抑炎因子IL-10水平及p-PI3K、p-AKT水平升高,迁移率、促炎因子(IL-6、IL-8、IL-1β)水平降低;与NAC组比较,NAC+激活剂组上述指标变化进一步加大,而NAC+抑制剂组逆转上述指标变化。结论NAC可通过激活PI3K/AKT信号通路抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞活力与增殖力降低、细胞迁移力增强及炎症反应。

磷脂酰肌醇3-激酶通路对脂多糖预激动小胶质细胞高迁移率族蛋白1表达的影响

目的 探讨磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase/protein kinaseB,P13K/Akt）通路对脂多糖 （lipopolyssacride,LPS）预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1protein 1,HMGB-1）表达的影响.方法 体外分离纯化小鼠大脑皮质小胶质细胞,纯度鉴定后按未刺激对照组、0.01μg/mL LPS单次刺激组（18 h）、1μg/mL LPS刺激组（24 h）、预处理组、PI3K/AKT通路抑制组（2 h）分别进行处理.收获各组细胞与培养上清,采用酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌水平,免疫荧光法检测HMGB-1在细胞中的定位情况,Western blot 检测 HMGB-1和磷酸化Akt的表达水平.结果 PI3K/Akt通路抑制后,LPS预刺激小胶质细胞产生的TNF-α水平较1μg/mL单次刺激组、预刺激组水平降低（P=0.043;P=0.046）;磷酸化Akt表达降低,小胶质细胞HMGB-1表达以及向胞浆中转位呈现降低趋势.结论 PI3K/Akt通路在LPS预激诱导的HMGB-1活化中起正性调节作用,这些分子及调节通路的变化参与LPS耐受诱导的重新调配过程,从而共同影响小胶质细胞的最终效应.

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对Hippo信号通路的调控机制及其对肝癌Huh7细胞生物学行为的影响

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)对Hippo信号通路的调控机制及其对人肝癌Huh7细胞生物学行为的影响。方法分别构建4种靶向GPC3和YAP1基因的sh RNA序列,然后转染入肝癌Huh7细胞,并筛选稳定表达的细胞株。采用荧光定量PCR法和蛋白印迹法检测转染后的Huh7细胞中GPC3和YAP1的表达,以筛选有效沉默GPC3和YAP1的sh RNA。观察沉默GPC3和YAP1以及人重组YAP1(rh YAP1)对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。GPC3 sh RNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、GPC3-714-sh RNA组、GPC3-647-sh RNA组、GPC3-1718-sh RNA组、GPC3-2134-sh RNA组。YAP1 sh RNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、YAP1-906-sh RNA组、YAP1-1363-sh RNA组、YAP1-1666-sh RNA组、YAP1-2895-sh RNA组。GPC3对YAP1的调控实验分为5组:未转染组、空载体组、GPC3-1718-sh RNA组、GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组、YAP1-1666-sh RNA组。结果 1成功构建了可有效沉默GPC3和YAP1表达的GPC3-1718-sh RNA和YAP1-1666-sh RNA质粒。2 GPC3sh RNA各转染组细胞中GPC3 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P<0.05)和空载体组(P<0.05),而GPC3-1718-sh RNA组又明显低于其他转染组(P<0.05)。YAP1 sh RNA各转染组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P<0.05)和空载体组(P<0.05),而YAP1-1666-sh RNA组又明显低于其他转染组(P<0.05)。3 GPC3-1718-sh RNA组和YAP1-1666-sh RNA组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P<0.05)和空载体组(P<0.05);而GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达明显高于GPC3-1718-sh RNA组(P<0.05)和YAP1-1666-sh RNA组(P<0.05)。4与未转染组和空载体组比较,GPC3-1718-sh RNA组和YAP1-1666-sh RNA组的细胞增殖和侵袭能力明显降低(P<0.05),细胞凋亡明显增加(P<0.05);而GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组细胞增殖、侵袭和凋亡均得到明显改善(P<0.05)。结论 GPC3很有可能通过对Hippo信号通路YAP1的调控,实现其对人肝癌细胞Huh7生物学行为的影响。

