磷脂酰肌醇-4-磷酸酯代谢酶及抑制剂研究进展

目的了解磷脂酰肌醇-4-磷酸酯(PI4P)代谢酶及抑制剂的研究进展,为PI4P信号通路相关靶点药物的研发提供参考。方法对作用于PI4P的6种代谢酶的基本情况、对疾病的影响及典型抑制剂的应用进行总结,并分析现有研究中仍待解决的问题,探讨PI4P代谢酶及抑制剂作为相关疾病治疗靶点的可能性。结果PI4P是一种膜甘油磷脂,由磷脂酰肌醇(PtdIns)4位羟基磷酸化生成;是高尔基体膜的关键功能成分,在囊泡运输和信号传导中不可或缺。尽管对PI4P的生理作用已有深入研究,但对PI4P的代谢调控知之甚少。PI4P代谢酶在肿瘤方面的研究较多,发现磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)高表达与多种肿瘤的恶化有关,目前已有4种PI3K抑制剂作为抗肿瘤药物被批准上市。结论PI4P代谢酶除了能调控肿瘤的进展外,还参与炎症激活、病毒及疟疾感染、阿尔茨海默病等临床常见疾病的发生与发展,但相关研究多停留在基础实验阶段,相关抑制剂可能是治疗上述疾病的有效方法。

不同乙型肝炎病毒DNA载量患者磷脂酰肌醇-4-磷酸酶的表达差异及其意义

目的探究不同乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量患者磷脂酰肌醇-4-磷酸酶（P14Kct）的表达差异及其意义。方法收集2013年1月至2015年1月在天门市第一人民医院接受治疗的150例慢性乙型肝炎患者及50例同时期体检健康人群的血清，利用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测所有研究对象血清的HBVDNA载量，并根据患者血清HBVDNA载量分为高病毒载量组（HBVDNA〉1×10^5拷贝／L）、中病毒载量组（HBVDNA1×10^2～1×10^5拷贝／L）及低病毒载量组（HBVDNA〈1×10^2拷贝／L）3组，各50例。另外选择50例健康体检者的血清作为对照组。比较4组血清HBVDNA载量，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）双抗体夹心法对4组外周血清的P14Kα水平进行检测，分析HBVDNA载量与P14Kα表达的相关性。结果高、中、低病毒载量组及对照组HBVDNA载量和血清P14Kα水平分别为（5．6±1．3）拷贝／L、（3．5±0．6）拷贝／L、（1．7±0．5）拷贝／L、（1．1±0．3）拷贝／L和（4．3±0．8）μg／L、（3．4±0．7）μg／L、（2．8±0．7）μg／L、（2．2±0．6）μg／L，各组比较差异有统计学意义（P〈0．01），其中高、中及低病毒载量组HBVDNA载量和血清P14Ka水平显著高于对照组（P〈0．05），高、中病毒载量组显著高于低病毒载量组（P〈0．05），高病毒载量组显著高于中病毒载量组（P〈0．05）。随着血清HBVDNA载量的增加，P14Kα水平也显著升高，两者呈正相关（rs=0．732，P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎患者血清P14Kα的水平随着HBVDNA载量的增加而增加，两者密切相关，提示P14Kα对HBVDNA的复制有重要作用。

慢性乙型肝炎患者血清磷脂酰肌醇-4-磷酸酶的表达与HBV DNA载量的相关性

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清磷脂酰肌醇-4-磷酸酶(PI4KA)表达与HBV载量的关系。方法收集2012年6月-2013年4月在青岛市立医院就诊的180例慢性乙型肝炎患者的血清,利用荧光定量PCR检测其HBV DNA的载量,根据其HBV DNA载量的高低,分为3组,每组60例:高病毒载量组(HBV DNA>1×107拷贝/ml)、中病毒载量组(1×105拷贝/ml≤HBV DNA≤1×107拷贝/ml)及低病毒载量组(HBV DNA<1×105拷贝/ml),同时以60名健康人作对照。采用ELISA法,检测各组外周血清中的PI4KA的浓度。多组间血清HBV DNA定量的比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。PI4KA水平与HBV DNA载量之间的相关性分析采用Spearman检验。结果健康人血清PI4KA的浓度为(2.29±0.75)ng/ml;低、中、高病毒载量组血清PI4KA的浓度分别为(2.73±0.71)、(3.52±0.78)及(4.72±0.77)ng/ml。慢性乙型肝炎患者不同病毒载量组与健康对照组间血清PI4KA的浓度差异有统计学意义(F=119.958,P<0.01),并且不同病毒载量组都显著高于对照组。随着HBV DNA载量的升高,PI4KA的浓度增加,两者呈正相关(r=0.758,P<0.01)。结论慢性乙型肝炎患者血清PI4KA的浓度与HBV DNA载量密切相关,这一结果提示PI4KA可能在HBV DNA的复制中起到重要作用。

