多巴胺D1受体激动剂SKF38393对剥夺血清条件下PC12细胞的保护作用

目的研究多巴胺D1受体激动剂SKF38393对剥夺血清所致PC12细胞损伤的神经保护作用及其与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinases/protein kinase B,PI3K/Akt)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)信号通路的关系。方法将PC12细胞分为血清剥夺模型组、血清剥夺后加不同剂量SKF38393处理组(1μmoL、3μmoL、10μmoL、30μmoL和100μmoL)及1%胎牛血清对照组,比较各组PC12细胞活性;PC12细胞分别加入不同剂量(同上)SKF38393处理40min,以及以10μmoLSKF38393处理不同时间(5～80min),然后检测PC12细胞的Akt473及ERK1/2的磷酸化水平;PC12细胞分别加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(50μmoL)、ERK信号通路抑制剂PD98059(50μmoL)或PD169316(10μmoL),后再行SKF38393干预,比较各组PC12细胞活性。结果与剥夺血清组比较,10μmoLSKF38393即可显著增加PC12细胞的活性[(0.58±0.02)vs(0.37±0.01)],并且随着其剂量(30μmoL、100μmoL)的增加PC12细胞活性的增加可更明显[(0.62±0.01)、(0.65±0.02)],上述差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量SKF38393和不同时间的SKF38393处理PC12细胞后磷酸化的Akt和ERK的表达水平均明显高于剥夺血清组(P<0.05)。与SKF38393组的PC12细胞活性(0.59±0.01)比较,PD169316组细胞活性(0.41±0.14)无明显差异(P>0.05),但LY294002组(0.33±0.01)和PD98059(0.33±0.03)组细胞活性均更低(P<0.05),提示仅后二者可阻断SKF38393对PC12细胞损伤的保护作用。结论 SKF38393能保护剥夺血清所致的PC12细胞损伤,其保护作用可能与激活PI3K/Akt和ERK信号通路有关。

LAIR-1通过阻断JAK2 V617F突变的人HEL细胞JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)对Janus激酶2(JAK2)V617F突变的人急性髓系白血病HEL细胞JAK/信号转导子与转录激活子(STAT)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的调节作用,以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用反转录PCR和基因测序鉴定JAK2 V617F突变;应用免疫共沉淀和Western blot法鉴定LAIR-1募集的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)种类;采用CCK-8法检测HEL细胞的增殖;采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测HEL细胞的凋亡率;采用Western blot法检测JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白酪氨酸磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果在JAK2 V617F突变的HEL细胞中,LAIR-1与其配体胶原蛋白结合后可募集含Src同源域2磷酸酶2(SHP-2);LAIR-1可以下调HEL细胞JAK2、STAT1、STAT3、STAT5、AKT和mTOR的蛋白酪氨酸磷酸化水平,并能够显著抑制cyclin D1和Bcl2的表达,而对BAX的表达水平未见显著影响;LAIR-1能够明显抑制HEL细胞的增殖,促进HEL细胞凋亡。结论在JAK2 V617F突变的人白血病HEL细胞中,LAIR-1可通过募集SHP-2抑制JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路的活化,进而抑制HEL细胞的增殖,促进细胞凋亡。

电针对帕金森病小鼠胰高血糖样肽-1受体/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B蛋白通路的调控作用

目的:观察胰高血糖样肽-1受体(GLP-1R)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)蛋白通路在电针治疗帕金森病(PD)小鼠中的作用,探讨电针治疗PD的中脑黑质相关机制。方法:将48只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、电针组、抑制剂组,每组12只。采用鱼藤酮连续灌胃4周制备PD小鼠模型。电针组予电针"风府""太冲""足三里",30 min/次,1次/d,连续干预2周。抑制剂组予二肽基肽酶4抑制剂利格列汀(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续灌胃2周。观察各组小鼠行为学评分变化,用酶联免疫吸附测定法检测血清和黑质中酪氨酸羟化酶(TH)水平,用Western blot法检测小鼠中脑黑质中GLP-1R、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分显著升高(P<0.01),血清和黑质中TH水平均显著降低(P<0.01),黑质中GLP-1R、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。治疗后与模型组比较,电针组和抑制剂组小鼠行为学评分均显著下降(P<0.01),血清和黑质中TH水平均显著升高(P<0.01),黑质中GLP-1R、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与抑制剂组比较,电针组血清和黑质中TH水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:电针"风府""太冲""足三里"可能通过上调GLP-1R/PI3K/Akt蛋白通路的活性,提高血清和黑质中的TH水平,从而改善鱼藤酮诱导的PD小鼠行为学表现。