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3和磷脂酰肌醇蛋白多糖-5在人肝癌组织中的表达及意义

目的分析磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)和磷脂酰肌醇蛋白多糖-5(GPC-5)在肝细胞癌(HCC)组织中及癌旁正常肝组织中的表达规律,探讨其在HCC发生发展过程中的意义。方法以自身配对法收集30例HCC患者经手术切除后的癌灶及癌旁正常肝组织,以HE染色观察肝组织的临床病理学特征,免疫组织化学法检测GPC-3和GPC-5的表达及分布。结果 (1)癌细胞排列呈球团状和条索状,向周围肝组织浸润,部分区域有出血、坏死,并伴有肝细胞增生灶、增生结节及非典型增生结节。(2)在原发性肝癌组织中可见GPC-3阳性表达,其阳性率为70%,高于癌旁正常组织(10%)(P<0.01)。GPC-5在原发性肝癌组织中阳性表达,其阳性率为86.7%,高于癌旁正常组织(7%)(P<0.01)。结论在HCC组织中,GPC-3与GPC-5同时高表达,提示GPC-3和GPC-5均在HCC进展过程中发挥了重要的作用。

黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞PI3K/Akt/eNOS信号通路的影响

背景:前期研究证实黄芪通过P38MAPK通路促进内皮祖细胞增殖,其影响是否通过PI3K/Akt/eNOS途径实现?目的:观察黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞蛋白激酶B、内皮型一氧化氮合酶表达的影响。方法:采用密度梯度离心法获取糖尿病患者外周血单个核细胞,培养7d后鉴定内皮祖细胞。观察0,50,200,800,3200,6400mg/L黄芪多糖分别干预6,12,24,48h对内皮祖细胞影响的量效和时效关系;用黄芪多糖及黄芪多糖与PI3K抑制剂LY294002联合干预糖尿病患者内皮祖细胞,Western blot检测磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达水平。以未进行任何处理健康人内皮祖细胞作为对照组。结果与结论:糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力较对照组明显下降(P<0.05)。黄芪多糖显著增加糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力,当黄芪多糖在200～800mg/L质量浓度范围,干预6～24h可呈时间及剂量依赖性增强内皮祖细胞的增殖能力(P<0.01),并呈剂量依赖性升高内皮祖细胞磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达(P<0.05);PI3K抑制剂LY294002能阻断黄芪多糖诱导的Akt、内皮型一氧化氮合酶的磷酸化(P<0.05)。说明黄芪多糖通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路促进内皮祖细胞增殖和向内皮细胞的分化。

血清GPC3、GP73、AFP-L3和AFP检测对原发性肝癌诊断的价值

目的探讨血清磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC3)、高尔基体蛋白73(Golgi protein-73,GP73)、甲胎蛋白异质体AFP-L3以及AFP单独及联合检测在原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)中的诊断价值。方法 GPC3、GP73、AFP-L3检测采用ELISA法,AFP检测采用化学发光法,分别检测原发性肝癌组(43例)、肝硬化组(43例)、慢性肝炎组(43例)、和健康对照组(43例)血清GPC3、GP73、AFP-L3、AFP水平,应用SPSS统计软件对结果进行统计学分析。结果 PHC组GP73、AFP-L3和AFP水平高于其他各组,差异均有显著性(P=0.000)。GPC3、GP73、AFP-L3和AFP的ROC曲线下面积(AUCROC)分别为0.744、0.910、0.903、0.867,灵敏度分别为53.5%、86.0%、81.4%、76.7%,特异度分别为94.6%、93.8%、95.3%、86.0%。系列试验以GP73+AFP-L3为最佳组合,灵敏度和特异度分别为70.0%和99.7%,平行试验以AFP/AFP-L3/GP73为最佳组合,灵敏度特异度分别为99.4%和76.9%。结论 GP73和AFP-L3有望成为新的诊断原发性肝癌的血清标志物。临床应用中,可用GP73+AFP-L3作为诊断PHC的最佳组合,GP73/AFP-L3/AFP作为排除PHC较好的组合。