磷脂酰肌醇-4-磷酸酶Ⅱ型对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)对宫颈癌细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法Western blotting检测常见的宫颈癌细胞系中INPP4B的基础表达水平,对INPP4B阴性的Si Ha、C33a细胞转染表达质粒LHCX-INPP4B,高表达INPP4B的Ca Ski细胞转染INPP4B特异性的siRNA,Western blotting检测细胞中INPP4B表达的变化。CCK-8、克隆形成实验检测INPP4B对宫颈癌细胞生长增殖的影响;Brd U染色检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 CCK-8和克隆形成实验显示,过表达INPP4B使Si Ha和C33a细胞的活性和克隆形成能力明显下降(P均<0.05);Brd U实验表明,转染INPP4B后Si Ha细胞和C33a细胞进入S期的比例减少(P=0.04,P=0.01)。与之相应,干扰INPP4B表达后Ca Ski细胞的生长增殖能力增强,进入S期的细胞比例增加(P<0.01)。但INPP4B表达的变化对Si Ha、C33a和Ca Ski细胞的凋亡无明显影响。结论 INPP4B可抑制宫颈癌细胞的生长增殖和细胞周期进程。

磷脂酰肌醇-4-磷酸稳态调控及其在生理和病理中的作用

磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate, PI4P)是真核细胞中一种含量较低,携带负电荷,分布于多种生物膜中的信号分子。PI4P稳态对其执行多种生理功能至关重要。调控PI4P稳态的分子机制包括影响PI4P水平的PI4P激酶和磷酸酶,影响PI4P激酶活性和细胞定位的支架蛋白、小GTPase及其翻译后修饰,以及影响PI4P胞内分布的脂转运蛋白。该文综述了近年PI4P的稳态调控分子机制及其在囊泡运输、脂转运代谢、细胞自噬、细胞器发生、炎性小体活化、病原菌入侵以及肿瘤发生发展等生理病理过程中的研究进展。

小麦条锈菌Ⅲ型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(PsPik1)的功能分析

【目的】克隆小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(Ps Pik1),分析其在小麦条锈菌生长发育与致病过程中的作用。【方法】利用RT-PCR技术克隆Ps Pik1的c DNA序列,采用生物信息学技术分析该基因编码蛋白分子特征并构建进化树;运用实时荧光定量PCR技术,选用小麦条锈菌的延伸因子(elongation factor,EF)作为内参,明确该基因在小麦条锈菌夏孢子阶段和侵染小麦后6、12、18、24、36、48 h以及3、5、7、9、11 d共12个发育时期的表达特征;利用病毒介导的基因沉默技术(BSMV-host-induced gene silencing,BSMV-HIGS),分析沉默Ps Pik1后对小麦条锈菌生长发育及致病性的影响。通过传统酶切连接的方法构建重组载体BSMV:γ:Ps Pik1-as,利用体外转录技术获得BSMVα、β与γ3个组分,在小麦二叶一心期接种BSMV:γ:Ps Pik1-as、BSMV:γ:0-as与BSMV:γ:Ta PDS-as。接种病毒后第10天,在小麦第4叶接种条锈菌CYR32,接菌后24、48、120 h分别取样,以检测Ps Pik1的沉默效率和进行组织学观察。样品经染色处理后,统计分析接菌后48 h沉默植株与对照植株中条锈菌菌丝分支数、吸器母细胞数与菌丝长度的差异,及120 h沉默植株与对照植株中条锈菌菌落面积的差异。在接菌后12 d观察条锈病发病情况并照相记录。【结果】Ps Pik1开放阅读框(open reading frame,ORF)全长4 485 bp,编码1 494个氨基酸,具有III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶典型的脂激酶特有结构域(LKU)、钙神经传感蛋白(NCS1)结合位点、Hom2结构域和PI3K/PI4K超家族激酶结构域。聚类分析表明,Ps Pik1聚于PI4KIIIβ类群,Ps Pik1与柄锈菌属的Pik1亲缘关系较近,与子囊菌Pik1亲缘关系次之,而与动物及植物的PI4KIIIβ亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果表明,Ps Pik1在接种后6、12、18、24 h呈诱导上调表达趋势,分别为夏孢子时期表达量的2.66、7.04、3.42、2.96倍,其中在12 h其表达水平最高。接种后36 h至5 d,Ps Pik1的表达水平开始下降,一直低于夏孢子表达水平,分别为夏孢子表达量的60%、30%、16%、15%。接种后7—11 d,Ps Pik1的表达量开始升高,在接种后11 d恢复至与夏孢子相当的水平。Ps Pik1基因沉默后的组织学观察分析表明,与接种BSMV:γ:0-as(对照)相比,接种BSMV:γ:Ps Pik1-as植株中条锈菌组织分化与生长发育受到了不同程度的影响,表现在接菌后48 h菌丝长度和分支数目明显减小,接菌后120 h菌落面积明显减小。沉默效率检测结果显示,在接菌后24、48、120 h,接种BSMV:γ:Ps Pik1-as植株Ps Pik1的表达水平分别仅为对照植物的49%、49%、69%,表明Ps Pik1的表达明显地受到抑制。【结论】Ps Pik1可能参与了病菌侵染初期的侵染结构分化及寄生关系的建立,在条锈菌致病过程中发挥重要作用。

腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

本文研究了腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。研究结果表明:1、腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有明显的抑制作用,IC_(50)=15μmol/L;动力学分析表明,这种抑制作用机理是与ATP竞争性的;2、腺嘌呤、AMP、ADP、5＇-氯-5＇-脱氧腺苷、阿糖腺苷、2＇-脱氧腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用;3、cAMP对磷脂酰肌醇磷酸化也有抑制作用,这提示了cAMP与肌醇脂质信使系统有联系;5、6-氯-嘌呤核苷(100μmol/L)对该磷酸化无显著抑制作用。

心肌缺血过程中磷酸肌醇4-激酶变化的研究

目的 观察大鼠心肌缺血后心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性的变化 ,探讨其在心肌缺血过程中的调控机理。方法 建立大鼠体内心肌缺血模型 ,在蛋白水平上分别检测心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在缺血后不同时间 (缺血后 1、8、2 5及 48h)的变化 ,用免疫组织化学方法检测磷酸肌醇 4 激酶蛋白表达水平的变化。结果 (1)心肌细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在心肌缺血后 1h达到最高 ,为对照组的 6 .1倍 ,随着时间的延长 ,其活性逐渐下降 ,48h接近于正常水平 ;免疫组织化学结果显示 :与正常组相比 ,缺血组磷酸肌醇 4 激酶蛋白表达水平明显升高。 (2 )红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在缺血后 1h和 2 5h达到最高 ,随后酶活性开始下降 ,缺血后 48h酶活性水平低于正常水平。结论 心肌缺血早期 (1h)心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性显著提高 ,提示磷酸肌醇 4 激酶参与了心肌缺血后的调节过程 ,其活性升高可能与心肌受损伤程度相关。

生理病理状态下PI4KⅢβ的调控机制

磷脂酰肌醇4激酶是磷脂酰肌醇信号通路的起始和关键分子。其中,Ⅲ型磷脂酰肌醇4-激酶β亚型(PI4KⅢβ)参与合成高尔基体PI4P库,在众多生理过程中发挥重要作用;同时,该酶是介导一些致病性RNA病毒复制的重要宿主因子,也参与了细菌感染以及疟疾等病理过程。研究表明,PI4KⅢβ的功能受众多因素调控,包括宿主和病毒蛋白结合伴侣等。该综述将对PI4KⅢβ的结构及其生理病理调控机制进行探讨。

木犀草素通过TLR4/PI3K/AKT通路对子痫前期大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响

