黄芩素抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路并诱导MGC-803细胞自噬

目的研究黄芩素(BAI)对胃癌细胞系MGC-803细胞自噬的影响。方法使用(0、 5、 15、 25、 50)μmol/L BAI处理胃癌MGC-803细胞24、 48、 72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,吖啶橙(AO)染色结合免疫荧光细胞化学染色观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达确定MGC-803细胞的自噬情况, Western blot法检测细胞LC3、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、 p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比, BAI可显著抑制MGC-803细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性;BAI处理的MGC-803细胞内酸性溶酶体显著增加, LC3表达增强;BAI处理后可显著降低PI3K和AKT蛋白的磷酸化, LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加、上调P62蛋白的表达。结论黄芩素抑制PI3K/AKT信号通路诱导MGC-803细胞发生自噬。

磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p55PIK表达载体的构建及单克隆株的筛选

目的构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,在人胚胎肾细胞株HEK293中筛选其稳定表达的细胞株。方法 PCR扩增p55PIK基因全长,经过Xho1和Xma1酶切、T4DNA连接酶连接、DH5α转化,酶切和测序鉴定以确定构建质粒正确。转染人胚胎肾细胞株HEK293,G418筛选稳定表达p55PIK的单克隆细胞株,应用Western blot方法检测p55PIK蛋白的表达。结果 pEGFP-N1-p55PIK质粒经PCR、酶切、测序鉴定正确,经过G418筛选后获得稳定细胞株,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白在HEK293细胞中的表达,Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-p55PIK的细胞中p55PIK表达水平增高。结论正确构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,并在HEK293细胞中成功筛选出稳定表达p55PIK的细胞株,为进一步探讨p55PIK的功能提供了良好的工具。

褐飞虱磷脂酰肌醇3激酶p85α亚基基因NlPIK3R1的克隆与功能分析

【目的】PI3K信号通路在生物体中发挥重要功能,涉及糖和脂质的代谢、细胞和组织生长以及生物个体寿命等。本研究旨在探明该通路中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在褐飞虱Nilaparvata lugens中的功能。【方法】根据转录组提供的PI3K p85α核心序列信息,应用c DNA末端快速克隆的技术(RACE)获得了编码PI3K p85α的基因Nl PIK3R1的全长c DNA(Gen Bank登录号为KP635379),并应用荧光定量PCR和通过给成虫喂食ds Nl PIK3R1对Nl PIK3R1进行RNA干扰(RNAi)分别对该基因的表达规律和功能进行了研究。【结果】荧光定量PCR测定结果表明,Nl PIK3R1在褐飞虱若虫和雄成虫中表达量均较低,但在怀卵雌成虫中大量表达。RNAi结果表明,给褐飞虱成虫喂食0.1和0.5μg/μL ds Nl PIK3R1均导致Nl PIK3R1的表达明显受到抑制,高浓度组的抑制效果尤为明显。喂食ds Nl PIK3R1对褐飞虱成虫具有极显著致死效果,高浓度组的褐飞虱成虫在饲喂第7天时存活率仅为37.5%,相比于空白对照组(87.00%)和ds GFP对照组(76.67%)均达到了极显著差异(P<0.01)。对Nl PIK3R1的RNAi导致褐飞虱成虫羽化率下降和体重变轻。【结论】本研究结果显示,Nl PIK3R1基因对褐飞虱的生存、生长和发育具有重要作用,可以作为防治褐飞虱的潜在靶标。

磷脂酰肌醇-3激酶/Akt在体外神经干细胞存活和分化中作用的实验研究

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法:分为对照组、wortmannin组和LY294002组;免疫组化检测Nestin、NSE和S100的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;Western Blotting检测磷酸化Akt、Caspase-9的表达。结果:随着wortmannin和LY294002浓度增大,细胞凋亡率逐渐增加。随着wortmannin和LY294002浓度增大,磷酸化Akt的表达逐渐减弱。高浓度时磷酸化的Caspase-9表达减弱。结论:神经干细胞存活依赖于PI3K/Akt途径的活化,其机制可能是PI3K/Akt活化后,促进了Caspase-9等蛋白的磷酸化,抑制了细胞凋亡事件的发生。

