miRNA-375靶向磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miRNA-375靶向磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α(PIK3CA)对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响。方法选取宫颈癌细胞系Si Ha,分别转染mi RNA-375模拟基因、mi RNA-375抑制剂、对照模拟基因及对照抑制剂,采用RT-PCR法检测mi RNA-375表达,Western blot检测PIK3CA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证mi RNA-375与PIK3CA的靶向关系。结果转染miRNA-375模拟基因后miRNA-375表达上调,PIK3CA蛋白表达降低(P<0.05);转染miRNA-375抑制剂后miRNA-375表达降低,PIK3CA蛋白表达增强(P<0.05)。转染miRNA-375模拟基因后SiHa细胞增殖活性、迁移能力降低(P<0.05);转染miRNA-375抑制剂后SiHa细胞增殖活性、迁移能力增强(P <0.05)。miRNA靶基因预测软件检测结果显示,miRNA-375能作用于PIK3CA 3'-UTR。与转染对照模拟基因比较,共转染miRNA-375模拟基因与PIK3CA-WT可使SiHa荧光素酶活性降低(P <0.05)。结论 miRNA-375可抑制宫颈癌细胞增殖及迁移,其机制可能与靶向调控PIK3CA有关。

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌细胞的促凋亡作用

探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达联合5-FU对大肠癌LoVo细胞的促凋亡作用。方法复苏培养PI3K p85α干扰组LoVo细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-LoVo)和LoVo对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,MTT法检测5-FU对两组细胞的半数抑制浓度(IC50),Annexin-FITC标记法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示LoVo干扰组细胞PI3K p85α蛋白抑制率为59%,MTT结果显示干扰组细胞5-FU的IC50值(4.57±0.16)μmol/L明显低于对照组细胞5-FU的IC50值(8.07±0.30)μmol/L(P=0.000),细胞凋亡实验显示,干扰组细胞对5-FU诱导凋亡的敏感性增加(P=0.000)。结论 PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU可促进大肠癌LoVo细胞凋亡,为基因治疗和化学药物联合治疗大肠癌提供新的策略。

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制

目的:探讨PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌SW480细胞促凋亡作用的机制。方法:复苏培养PI3Kp85α干扰组SW480细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480)和SW480对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,采用Western blot方法比较两组细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim表达的差异。结果:Western blot结果显示SW480干扰组细胞PI3Kp85α蛋白抑制率为84%,5-FU刺激48h后,PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480细胞组凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim的表达较SW480对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU可通过增加促凋亡蛋白的表达促进大肠癌SW480细胞凋亡,为进一步阐明大肠癌细胞恶性增值的分子机制打下基础。

非小细胞肺癌MET、KRAS、PIK3CA和BRAF基因突变状态与临床特征的关系分析

目的分析非小细胞肺癌原癌基因(MET)、Kirsten鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)基因突变状态与临床特征的关系。方法选择719例非小细胞肺癌患者,通过二代测序(NGS)检测患者的MET、KRAS、PIK3CA、BRAF,分析基因突变状态与临床特征的关系。结果MET基因突变的临床特征:男性患者13例,女性患者12例;<60岁患者8例,≥60岁患者17例;腺癌11例,非腺癌14例。KRAS基因突变的临床特征:男性患者15例,女性患者11例;<60岁患者8例,≥60岁患者18例;腺癌14例,非腺癌12例。PIK3CA基因突变的临床特征:男性患者12例,女性患者10例;<60岁患者9例,≥60岁患者13例;腺癌15例,非腺癌7例。BRAF基因突变的临床特征:男性患者11例,女性患者12例;<60岁患者13例,≥60岁患者10例;腺癌12例,非腺癌11例。结论非小细胞肺癌MET、KRAS、PIK3CA、BRAF基因突变状态与临床特征存在一定关系。