LY294002对类脂A诱导的人冠状动脉内皮细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨LY294002对类脂A(KLA)诱导的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法用CCK8法检测0、0.01、0.05、0.10、0.20 mg/L KLA和0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L磷酸肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂——LY294002对HCAEC活力的影响。将HCAEC采用简单随机分组法分为空白对照组(Con组)、Toll样受体4(TLR4)激动组(KLA组)、PI3K抑制组(LY组)和KLA+LY组,采用Western Blot法检测各组HCAEC TLR4、PI3K、Cx43蛋白表达水平。结果0.01、0.05 mg/L KLA HCAEC存活率与0 mg/L比较,2.5μmol/L LY294002 HCAEC存活率与0μmol/L比较,差异均无统计学意义(P>0.05);0.10、0.20 mg/L KLA HCAEC存活率均明显低于0 mg/L,5.0、10.0、20.0μmol/L LY294002 HCAEC存活率均明显低于0μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。KLA组HCAEC TLR4、PI3K、Cx43蛋白表达水平明显高于Con组,LY组HCAEC PI3K蛋白表达水平明显低于Con组,KLA+LY组HCAEC TLR4、PI3K、Cx43蛋白表达水平均低于KLA组,差异均有统计学意义(P<0.05);LY组HCAEC TLR4、Cx43蛋白表达水平与Con组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LY294002对正常培养状态下HCAEC TLR4、Cx43蛋白表达无显著影响。LY294002可抑制由KLA诱导的HCAEC Cx43高表达。

与多巴胺受体相关的中枢神经系统疾病

多巴胺受体广泛分布于大脑的各个区域,目前对多巴胺受体的研究已成为热点。多巴胺受体与多种中枢神经系统疾病有密切的关系,但其在中枢神经系统疾病中发挥的作用以及确切的机制至今尚未研究透彻。对新出现的一种磷脂酰肌醇连接的D_1样受体以及经典的多巴胺受体进行深入的研究可能会为中枢神经系统疾病的治疗做出一定的贡献。

IGF-1R调控乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导通路研究

目的：使用小分子抑制物LY294002和PD98059分别抑制磷脂酰肌醇-3激酶（ PI3K）通路和有丝分裂活化蛋白激酶（MAPK）通路的信号转导，给予胰岛素样生长因子-1（IGF-1）刺激，检测乳腺癌细胞的增殖和迁移能力的变化。方法使用CCK-8法和体外迁移实验分别检测IGF-1干预下细胞的增殖能力，并以信号通路抑制剂处理后细胞作为对照组，同样使用CCK-8法和体外迁移实验检测其增殖能力。结果 IGF-1干预第2～4天，不同浓度IGF-1（20，50，100mg/L）均显著促进MDA-MB-231细胞增殖，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；当IGF-1浓度为50mg/L时促进作用最明显；使用LY294002（25μM）或PD98059（50μM）分别阻断PI3K通路和MAPK通路后，不仅抑制MDA-MB-231细胞基础水平的增殖，而且抑制IGF-1刺激下的细胞增殖能力，与DMSO对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）；在不同浓度IGF-1（20，50，100mg/L）作用下，MDA-MB-231细胞迁移能力均增强，与对照组比较，差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论 IGF-1干预后MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力明显增强，PI3K通路和MAPK通路均参与了IGF-1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。

NRG-1亚型及相关信号通路在周围神经疾病中的研究

神经调节蛋白-1（neuregulin-1，NRG-1）是一组含有表皮样生长因子（epidermalgrowthfactor，EGF）结构域的蛋白，其与酪氨酸激酶受体ErbB2（receptortyrosine-proteinkinaseerbB-2，ErbB2）结合后，激动下游的Ras蛋白／丝裂原活化蛋白激酶（rasprotein-mitogen—activatedproteinkinase，Ras—MAPK）和磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（phosphatidylinositOl3-phosphatekinase-proteinkinaseB，P13K-AKT）信号通路，从而促进施万细胞分化、增殖及迁移、髓鞘形成及神经修复。

