小麦条锈菌Ⅲ型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(PsPik1)的功能分析

【目的】克隆小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(Ps Pik1),分析其在小麦条锈菌生长发育与致病过程中的作用。【方法】利用RT-PCR技术克隆Ps Pik1的c DNA序列,采用生物信息学技术分析该基因编码蛋白分子特征并构建进化树;运用实时荧光定量PCR技术,选用小麦条锈菌的延伸因子(elongation factor,EF)作为内参,明确该基因在小麦条锈菌夏孢子阶段和侵染小麦后6、12、18、24、36、48 h以及3、5、7、9、11 d共12个发育时期的表达特征;利用病毒介导的基因沉默技术(BSMV-host-induced gene silencing,BSMV-HIGS),分析沉默Ps Pik1后对小麦条锈菌生长发育及致病性的影响。通过传统酶切连接的方法构建重组载体BSMV:γ:Ps Pik1-as,利用体外转录技术获得BSMVα、β与γ3个组分,在小麦二叶一心期接种BSMV:γ:Ps Pik1-as、BSMV:γ:0-as与BSMV:γ:Ta PDS-as。接种病毒后第10天,在小麦第4叶接种条锈菌CYR32,接菌后24、48、120 h分别取样,以检测Ps Pik1的沉默效率和进行组织学观察。样品经染色处理后,统计分析接菌后48 h沉默植株与对照植株中条锈菌菌丝分支数、吸器母细胞数与菌丝长度的差异,及120 h沉默植株与对照植株中条锈菌菌落面积的差异。在接菌后12 d观察条锈病发病情况并照相记录。【结果】Ps Pik1开放阅读框(open reading frame,ORF)全长4 485 bp,编码1 494个氨基酸,具有III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶典型的脂激酶特有结构域(LKU)、钙神经传感蛋白(NCS1)结合位点、Hom2结构域和PI3K/PI4K超家族激酶结构域。聚类分析表明,Ps Pik1聚于PI4KIIIβ类群,Ps Pik1与柄锈菌属的Pik1亲缘关系较近,与子囊菌Pik1亲缘关系次之,而与动物及植物的PI4KIIIβ亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果表明,Ps Pik1在接种后6、12、18、24 h呈诱导上调表达趋势,分别为夏孢子时期表达量的2.66、7.04、3.42、2.96倍,其中在12 h其表达水平最高。接种后36 h至5 d,Ps Pik1的表达水平开始下降,一直低于夏孢子表达水平,分别为夏孢子表达量的60%、30%、16%、15%。接种后7—11 d,Ps Pik1的表达量开始升高,在接种后11 d恢复至与夏孢子相当的水平。Ps Pik1基因沉默后的组织学观察分析表明,与接种BSMV:γ:0-as(对照)相比,接种BSMV:γ:Ps Pik1-as植株中条锈菌组织分化与生长发育受到了不同程度的影响,表现在接菌后48 h菌丝长度和分支数目明显减小,接菌后120 h菌落面积明显减小。沉默效率检测结果显示,在接菌后24、48、120 h,接种BSMV:γ:Ps Pik1-as植株Ps Pik1的表达水平分别仅为对照植物的49%、49%、69%,表明Ps Pik1的表达明显地受到抑制。【结论】Ps Pik1可能参与了病菌侵染初期的侵染结构分化及寄生关系的建立,在条锈菌致病过程中发挥重要作用。

磷脂酰肌醇-4-磷酸在神经发育性疾病中的研究进展

磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate,PI4P)是真核细胞中的一类执行多种生理功能的磷脂酰肌醇,在信号传导、膜重塑和运输等重要生物学功能中有着至关重要的作用,进而影响神经发育过程。PI4P动态平衡的维持需要PI4P生物合成、分解及细胞内其他信号分子共同完成。本文综述了PI4P在神经发育性疾病中的研究进展,以期为儿童神经发育性疾病的早期诊断、治疗及其防控提供新的方向。

妊娠合并甲状腺功能减退患者血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4表达水平及与血脂代谢的关系

目的 探讨妊娠合并甲状腺功能减退患者血清白脂素(Asprosin)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(Glypican 4)表达水平及与血脂代谢的关系。方法 选取2019年2月至2021年2月信阳市中医院收治的82例甲状腺功能减退症孕妇为观察组,选取80例同期体检的甲状腺功能正常孕妇为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4水平,比较两组甲状腺功能指标、血脂指标、血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4水平,比较两组妊娠结局。采用Pearson相关性分析血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4与血脂指标、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性。结果 观察组血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4水平均高于NC组(P<0.05);观察组血清促甲状腺激素(TSH)、游离甲状腺激素(FT4)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平均高于NC组,游离三碘甲腺原氨酸(FT3)水平低于NC组(P<0.05);血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4与总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、HOMA-IR水平呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关(P<0.05);观察组妊娠不良结局发生率(24.39%)高于NC组(3.75%)(P<0.05);血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4水平与妊娠不良结局发生率呈正相关(P<0.05)。结论 妊娠合并甲状腺功能减退患者血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4水平升高,血清白脂素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4与血脂、妊娠不良结局呈正相关。