PI3Ks新型抑制剂NVP-BEZ235对食管鳞癌的抑制作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)新型抑制剂NVP-BEZ235(Dactolisib)对食管鳞癌体内外模型的抑制作用,为食管鳞癌的靶向治疗提供参考。方法采用免疫印迹(Western blot)法检测食管鳞癌细胞系中磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(PI3K-p85α)蛋白的表达情况;对食管鳞癌的细胞系分别给予0,1,4,8,16,32,64,128 nmol/L浓度的NVP-BEZ235,采用MTT法检测生长情况,计算细胞生存率及半数抑制浓度(IC50);对PI3K-p85α高表达及低表达的食管鳞癌细胞系分别予10 nmol/L NVP-BEZ235,观察细胞集落形成情况;建立裸鼠皮下移植瘤模型,评估NVP-BEZ235的体内治疗效果。结果PI3K-p85α高表达的食管鳞癌细胞系KYSE30,KYSE70,KYSE510,TE1对NVP-BEZ235更敏感,IC50分别为4.92,5.43,4.76,7.78 nmol/L;而PI3K-p85α低表达的细胞系KYSE150,KYSE180,KYSE270,KYSE450对NVP-BEZ235的敏感度较低,IC50分别为13.21,18.44,20.37,48.45 nmol/L。加入10 nmol/L NVP-BEZ235进行的集落形成实验结果相似,KYSE30,KYSE70,KYSE510,TE1的集落数目少于KYSE150,KYSE180,KYSE270,KYSE450的集落数目。在裸鼠皮下移植瘤模型中,较低浓度(10 mg/kg)的NVP-BEZ235即可抑制食管鳞癌皮下移植瘤的生长。结论NVP-BEZ235对食管鳞癌细胞系和裸鼠移植瘤都有明显的抑制作用,在PI3K-p85α高表达的食管鳞癌细胞系中抑制效果更明显,在食管鳞癌中具有一定靶向性,可为后期的临床试验提供参考。

PI3K p85α在大肠癌癌变过程中的表达及意义

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3K p85α)在大肠癌癌变过程中,即大肠正常组织、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测116例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有明显统计学意义(P<0.05)。统计分析显示在大肠癌中PI3K p85α蛋白与患者的肿瘤分化程度无关,但是与临床分期相关(P<0.05)。结论在大肠癌的发生发展过程中存在PI3K p85α蛋白的异常表达并与临床分期密切相关,PI3K/AKT信号传导通路在大肠癌癌变过程中有重要作用。

RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白对大肠癌细胞侵袭与转移的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的LoVo细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达77%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。细胞划痕实验显示,干扰组细胞的划痕愈合能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失可明显降低大肠癌LoVo细胞的迁移运动能力,PI3Kp85α可能成为治疗大肠癌转移的新靶点。

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞增值的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。

体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的探讨小干扰RNA(siRNA)技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组(P<0.05)。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80%,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85αsiRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85αsiRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组(P<0.05)。Transwell实验显示,PI3Kp85αsiRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组(P<0.05)。结论通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法、Western blot和ELISA法检测116例甲状腺乳头状癌组织、90例甲状腺乳头状增生组织中PI3Kp85α蛋白的表达情况,并分析蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。利用ROC曲线评价PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌诊断中的价值。结果:PI3Kp85α蛋白的阳性表达率在甲状腺乳头状癌组织中显著高于甲状腺乳头状增生组织(69.8%vs.31.1%),2组间差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺乳头状癌中,PI3Kp85α蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05);PI3Kp85α诊断甲状腺乳头状癌的ROC曲线下面积为0.966,当cut-off值取2.100时,诊断灵敏度(为92.2%)和特异度(为91.1%)较高。结论:甲状腺乳头状癌组织中PI3Kp85α蛋白的阳性表达率明显升高,且其表达水平与淋巴结转移和肿瘤分期相关,可能作为评估甲状腺乳头状癌侵袭性及预后的指标。

PIK3R1在人原发性肝细胞癌中的表达及其与肿瘤上皮间质转化关系

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶调节亚单位1(PIK3R1)在人原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其与恶性肿瘤上皮间质转化的相关性。方法:选取80例HCC病人癌组织及相应癌旁组织,通过免疫组织化学染色法检测HCC组织及相应癌旁组织中PIK3R1编码蛋白(PIK3R1/p85α)表达,并检测HCC组织中EMT相关蛋白转化生长因子β(TGF-β)、上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)表达,评估其表达与HCC病人临床特征的相关性。结果:PIK3R1/p85α在HCC组织中的阳性率为70.0%(56/80),高于癌旁组织的17.5%(7/40)(P<0.05);不同组织分化程度HCC病人的PIK3R1/p85α、E-cadherin和TGF-β表达差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01);HCC组织中PIK3R1/p85α与E-cadherin表达呈明显负相关关系(r=-0.323,P<0.01),与TGF-β表达呈正相关关系(r=0.247,P<0.05);无侵袭转移HCC病人和有侵袭转移病人的PIK3R1/p85α蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PIK3R1在HCC组织中表达水平升高,高水平PIK3R1可能会促进肿瘤上皮间质转化的发生,并与HCC不良预后有关。