PI3K信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体-1(s TREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测PI3K蛋白表达水平,RT-PCR法检测PI3K m RNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养血清中s TREM-1表达水平。用不同浓度PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,观察上述指标变化。结果 LPS可时间依赖性地诱导RAW264.7细胞PI3K蛋白、PI3K m RNA的表达;LY294002可浓度依赖性地抑制PI3K蛋白、PI3K m RNA的表达;LY294002阻断PI3K信号转导通路后,LPS对s TREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过PI3K信号通路诱导RAW264.7细胞表达s TREM-1。

司美格鲁肽对脑缺血大鼠的治疗作用及机制

目的观察胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂司美格鲁肽对脑缺血大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法将72只大鼠随机分为假手术组、模型组、司美格鲁肽组、司美格鲁肽+LY294002组,每组18只。模型组、司美格鲁肽组、司美格鲁肽+LY294002组用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,假手术组分离结扎动脉但不插入线栓。司美格鲁肽+LY294002组造模前30 min经侧脑室注射10μL 10 mmol/L PI3K抑制剂LY294002,其余组给予同等剂量生理盐水。司美格鲁肽组及司美格鲁肽+LY294002组造模后即刻经腹腔注射司美格鲁肽溶液(10 nmol/kg),之后隔日空腹经腹腔注射司美格鲁肽溶液(10 nmol/kg),其余组注射等量生理盐水。分别于造模前及造模后1、3、5、7 d测量血糖;用Longa 5分制评分法对各组神经行为进行评价;TTC染色法观察脑梗死情况,计算脑梗死体积;TUNEL染色法检测缺血脑组织细胞凋亡情况;Western blotting法检测缺血脑组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT)及凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3)表达,并计算p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT;用实时荧光定量PCR法检测缺血脑组织p53 mRNA表达。结果造模前后各组血糖水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。与假手术组比较,模型组神经行为学评分、脑梗死体积比、凋亡细胞百分比及缺血脑组织中Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达和p53 mRNA表达高(P均<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及Bcl-2蛋白表达低(P均<0.05);与模型组比较,司美格鲁肽组神经行为学评分、脑梗死体积比、凋亡细胞百分比及缺血脑组织中Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达和p53 mRNA表达低(P均<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及Bcl-2蛋白表达高(P均<0.05);与司美格鲁肽组比较,司美格鲁肽+LY294002组神经行为学评分、脑梗死体积比、凋亡细胞百分比及缺血脑组织中Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达和p53 mRNA表达高(P均<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及Bcl-2蛋白表达低(P均<0.05)。结论司美格鲁肽可改善脑缺血大鼠神经功能障碍,抑制神经细胞凋亡,减轻脑组织损伤;其作用机制可能与激活PI3K/AKT通路有关。

缺血性脑卒中信号转导通路研究进展

短暂或持久的局灶性脑缺血可引起一系列病理生理变化而导致脑损伤，且随时问和缺血程度增加而加重。由此引发的缺血性脑卒中，其发病机制复杂，能量代谢障碍、兴奋性氨基酸毒性作用、炎性反应、半暗带去极化及细胞凋亡等共同参与了其病理生理变化过程。

PI3K/AKT信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤中的作用

目的探究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用。方法使用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)的方法制备大鼠腹腔感染性脓毒症模型,按照检测时间点(24、48、72 h)分组,于术后各时间点用全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测大鼠肾脏组织PI3K mRNA及AKT mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠肾脏组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18的表达水平。假手术组除不进行盲肠结扎及穿孔外,其余操作与CLP组相同。结果与假手术组相比,CLP各组大鼠血Cr、BUN水平出现明显升高(P<0.05),肾脏组织内PI3K及AKT mRNA表达水平明显升高(P<0.01),且其下游NLRP3炎性小体蛋白表达水平明显升高(P<0.01),同时血清TNF-α、IL-1β及IL-18水平明显升高(P<0.01)。结论 PI3K/AKT信号通路在腹腔感染性脓毒症AKI中具有重要作用,其活化诱导下游NLRP3炎性小体活化增加,进而使炎症因子释放增加并加重脓毒症病情。