血清胰岛素样生长因子-1和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-4对慢性肾脏病非透析患者预后的早期预测价值

慢性肾脏病是指慢性肾炎、糖尿病等疾病损伤肾脏并引起肾脏结构异常或肾功能下降[1]。临床主要借助肌酐、肾小球滤过率(GFR)、尿蛋白等指标对慢性肾脏病非透析患者的病情进行评估,然而上述指标难以敏感地早期预测预后[2]。因此,积极寻找早期、无创、灵敏的血液学指标对慢性肾脏病非透析患者预后进行早期预测有重要意义。

不同乙型肝炎病毒DNA载量患者磷脂酰肌醇-4-磷酸酶的表达差异及其意义

目的探究不同乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量患者磷脂酰肌醇-4-磷酸酶（P14Kct）的表达差异及其意义。方法收集2013年1月至2015年1月在天门市第一人民医院接受治疗的150例慢性乙型肝炎患者及50例同时期体检健康人群的血清，利用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测所有研究对象血清的HBVDNA载量，并根据患者血清HBVDNA载量分为高病毒载量组（HBVDNA〉1×10^5拷贝／L）、中病毒载量组（HBVDNA1×10^2～1×10^5拷贝／L）及低病毒载量组（HBVDNA〈1×10^2拷贝／L）3组，各50例。另外选择50例健康体检者的血清作为对照组。比较4组血清HBVDNA载量，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）双抗体夹心法对4组外周血清的P14Kα水平进行检测，分析HBVDNA载量与P14Kα表达的相关性。结果高、中、低病毒载量组及对照组HBVDNA载量和血清P14Kα水平分别为（5．6±1．3）拷贝／L、（3．5±0．6）拷贝／L、（1．7±0．5）拷贝／L、（1．1±0．3）拷贝／L和（4．3±0．8）μg／L、（3．4±0．7）μg／L、（2．8±0．7）μg／L、（2．2±0．6）μg／L，各组比较差异有统计学意义（P〈0．01），其中高、中及低病毒载量组HBVDNA载量和血清P14Ka水平显著高于对照组（P〈0．05），高、中病毒载量组显著高于低病毒载量组（P〈0．05），高病毒载量组显著高于中病毒载量组（P〈0．05）。随着血清HBVDNA载量的增加，P14Kα水平也显著升高，两者呈正相关（rs=0．732，P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎患者血清P14Kα的水平随着HBVDNA载量的增加而增加，两者密切相关，提示P14Kα对HBVDNA的复制有重要作用。

慢性乙型肝炎患者血清磷脂酰肌醇-4-磷酸酶的表达与HBV DNA载量的相关性

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清磷脂酰肌醇-4-磷酸酶(PI4KA)表达与HBV载量的关系。方法收集2012年6月-2013年4月在青岛市立医院就诊的180例慢性乙型肝炎患者的血清,利用荧光定量PCR检测其HBV DNA的载量,根据其HBV DNA载量的高低,分为3组,每组60例:高病毒载量组(HBV DNA>1×107拷贝/ml)、中病毒载量组(1×105拷贝/ml≤HBV DNA≤1×107拷贝/ml)及低病毒载量组(HBV DNA<1×105拷贝/ml),同时以60名健康人作对照。采用ELISA法,检测各组外周血清中的PI4KA的浓度。多组间血清HBV DNA定量的比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。PI4KA水平与HBV DNA载量之间的相关性分析采用Spearman检验。结果健康人血清PI4KA的浓度为(2.29±0.75)ng/ml;低、中、高病毒载量组血清PI4KA的浓度分别为(2.73±0.71)、(3.52±0.78)及(4.72±0.77)ng/ml。慢性乙型肝炎患者不同病毒载量组与健康对照组间血清PI4KA的浓度差异有统计学意义(F=119.958,P<0.01),并且不同病毒载量组都显著高于对照组。随着HBV DNA载量的升高,PI4KA的浓度增加,两者呈正相关(r=0.758,P<0.01)。结论慢性乙型肝炎患者血清PI4KA的浓度与HBV DNA载量密切相关,这一结果提示PI4KA可能在HBV DNA的复制中起到重要作用。

人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型重组慢病毒载体的构建及其在人雄激素抵抗型前列腺癌PC3细胞中的表达