目的:探究木犀草素通过Toll样受体4(TLR4)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对子痫前期(PE)大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(40 mg/kg)组、TLR4过表达载体组、TLR4空载组、木犀草素(40 mg/kg)+TLR4过表达载体组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯(LNAME)制备PE模型,以药物分组处理后,测定各组大鼠妊娠晚期平均动脉压及24 h尿蛋白含量,检测各组大鼠平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31(血管标志物)阳性细胞比例、胎盘细胞凋亡比例,血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17水平及胎盘组织凋亡相关蛋白、TLR4/PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、BCL2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、木犀草素+TLR4过表达载体组分别相比,木犀草素组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05),TLR4过表达载体组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,TLR4空载组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:木犀草素可通过下调TLR4/PI3K/AKT通路表达,降低PE大鼠平均动脉压,缓解妊娠后期高血压与蛋白尿症状,抑制炎症,增强胎盘血管生成,减轻胎盘组织损伤及细胞凋亡,提高妊娠大鼠子代存活率。

钠-葡萄糖共同转运体2抑制剂对2型糖尿病患者胰岛素敏感性及血清GPC-4的影响

目的 :探讨达格列净对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者胰岛素敏感性及血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖-4(glypican-4,GPC-4)的影响。方法:80例T2DM患者采用达格列净治疗12周,观察血糖、血脂、胰岛素敏感性及血清GPC-4水平的变化。以40例健康人作为正常对照。结果:T2DM组(5.05±0.98)的血清GPC-4水平低于正常对照组(6.42±0.51)(P=0.000),T2DM组经达格列净治疗后血糖(P=0.000)、HbA1c(P=0.000)和HOMA-IR(P=0.000)均降低,而GPC-4水平升高(P=0.000)。在T2DM组,HbA1c(β=-0.608,P=0.000)和1/HOMA-IR(β=-2.566,P=0.003)均是血清GPC-4的独立影响因子,但治疗前后GPC-4的升高程度与HbA1c降低程度正相关(r=0.397,P=0.002),与HOMA-IR的变化无关(r=-0.062,P=0.539)。结论:达格列净具有降糖、改善胰岛素敏感性和升高循环GPC-4水平的作用,但其对血清GPC-4的影响可能与降糖有关,与其改善胰岛素敏感性的作用无关。

INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探讨磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)调控蛋白激酶B(Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹分别测定胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中INPP4B表达变化。INPP4B过表达慢病毒感染HGC-27细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白、p-Akt蛋白表达。Akt信号激活剂处理感染INPP4B过表达慢病毒的HGC-27细胞,检测细胞增殖、凋亡和Bax、Bcl-2、p-Akt蛋白表达变化。结果胃癌细胞中INPP4B mRNA和蛋白水平均明显低于正常胃黏膜细胞。INPP4B过表达慢病毒感染后的HGC-27细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率明显升高,细胞中Bax蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,p-Akt蛋白表达水平明显降低。Akt信号激活剂可以提高INPP4B过表达慢病毒感染的HGC-27细胞增殖能力,明显减少细胞凋亡,明显减少细胞中Bax蛋白表达,明显促进细胞中Bcl-2、p-Akt蛋白表达。结论INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡。

TRPV4激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对PI3K/AKT/eNOS通路的影响

【目的】探讨瞬时受体电位香草素受体亚型4(TRPV4)激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及相关机制。【方法】72只大鼠随机分为Sham组、I/R组、4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4α-PDD)组、LY294002组,每组18只。建模前30 min,4α-PDD组尾静脉注射4α-PDD 0.2 mg/kg,LY294002组尾静脉注射4α-PDD 0.2 mg/kg和LY2940020.5 mg/kg,Sham组、I/R组尾静脉注射等体积生理盐水,均为一次性给药。I/R后24 h检测大鼠神经功能和脑梗死体积;检测离体脑基底动脉(CBA)舒张功能;免疫印迹法检测脑组织蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p-eNOS蛋白表达。【结果】与I/R组比较,4α-PDD组神经功能评分降低,脑梗死体积减小(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组神经功能评分升高,脑梗死体积增大(P<0.05)。与Sham组比较,I/R组CBA舒张率增加(P<0.05);与I/R组比较,4α-PDD组CBA舒张率增加(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组CBA舒张率降低(P<0.05)。HE染色结果显示,Sham组海马神经元核仁清晰、着色均匀、染色质少,排列整齐、胞体表现为椭圆形或圆形;I/R组神经元大量变形、坏死,胞核浓缩、固染,排列杂乱;4α-PDD组、LY294002组神经元数量较I/R组增加,坏死程度改善,其中4α-PDD组改善程度优于LY294002组。与Sham组比较,I/R组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与I/R组比较,4α-PDD组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS降低(P<0.05)。【结论】TRPV4激动剂可改善脑I/R大鼠神经功能及海马区病理变化,促进CBA舒张,减小脑梗死体积,其可能通过激活PI3K/AKT/eNOS通路来实现。