PIK3CA及GST-π在人骨肉瘤多药耐药细胞株MG-63/ADM中的表达

目的探讨人骨肉瘤MG-63细胞及多药耐药细胞株MG-63/多柔比星(ADM)中磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位(PIK3CA)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的表达水平,探讨其与多药耐药的关系。方法体外培养MG-63细胞并通过ADM大剂量间隙作用法建立人骨肉瘤多药耐药MG-63/ADM细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测两种细胞的耐药性;采用蛋白质印迹法(Western blot)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两种细胞中PIK3CA和GST-π的蛋白及mRNA表达水平,分析PIK3CA与GST-π蛋白表达的相关性。结果 MTT检测结果显示,MG-63/ADM细胞株对ADM明显耐药,IC50为(1.97±0.56)μg/ml,耐药指数为(11.35±2.40),均明显高于MG-63细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Western blot检测结果显示,MG-63/ADM细胞中PIK3CA和GST-π蛋白的相对表达量均明显高于MG-63细胞(P﹤0.01)。RT-PCR检测结果显示,MG-63/ADM细胞中PIK3CA mRNA和GST-πmRNA的相对表达量均明显高于MG-63细胞(P﹤0.01)。相关性分析结果表明,MG-63/ADM细胞中PIK3CA与GST-π蛋白的表达呈正相关(r=0.866,P﹤0.01)。结论 MG-63/ADM细胞较MG-63细胞的耐药性明显增强,人骨肉瘤耐药细胞株MG-63/ADM中PIK3CA和GST-π的mRNA和蛋白表达水平均明显高于人骨肉瘤MG-63细胞,提示PIK3CA及GST-π可能参与骨肉瘤多药耐药过程。

大肠癌转移和复发与KRAS及磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α基因突变的关系

目的 检测大肠癌组织中KRAS与磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位oα（PIK3CA）突变,探讨其与大肠癌转移、复发之间的关系.方法 收集大肠癌标本94例,提取DNA后行KRAS和PIK3CA基因测序,分析其临床病理特征,探讨两者之间的关系;并对患者进行为期3年的随访,分析基因突变与转移、复发的关系.结果 KRAS基因突变31例,远处转移率高于野生型（61.3％比34.9％）;PIK3CA基因突变15例,远处转移率高于野生型（73.3％比38.0％）;两者共同突变7例,均未突变55例,共同突变者转移率高于均未突变者（71.4％比29.1％）;术后3年随访KRAS基因突变型转移率和复发率均高于野生型（93.1％比69.5％,65.5％比39.0％）,PIK3CA基因突变型转移率和复发率亦均高于野生型（93.3％比74.0％,73.3％比42.5％）;上述结果差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 大肠癌组织中KRAS和PIK3CA基因突变型远处转移率和复发率高,对大肠癌的远处转移和复发可能有一定的预测价值.

ARID1A､PIK3CA､Ki-67在不同病变级别､浸润性膀胱尿路上皮癌中的表达及对肿瘤复发的影响

目的探讨AT丰富结合域1 A(ARID1 A)､磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α基因(PIK3 CA)､细胞增殖核抗原67(Ki-67)在不同病变级别､浸润性膀胱尿路上皮癌(BUC)中的表达情况及对肿瘤复发的影响。方法选取2018年5月至2019年8月保定市第二医院收治的107例BUC患者作为研究对象。均通过手术或膀胱镜活检取癌组织,并取其中28例患者的癌旁正常组织标本(距癌旁>2cm)作为对照。对比不同组织中ARID1 A､PIK3 CA､Ki-67蛋白表达。治疗后随访6个月,根据是否复发将患者分为复发组(n=27)和未复发组(n=80),分析BUC复发的影响因素,以及ARID1 A､PIK3 CA､Ki-67蛋白表达与病变分级､临床分期的关系。结果BUC患者癌组织ARID1 A蛋白阳性率低于癌旁正常组织,PIK3 CA､Ki-67蛋白阳性率高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);复发组年龄､病变级别､临床分期､病灶个数､PIK3 CA蛋白阳性表达率与未复发组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);两组ARID1 A､Ki-67蛋白阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);随着年龄､病变级别､临床分期､病灶个数､PIK3 CA蛋白阳性表达率升高,BUC患者复发风险增加(P<0.05);BUC患者病变级别､临床分期越高,PIK3 CA､Ki-67蛋白阳性表达率越高,ARID1 A蛋白阳性表达率越低(P<0.05)。结论BUC患者癌组织中ARID1 A､PIK3 CA､Ki-67蛋白表达明显异常,且与病变级别､临床分期密切相关,其中PIK3 CA蛋白阳性表达可明显增加复发率。

肺鳞癌组织中表皮生长因子受体和磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α基因突变分析及其与临床病理特征的关系