磷脂酰肌醇3激酶β(PI3Kβ)和PI3Kδ在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用

目的探究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作用。方法在BaF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、 W557K558del,分别用PI3Kα、 PI3Kβ、 PI3Kδ亚型特异性抑制剂或者广谱PI3K抑制剂处理细胞,免疫沉淀法和Western blot法检测KIT及其下游信号活化情况。胃肠间质瘤GIST-T1细胞采用相同药物及浓度处理,免疫共沉淀和Western blot法检测KIT及其下游信号的活化情况,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,在表达野生型KIT及其突变体的BaF3细胞中, PI3Kδ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号分子蛋白激酶B(AKT)和胞外信号调节激酶(ERK)活化的抑制作用最强,其次为PI3Kα和PI3Kβ亚型特异性抑制剂。在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号活化的抑制作用最强,其次为PI3Kδ和PI3Kα亚型特异性抑制剂。结论在BaF3细胞中, PI3Kδ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,而在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,这些结果表明不同PI3K亚型在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用,且在不同的细胞中其作用也有不同。

RNA干扰抑制磷脂酰肌醇3-激酶p110β的表达增加氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的能力

目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达增加氟尿嘧啶(FU)诱导人胃癌细胞凋亡的能力。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制PI3Kp110β分子的慢病毒载体LV-sh PI3Kp110β并感染人胃癌细胞株AGS(sh PI3Kp110β组),未转染的细胞为空白对照组(Con组),转染无义序列的对照慢病毒载体LV-shRNA为阴性对照组(sh NC组),荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR和Western blot方法验证慢病毒感染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选PI3Kp110β静默的稳转细胞。在稳转细胞中和对照细胞中加入不同浓度FU分别作用24、48和72 h,通过MTT法检测Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞在加入氟尿嘧啶后细胞增殖的情况,并用Western blot方法检测可能涉及的凋亡相关信号分子的变化。结果慢病毒干扰RNA(shRNA)感染人胃癌细胞株AGS后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平并成功筛选PI3Kp110β静默的AGS稳转细胞;FU可抑制AGS细胞的增殖,其作用呈现浓度的依赖性;在该细胞中下调PI3Kp110β的表达可增加该细胞对FU抑制细胞生长的敏感性;下调胃癌细胞AGS内shPI3Kp110β分子的表达可显著增加FU诱导凋亡相关蛋白PARP的裂解,抑制Bcl-2蛋白的表达,从而促进胃癌细胞的凋亡。结论 PI3Kp110β shRNA转染人胃癌细胞AGS可有效下调该细胞中PI3Kp110β的表达,增加5-Fu抑制人胃癌细胞生长及促进其凋亡的敏感性,促进凋亡信号通路相关蛋白的活化。

长链非编码RNA MIR4435-2HG靶向微小RNA-1-3p调控信号通路磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG(LncRNA MIR4435-2HG)通过调控微小RNA-1-3p(miR-1-3p)的表达对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养正常胰腺细胞系hTERT-HPNE与胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、PaTu8988、BxPC-3,将胰腺癌PaTu8988细胞按照随机数字表法分为si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG siRNA)、si-con组(转染siRNA Control)、miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、miR-con组(转染miR-1-3p阴性对照)、si-MIR4435-2HG+an⁃ti-miR-1-3p组(共转染MIR4435-2HG siRNA与miR-1-3p抑制剂)、si-MIR4435-2HG+anti-miR-con组(共转染MIR4435-2HG siR⁃NA与miR-1-3p抑制剂的阴性对照),同时将未经任何处理的细胞作为NC组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测细胞中MIR4435-2HG与miR-1-3p的表达;双荧光素酶报告基因检测MIR4435-2HG与miR-1-3p的相互作用。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析敲低MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白的表达。结果MIR4435-2HG在胰腺癌细胞中的表达水平明显高于正常胰腺细胞;MIR4435-2HG可特异性结合miR-1-3p并调控其表达活性;敲低MIR4435-2HG与上调miR-1-3p表达后,可抑制胰腺癌PaTu8988细胞增殖,明显减弱细胞迁移及侵袭能力[其中NC组、miR-con组、si-MIR4435-2HG组增殖活性分别为48 h:(1.21±0.10)、(1.18±0.12)、(0.86±0.09),细胞迁移数量分别为(90.56±9.16)、(88.56±8.91)、(26.49±2.10),细胞侵袭数量分别为(160.79±16.12)、(155.09±15.49)、(69.23±7.10),均P<0.05],下调PaTu8988细胞中cyclin D1、MMP2、MMP9、p-Akt、PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达;抑制miR-1-3p表达可促进胰腺癌PaTu8988细胞增殖、迁移及侵袭。结论敲低LncRNA MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-1-3p表达并抑制PI3K/Akt信号通路活化而降低细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达,进而减弱胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