人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型重组慢病毒载体的构建及其在人雄激素抵抗型前列腺癌PC3细胞中的表达

目的构建人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)重组慢病毒表达载体,并检测其在人雄激素抵抗型前列腺癌细胞株PC3中的表达。方法以人工合成的人INPP4B基因为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆入pGC-FU载体构建重组质粒pGC-FU-INPP4B,将其与辅助包装原件PHelper 1.0和PHelper 2.0载体经Lipofectamine TM 2000介导共转染293T细胞,包装获得携带人INPP4B基因的重组慢病毒LentiINPP4B,免疫荧光法测定病毒滴度。用Lenti-INPP4B感染PC3细胞(Lenti-INPP4B组),以慢病毒Lenti-GFP(携带GFP基因)感染的PC3细胞为阴性对照,RT-PCR及Western blot检测PC3细胞中INPP4B m RNA水平和蛋白的表达,CCK8法检测PC3细胞增殖;Western blot检测PC3细胞中p-AKT水平。结果经PCR及测序鉴定,重组质粒p GC-FU-INPP4B构建正确;Lenti-INPP4B病毒滴度达2×10-8 TU/mL。与阴性对照组比较,Lenti-INPP4B组PC3细胞中INPP4B m RNA水平显著提高(P<0.05),细胞活力抑制显著(P<0.05),细胞内p-AKT水平降低;INPP4B蛋白在Lenti-INPP4B组细胞中表达,在阴性对照组中未表达。结论成功构建了INPP4B慢病毒表达载体,其在PC3细胞中的表达能显著抑制细胞增殖,可能是通过下调p-AKT水平发挥作用。本文为靶向治疗雄激素抵抗型前列腺癌提供了新思路。

磷酯酰肌醇-4-磷酸与丙肝病毒相互关系的研究进展

丙型肝炎由丙肝病毒(hepatitis C virus,HCV)引起,流行性很强。HCV主要通过毒品注射、输血或器官移植传播;极少数情况下,HCV通过血透析、母婴垂直传染。少部分感染HCV的患者会产生急性丙型肝炎,而大多数人会转变成慢性肝炎,其中1/3的人群病情逐渐恶化,严重时导致肝癌。除了肝脏病变,HCV感染还会引起其他组织和器官的损害。因此,对于HCV感染机制的研究显得尤为重要。近年来,寻找参与HCV复制的关键性宿主因子已成为研究热点,磷酯酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol-4-phosphate,PI4P)就是其中之一。该文将着重介绍PI4P及相关蛋白参与HCV生命周期的研究进展,并简要总结相关的鞘脂和胆固醇的生理功能。

p-AKT在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其与增殖和凋亡的相关性

目的探讨磷酸化AKT蛋白(phosphorylation protein kinase B,p-AKT)在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其与增殖和凋亡的相关性。方法选择存档蜡块类型,卵巢浆液性囊腺瘤(ovarian serous cystadenoma,OSA)12例,卵巢浆液性交界性肿瘤(ovarian serous borderline tumors,OS-BT)18例,卵巢浆液性囊腺癌(ovary serous cystadenocarcinoma,OSC)46例;另取正常卵巢组织(normal ovarian tissue,NOT)蜡块10例作为对照。采用免疫组织化学S-P法测定p-AKT和细胞周期蛋白cyclin D1的表达。结果与NOT组和OSA组比较,OS-BT和OSC组p-AKT、cyclin D1阳性表达率升高(P<0.05或P<0.01)。OSC组p-AKT阳性表达率随肿瘤的分化程度的降低而升高(P<0.01),而cyclin D1阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。p-AKT、cyclin D1的阳性表达与淋巴结转移呈正相关(r=0.334、0.371,P<0.05),p-AKT与cyclin D1蛋白的表达呈正相关(r=0.606,P<0.01)。结论磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3 kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路可能通过对卵巢浆液性肿瘤细胞增殖和凋亡相关信号传导通路的调控,一方面促进肿瘤细胞的增殖活性,进一步增强肿瘤细胞的浸润和转移的能力。另一方面,通过对肿瘤细胞凋亡相关蛋白的影响,促进内源性凋亡抑制物的激活和(或)抑制凋亡相关蛋白激酶的表达和活化,抑制肿瘤细胞的凋亡。