肺癌是当今世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中约80％-85％的肺癌为非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC），主要为鳞癌和腺癌两种亚型。40％～80％的NSCLC过表达表皮生长因子受体（epidermal growth factorreceptor，EGFR），其激活酪氨酸激酶，使肿瘤细胞增殖分裂并永生化。近年来，随着分子靶向治疗的发展，

槐耳颗粒对MDA-MB-231细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路表达的影响

目的探讨槐耳颗粒对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的影响。方法将三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞用含不同浓度的槐耳颗粒的DMEM高糖培养基(分组为0、2、4、8 mg/mL)进行培养,采用细胞计数试剂法检测24小时、48小时、72小时的细胞活性,原位末端转移酶标记技术法细胞爬片染色检测干预48小时后的细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法测定细胞内磷脂酰肌醇3、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达情况。结果(1)与空白对照组(0 mg/mL)相比,槐耳颗粒(2、4、8 mg/mL)组的MDA-MB-231细胞均出现活力下降,且呈时间及浓度依赖性,具有统计学意义(P<0.05);(2)与空白对照组相比,槐耳颗粒组的MDA-MB-231细胞凋亡增高,呈浓度依赖,且具有统计学意义(P<0.05);(3)与空白对照组相比,经槐耳颗粒处理的MDA-MB-231细胞磷脂酰肌醇3、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达均出现不同程度下降,具有统计学意义(P<0.05)。结论槐耳颗粒具有针对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤作用,且具浓度及时间依赖性,其机制可能与对磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路的抑制有关。

PI3KP85α在高脂高糖喂养妊娠期大鼠肝脏中的表达及其与胰岛素抵抗的关系

目的探讨高糖高脂喂养妊娠大鼠肝脏组织磷脂酰肌醇3激酶p85α(PI3KP85α)mRNA的表达及其对妊娠期胰岛素抵抗的影响。方法健康6周龄雌性SD大鼠40只,分为4组:高糖高脂饮食-孕鼠组(SFP)、高糖高脂饮食-未孕组(SFV)、普通饮食组-孕鼠组(NP)及普通饮食组-未孕鼠(NV),每组各10只。SFP、NV组大鼠与雄性大鼠配对受孕,在妊娠第20天禁食水12小时后测空腹血糖和胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数;应用RT-PCR测定肝脏组织PI3KP85αmRNA的表达。结果 SFP组胰岛素抵抗指数(11.29±0.28)肝脏组织P13KP85αmRNA的表达量(1.04±0.16)明显高于其他组,差异有统计学意义(F=38.67,P<0.01;F=36.70,P<0.01);SFV组P13KP85αmRNA的表达与胰岛素抵抗指数呈正相关(F=0.81,P<0.01)。结论高糖高脂喂养妊娠大鼠,肝脏组织PI3KP85αmRNA明显升高,P13KP85α的高表达可能是导致妊娠期胰岛素抵抗进而发生妊娠期糖尿病的原因之一。

食管鳞癌组织PI3KCA、PI3KCB表达变化及其与患者临床病理参数的关系

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PI3KCA)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位β(PI3KCB)在食管鳞癌发生、发展中的作用。方法选择食管鳞癌组织(鳞癌组织)126例份、低级别食管上皮内瘤变组织(低级别瘤变组织)32例份、高级别食管上皮内瘤变组织(高级别瘤变组织)34例份、正常食管黏膜组织(正常组织)30例份。采用免疫组化法检测各组织PI3KCA、PI3KCB阳性表达率,分析鳞癌组织PI3KCA、PI3KCB阳性表达与患者临床病理参数的关系。采用Spearman相关分析法分析各组织PI3KCA、PI3KCB阳性表达的关系。结果鳞癌组织、高级别瘤变组织PI3KCA、PI3KCB阳性表达率均高于低级别瘤变组织及正常组织(P均<0.05)。低分化、有淋巴结转移、TNM分期高的鳞癌组织中PI3KCA、PI3KCB阳性表达率高于高分化、无淋巴结转移、TNM分期低的鳞癌组织(P均<0.05)。鳞癌组织PI3KCA、PI3KCB阳性表达与患者年龄、性别及肿瘤大小、部位、浸润深度均无相关性(P均>0.05)。鳞癌组织、高级别瘤变组织PI3KCA阳性表达与PI3KCB阳性表达均呈正相关关系(r分别为0.289、0.254,P均<0.05),正常组织、低级别瘤变组织PI3KCA阳性表达与PI3KCB阳性表达无相关性(r分别为0.121、0.145,P均>0.05)。结论食管鳞癌组织PI3KCA、PI3KCB高表达,二者表达变化协同促进食管鳞癌的发生、发展。