结核分枝杆菌RD1蛋白PE35干扰宿主细胞的IL-1β通信

目的 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)PE35(Rv3872)是PE/PPE家族的成员,在多种压力条件下会下调表达。分析其在宿主天然免疫反应中的作用,为结核病的防治提供新思路。方法 将PE35通过脂质体转染进鼠巨噬细胞RAW264.7中,在用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激细胞后,通过RT-PCR和ELISA检测巨噬细胞中细胞因子的表达、Western blot检测巨噬细胞中炎性小体的表达和相关信号通路蛋白的磷酸化状态,探索PE35干扰的信号通路。结果 PE35在RAW264.7细胞中减弱了LPS诱导的白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的产生和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain like receptors 3, NLRP3)炎性小体的激活(P均<0.05)。PE35降低Akt和IκB-α蛋白的磷酸化(P均<0.05),从而抑制PI3K/Akt和核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)信号通路的活化。结论 PE35通过减弱PI3K/Akt和NF-κB的信号传导来抑制NLRP3激活,从而降低了LPS诱导的巨噬细胞中IL-1β的产生。

阿片受体、PI3K/Akt和ERK信号通路在瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的 评价阿片受体、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）和细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在瑞芬太尼预处理（RPC）减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,处死后取心室肌组织,原代培养心肌细胞,调整细胞浓度为2×104个/ml后接种于24孔细胞培养板（500 μl/孔）中,采用随机数字表法,将其中108个培养孔分为12组（n=9）：正常对照组（C组）；H/R损伤组（H/R组）采用缺氧90 min/复氧120 min的方法制备心肌细胞H/R损伤模型；缺氧预处理组（HPC组）在H/R前,培养孔经缺氧10 min/复氧30 min；瑞芬太尼预处理组（RPC组）在H/R前,以终浓度1μmol/L瑞芬太尼孵育心肌细胞10 min,再常规培养30 min;δ受体拮抗剂纳曲吲哚＋ RPC组（NTD＋ RPC组）、κ受体拮抗剂nor-binahorphimine（nor-BNI）＋ RPC组（BNI＋RPC组）、PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素＋RPC组（W＋ RPC组）、ERK信号通路阻断剂PD98059＋ RPC组（PD＋ RPC组）在RPC前10 min分别维持培养孔终浓度5μmol/L纳曲吲哚和nor-BNI、0.1μmol/L渥曼青霉素和30 μmol/L PD98059,然后与瑞芬太尼共孵育10 min,再常规培养30 min,随后行H/R；试剂对照组分别为NTD组、BNI组、W组和PD组.于复氧结束时,测定心肌细胞活力、细胞凋亡率和培养液乳酸脱氢酶（LDH）活性.结果 与C组比较,H/R组心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和培养液LDH活性升高（P＜0.05）；与H/R组比较,HPC组、RPC组和BNI＋ RPC组心肌细胞活力升高,细胞凋亡率和培养液LDH活性降低（P＜0.05）,NTD＋ RPC组、W＋ RPC组、PD＋ RPC组、NTD组、BNI组、W组和PD组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）；与RPC组比较,NTD＋ RPC组、BNI＋ RPC组、W＋ RPC组和PD＋ RPC组心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和培养液LDH活性升高（P＜0.05）.结论 瑞芬太尼预处理可能通过激活δ受体,进而激活PI3K/Akt和ERK信号通路,从而减轻大鼠心肌细胞H/R损伤.

T细胞型急性淋巴细胞白血病靶向治疗的研究进展

T细胞型急性淋巴细胞白血病（T-ALL）为分子生物学特点与预后异质性大的恶性疾病,其侵袭性强,复发率高.尽管随着高强度联合化疗及造血干细胞移植（HSCT）应用于临床,T-ALL预后得到较大改善,但疗效仍不够理想.因此,深入研究T-ALL发病机制,探索新治疗靶位对于提高T-ALL疗效具有重要意义.随着对T-ALL分子生物学研究进展,T-ALL治疗的多个新型靶点被逐一发现.笔者拟就T-ALL靶向治疗新型靶点进行综述.