目的 :表达人磷脂酰肌醇 3 激酶p110 β催化亚基。 方法 :将构建有人磷脂酰肌醇 3 激酶 (phosphatidylinositol 3 kinase ,PI 3 K) p110 β催化亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL 2 1(DE3 ) ,用IPTG进行诱导表达。用磷脂酰肌醇 4、5 二磷酸、[γ 3 2 P]ATP与重组PI 3 K p110 β催化亚基一起保温的方法测定PI 3 K的活性 ;3 2 P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析。结果 :SDS PAGE显示表达出一 110kD的新蛋白质分子 ,重组蛋白占菌体总蛋白的比例为 15 % ,大多数重组蛋白以可溶性形式存在。wortmannin是PI 3 K特异的抑制剂 ,wortmannin对重组PI 3 K p110 β亚基有抑制作用 ,这种抑制作用呈剂量依赖关系 ( 2 .5～ 2 0nmo1/L)。结论 :重组蛋白是有活性的人PI 3 K p110 β催化亚基。

磷脂酰肌醇-3-激酶p55γ-N末端24个氨基酸对体外培养HaCaT细胞增殖的影响

目的观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位p55γ-N末端24个氨基酸抑制人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖的作用。方法构建含有PI3K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体AD-N24-GFP及对照病毒AD-GFP,感染HaCaT细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU/PI双掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,CFDA-SE(细胞增殖示踪荧光探针)标记法检测细胞增殖情况。结果 AD-N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,AD-N24-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(84.18±1.73)%,S期(7.60±1.47)%,G2/M期(8.22±1.33)%,而AD-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(61.14±2.76)%,S期(24.54±1.29)%,G2/M期(14.32±1.61)%,空白对照组各期细胞分布为:G0/G1期(65.78±2.11)%,S期(22.22±1.92)%,G2/M期(12.00±1.19)%,AD-N24-GFP组与AD-GFP组及空白对照组间G0/G1期和S期细胞比例的差异有显著性意义(P<0.05);BrdU阳性细胞比例显示:AD-N24-GFP组R2为:(5.89±1.33)%,AD-GFP组R2为:(27.09±2.61)%,空白对照组R2为:(24.91±2.04)%,提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的DNA合成;CFDA-SE检测显示AD-N24-GFP组增殖指数(PI)为:(33.60±2.52),AD-GFP组PI为:(52.47±4.41),空白对照组PI为:(55.29±7.61),提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的增殖。结论在HaCaT细胞中过表达N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程,干预其细胞DNA合成,抑制其细胞增殖。

磷脂酰肌醇3-激酶p110α/β在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与预后的相关性

目的检测甲状腺乳头状癌病人癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)p110α、PI3Kp110β表达水平及其与预后的关系。方法2008年1月~2013年7月我院收治的甲状腺乳头状癌病人60例(甲状腺乳头状癌组),结节性甲状腺肿60例(结节性甲状腺肿组),其他非癌病例正常甲状腺组织60例(正常组)。随访甲状腺乳头状癌组5年生存情况。免疫组化检测各组PI3Kp110α、PI3Kp110β蛋白表达情况,Kaplan-Meier生存曲线分析甲状腺乳头状癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性组和阴性组生存情况,Spearman法分析PI3Kp110α与PI3Kp110β的相关性。结果分别与正常组、结节性甲状腺肿组相比,甲状腺乳头状癌组PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性率升高(P<0.05)。甲状腺乳头状癌病人癌组织PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期明显相关(P<0.05)。单因素分析显示,PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴结转移、TNM分期均为影响甲状腺乳头状癌预后不良的危险因素;多因素分析显示,PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴结转移、TNM分期均是影响甲状腺乳头状癌预后不良的独立危险因素。60例病人14例出现复发,无失访病例。PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性累计生存率明显低于PI3Kp110α、PI3Kp110β阴性累计生存率(P均<0.05)。Spearman法分析甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α与PI3Kp110β呈正相关(P<0.05)。结论甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性率升高,是预后不良的独立危险因素,且二者关系密切。

靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶110β因子的表达对人胃癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达对人胃癌细胞生长的影响。方法运用RNA干扰技术,合成靶向抑制PI3Kp110β的小干扰RNA(si RNA)序列并分别瞬时转染人胃癌细胞株AGS、SGC7901和MKN45(si-PI3Kp110β),作为实验组,未转染的细胞为空白对照组(Con),转染无义序列的si RNA为阴性对照组(si-NC)。采用RT-PCR和Western Blot方法验证瞬时转染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在空白对照组(Con)、阴性对照组(si-NC)和实验组(si-PI3Kp110β)细胞中的表达水平,并通过MTT法检测细胞增殖及Annexin V-FITC/PI双染法检测AGS细胞凋亡率的情况。结果小分子干扰RNA(si RNA)瞬时转染人胃癌细胞株AGS、SGC7901和MKN45后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平。与阴性对照组(si-NC)比较,静默PI3Kp110β因子可减少AGS细胞的增殖(P<0.05),并明显增加AGS细胞的凋亡率(P<0.01)。结论小分子干扰RNA可有效下调PI3Kp在人胃癌细胞中的表达,沉默PI3Kp110β因子可有效抑制胃癌肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡,提示针对PI3Kp110β蛋白的干预治疗有可能成为抑制胃癌细胞生长的一个新的治疗方法。

基于磷脂酰肌醇3⁃激酶/蛋白激酶B信号通路探讨针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响

目的探究针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响,初步了解针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤的治疗机制。方法于2018年12月至2019年6月选取60只6周龄SPF级SD大鼠,采用随机数字表法将SD大鼠分为四组:空白组(Control,C)、超负荷运动组(Overload,O)、针刺组(Acupuncture,A)和超负荷运动+针刺组(Overload and Acupuncture,OA),各15只;O组及OA组实行超负荷运动,运动结束立即针刺A组及OA组足三里、阳陵泉、内关和肾俞穴,留针20 min,持续14 d;检测各组SD大鼠骨骼肌中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、琥珀酸脱氢酶(SDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性;使用流式细胞仪检测SD大鼠骨骼肌细胞凋亡情况,使用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase⁃3)活性;检测SD大鼠血清中肌酸激酶水平并使用苏木精⁃伊红(HE)染色观察SD大鼠骨骼肌情况;使用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3⁃激酶/蛋白激酶B(PI3K⁃Akt)信号通路相关蛋白表达情况。结果相比C组丙二醛水平(4.75±0.29)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(9.89±1.02)%和肌酸激酶(457.54±45.02)kU/L,O组丙二醛水平(13.97±0.55)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(32.58±3.50%)、Bax、Caspase⁃3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平(1985.50±88.87)kU/L均显著升高(P<0.05);相比C组GSH⁃Px水平(142.25±8.39)kU/L、SOD水平(2.50±0.25)kU/L、SDH水平(35.75±8.78)kU/L,O组GSH⁃Px水平(55.68±6.97)kU/L、SOD水平(1.02±0.17)kU/L、SDH水平(10.58±6.50)kU/L、Bcl⁃2、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p⁃AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m⁃TOR)水平均显著降低(P<0.05),Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);相比O组,A组丙二醛水平(4.99±0.32)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(11.52±1.02)%、Bax、Caspase⁃3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平均(557.56±54.25)kU/L显著降低,GSH⁃Px水平(130.25±7.14)kU/L、SOD水平(2.38±0.30)kU/L、SDH水平(31.25±5.50)kU/L、Bcl⁃2、PI3K、p⁃AKT、m⁃TOR蛋白水平显著升高(P<0.05),Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);相比A组,OA组丙二醛水平(7.89±0.41)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(22.58±2.51)%、Bax、Caspase⁃3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平(1402.51±64.50)kU/L均显著升高,GSH⁃Px水平(135.58±8.14)kU/L、SOD水平(2.10±0.21)kU/L、SDH水平(24.28±4.99)kU/L、Bcl⁃2、PI3K、p⁃AKT、m⁃TOR蛋白水平显著降低(P<0.05),Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);相比O组,OA组丙二醛水平、骨骼肌细胞凋亡水平、Bax、Caspase⁃3蛋白表达水、血清肌酸激酶平均显著降低,GSH⁃Px水平、SOD水平、SDH水平、Bcl⁃2、PI3K、p⁃AKT、m⁃TOR蛋白水平显著升高(P<0.05),Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色观察结果显示:O组纤维弯曲,肌红蛋白溶解,肌细胞核固缩、溶解,肌束膜破裂;OA组少量肌纤维断裂溶解弯曲,余未见异常。结论针刺可以通过调控PI3K⁃Akt信号通路抑制SD大鼠氧化应激和骨骼肌细胞凋亡来实现治疗超负荷运动致骨骼肌损伤。