酰基辅酶A结合结构域蛋白3在病原微生物复制中的作用

病毒及细菌等病原微生物侵入细胞后,复制过程离不开宿主细胞内的宿主蛋白.近年来研究表明,酰基辅酶A结合结构域蛋白3(ACBD3)可以与一些病原体的蛋白质相互作用,影响病原体微生物在宿主细胞的复制.本文通过总结爱知病毒、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、丙肝病毒、人类鼻病毒以及沙门氏菌侵染宿主细胞时,病毒蛋白质与ACBD3及磷脂酰肌醇4-激酶B(PI4KB)相互作用的研究进展,探讨ACBD3在病原微生物中的作用.

PIK3CA基因突变在子宫颈癌中的研究进展

磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因的突变在子宫颈癌、头颈部鳞癌、乳腺癌中均有报道且较为常见。PIK3CA突变促进了子宫颈上皮细胞的恶性转化,使肿瘤细胞有更强的迁移能力。增加肿瘤细胞对放化疗的抵抗,导致子宫颈癌患者更差的治疗效果和生存预后。突变的PIK3CA可能成为子宫颈癌治疗的新靶点,阿培利司、库潘尼西等PI3K抑制剂在携带PIK3CA突变的子宫颈癌中体现出一定抗肿瘤作用,与泛-人表皮生长因子受体(HER)抑制剂、自噬抑制剂、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂等药物联用可产生更好的抗肿瘤效果。深入研究有望增加晚期、复发性子宫颈癌患者的治疗手段。

丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制

目的基于血小板膜糖蛋白4(CD36)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制。方法通过喂养高脂饮食复制高脂血症模型大鼠,将其随机分为模型组、辛伐他汀组(0.004 g/kg)和丹参饮高、低剂量组(3.6、0.9 g/kg),另设空白组(喂养基础饲料),每组10只。各给药组大鼠每天灌胃相应药物,其余组灌胃等体积生理盐水,连续4周。末次给药后,检测大鼠血脂生化指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]含量,全血黏度、血浆黏度和血浆中纤维蛋白原(FIB)含量,血小板相关参数[血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)和血小板平均体积(MPV)],血小板生理特性和功能相关因子[血管性血友病因子(vWF)、纤维连接蛋白(Fn)、磷脂酶A2(PLA2)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素A2(TXA2)、前列腺素(PGI2)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、β-血小板球蛋白(β-TG)]水平,血小板聚集率(最大聚集率、60 s聚集率、180 s聚集率)和纤溶系统相关因子[组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)]水平,血小板中CD36/PI3K/Akt信号通路相关蛋白[CD36、黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIP5K)、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)、p-Akt1/2/3]表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血浆中TC、TG、LDL-C含量,全血黏度、血浆黏度、血浆中FIB含量,血浆中PLT、MPV、vWF、Fn、PLA2、TXB2、TXA2、cGMP、β-TG水平,血小板最大聚集率、60 s聚集率,血浆中PAI-1水平,CD36、FAK、PIP5K、PI3K、p-Akt、p-Akt1/2/3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);HDL-C含量和6-keto-PGF1α、PGI2、t-PA水平均显著降低(P<0.05)。经丹参饮干预后,上述大部分指标均显著逆转(P<0.05)。结论丹参饮可改善高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能,其作用机制可能与下调CD36/PI3K/Akt信号通路活性、降低血小板活化程度有关。

玉米PI4K基因家族的鉴定及生物信息学分析

磷脂酰肌醇4-激酶(Phosphatidylinositol 4-kinase,PI4K)作为磷脂酰肌醇信号通路代谢中的关键酶,在植物的生长过程中发挥着重要作用。通过生物信息学的方法从玉米数据库中鉴定出13个ZmPI4K家族成员,通过系统进化、motif、基因结构、组织表达模式、顺式作用元件、诱导表达、互作蛋白对ZmPI4Ks成员进行分析。结果表明,玉米ZmPI4K家族分为3个亚家族γ、β、α;同属于一个亚家族成员的motif和基因结构相似。ZmPI4Ks各成员在不同组织均有表达,顺式作用元件和诱导表达结果显示,ZmPI4Ks可能参与植物的生长发育且响应环境或激素胁迫。互作蛋白预测结果暗示,ZmPI4Ks成员可能通过与脂质合成及转运相关蛋白互作来响应非生物胁迫。