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于2018年12月至2019年12月进行,通过体外培养PANC-1细胞,经过不同浓度(0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素(SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中0 mg/L和400 mg/L的生长抑素作为对照组(Control)和生长抑素组(SST);将过表达载体(pcDNA)和过表达FOXD1(FOXD1)转染至PANC-1细胞,经过400 mg/L的生长抑素及20 mol/L的PI3K抑制剂LY294002处理细胞,记为SST+pcDNA组、SST+FOXD1组和SST+FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、FOXD1和PI3K/AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXD1 mRNA的表达。结果与Control组相比,SST组可以抑制FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达(0.42±0.04)、增殖(0.52±0.05)、迁移(66.8±7.2)和侵袭(63.7±6.5)能力,下调p-PI3K(0.43±0.04)、p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与SST+pcDNA组相比,SST+FOXD1组可以促进以抑制FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达(0.64±0.06)、增殖(0.71±0.07)、迁移(86.9±8.5)和侵袭(81.5±7.3)能力,上调p-PI3K(0.62±0.05)、p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与SST+FOXD1组相比,SST+FOXD1+LY294002组可以抑制FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖(0.53±0.05)、迁移(67.2±6.5)和侵袭(62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

多囊卵巢综合征患者脂肪组织磷脂酰肌醇-3激酶的表达与活性研究

目的:研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)的表达及酶活性的改变,探讨PCOS胰岛素抵抗(IR)的分子机制。方法:采用Western blot检测PCOS IR 组(19例)、PCOS非IR组(17例)及对照组(20例)PI-3K亚单位P85蛋白在三组脂肪组织中的表达,RT-PCR方法检测各组脂肪组织PI-3K亚单位P85 mRNA的表达;采用免疫沉淀、薄层层析及γ液闪计数方法检测PI-3K的活性,并进行分析比较。结果:①PCOS IR组PI-3K亚单位P85蛋白质及mRNA的表达与PCOS非IR组和对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。②PCOS 组PI-3K的活性显著下降,而PCOS IR组激酶活性的下降尤为明显(P<0.01),与HOMA-IR呈显著负相关(P<0.01)。结论:PCOS IR患者PI-3K亚基的P85转录及翻译水平均无改变,该激酶活性的降低,影响胰岛素信号通路中信号分子的生物学作用,是导致IR形成的重要机制。

细胞信号转导信使磷脂酰肌醇3-激酶和卵巢癌的关系

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)是一种与细胞信号转导有关的脂类第二信使。在人类肿瘤中,已发现PI3K级联信号途径的各成员具有基因结构,蛋白质表达和激酶活性等的异常改变。PI3K在卵巢癌中有异常表达,为肿瘤早期诊断、开发新的抗肿瘤药物和寻找新的基因治疗靶点提供了新的思路。

脑胶质瘤中磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B及同源磷酸酶-张力蛋白表达水平

目的探讨PI3K、AKT、PTEN在脑胶质瘤中的表达。方法选择2017年1~12月在我院及华山医院手术治疗的脑胶质瘤患者66例的病理标本进行分析,另选择50例患者的正常脑组织病理标本为参照。应用免疫组化方法检测磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B及同源磷酸酶-张力蛋白表达,比较脑胶质瘤组织中以及正常脑组织中三者的表达水平,分析脑胶质瘤组织中三者阳性表达的相关性。结果 PI3K及AKT在正常脑组织的阳性表达率显著低于低级别脑胶质瘤及高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05);低级别脑胶质瘤显著低于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。正常脑组织PTEN蛋白阳性率100.0%,显著高于低级别脑胶质瘤与高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05);低级别脑胶质瘤显著高于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K、AKT在脑胶质瘤中呈高表达,PTEN呈低表达,且与恶性程度有关。