目的构建人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)重组慢病毒表达载体,并检测其在人雄激素抵抗型前列腺癌细胞株PC3中的表达。方法以人工合成的人INPP4B基因为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆入pGC-FU载体构建重组质粒pGC-FU-INPP4B,将其与辅助包装原件PHelper 1.0和PHelper 2.0载体经Lipofectamine TM 2000介导共转染293T细胞,包装获得携带人INPP4B基因的重组慢病毒LentiINPP4B,免疫荧光法测定病毒滴度。用Lenti-INPP4B感染PC3细胞(Lenti-INPP4B组),以慢病毒Lenti-GFP(携带GFP基因)感染的PC3细胞为阴性对照,RT-PCR及Western blot检测PC3细胞中INPP4B m RNA水平和蛋白的表达,CCK8法检测PC3细胞增殖;Western blot检测PC3细胞中p-AKT水平。结果经PCR及测序鉴定,重组质粒p GC-FU-INPP4B构建正确;Lenti-INPP4B病毒滴度达2×10-8 TU/mL。与阴性对照组比较,Lenti-INPP4B组PC3细胞中INPP4B m RNA水平显著提高(P<0.05),细胞活力抑制显著(P<0.05),细胞内p-AKT水平降低;INPP4B蛋白在Lenti-INPP4B组细胞中表达,在阴性对照组中未表达。结论成功构建了INPP4B慢病毒表达载体,其在PC3细胞中的表达能显著抑制细胞增殖,可能是通过下调p-AKT水平发挥作用。本文为靶向治疗雄激素抵抗型前列腺癌提供了新思路。

磷脂酰肌醇-4-磷酸酯代谢酶及抑制剂研究进展

目的了解磷脂酰肌醇-4-磷酸酯(PI4P)代谢酶及抑制剂的研究进展,为PI4P信号通路相关靶点药物的研发提供参考。方法对作用于PI4P的6种代谢酶的基本情况、对疾病的影响及典型抑制剂的应用进行总结,并分析现有研究中仍待解决的问题,探讨PI4P代谢酶及抑制剂作为相关疾病治疗靶点的可能性。结果PI4P是一种膜甘油磷脂,由磷脂酰肌醇(PtdIns)4位羟基磷酸化生成;是高尔基体膜的关键功能成分,在囊泡运输和信号传导中不可或缺。尽管对PI4P的生理作用已有深入研究,但对PI4P的代谢调控知之甚少。PI4P代谢酶在肿瘤方面的研究较多,发现磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)高表达与多种肿瘤的恶化有关,目前已有4种PI3K抑制剂作为抗肿瘤药物被批准上市。结论PI4P代谢酶除了能调控肿瘤的进展外,还参与炎症激活、病毒及疟疾感染、阿尔茨海默病等临床常见疾病的发生与发展,但相关研究多停留在基础实验阶段,相关抑制剂可能是治疗上述疾病的有效方法。

生理病理状态下PI4KⅢβ的调控机制

磷脂酰肌醇4激酶是磷脂酰肌醇信号通路的起始和关键分子。其中,Ⅲ型磷脂酰肌醇4-激酶β亚型(PI4KⅢβ)参与合成高尔基体PI4P库,在众多生理过程中发挥重要作用;同时,该酶是介导一些致病性RNA病毒复制的重要宿主因子,也参与了细菌感染以及疟疾等病理过程。研究表明,PI4KⅢβ的功能受众多因素调控,包括宿主和病毒蛋白结合伴侣等。该综述将对PI4KⅢβ的结构及其生理病理调控机制进行探讨。

腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

本文研究了腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。研究结果表明:1、腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有明显的抑制作用,IC_(50)=15μmol/L;动力学分析表明,这种抑制作用机理是与ATP竞争性的;2、腺嘌呤、AMP、ADP、5＇-氯-5＇-脱氧腺苷、阿糖腺苷、2＇-脱氧腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用;3、cAMP对磷脂酰肌醇磷酸化也有抑制作用,这提示了cAMP与肌醇脂质信使系统有联系;5、6-氯-嘌呤核苷(100μmol/L)对该磷酸化无显著抑制作用。

木犀草素通过TLR4/PI3K/AKT通路对子痫前期大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响

目的:探究木犀草素通过Toll样受体4(TLR4)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对子痫前期(PE)大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(40 mg/kg)组、TLR4过表达载体组、TLR4空载组、木犀草素(40 mg/kg)+TLR4过表达载体组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯(LNAME)制备PE模型,以药物分组处理后,测定各组大鼠妊娠晚期平均动脉压及24 h尿蛋白含量,检测各组大鼠平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31(血管标志物)阳性细胞比例、胎盘细胞凋亡比例,血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17水平及胎盘组织凋亡相关蛋白、TLR4/PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、BCL2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、木犀草素+TLR4过表达载体组分别相比,木犀草素组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05),TLR4过表达载体组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,TLR4空载组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:木犀草素可通过下调TLR4/PI3K/AKT通路表达,降低PE大鼠平均动脉压,缓解妊娠后期高血压与蛋白尿症状,抑制炎症,增强胎盘血管生成,减轻胎盘组织损伤及细胞凋亡,提高妊娠大鼠子代存活率。

心肌缺血过程中磷酸肌醇4-激酶变化的研究

目的 观察大鼠心肌缺血后心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性的变化 ,探讨其在心肌缺血过程中的调控机理。方法 建立大鼠体内心肌缺血模型 ,在蛋白水平上分别检测心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在缺血后不同时间 (缺血后 1、8、2 5及 48h)的变化 ,用免疫组织化学方法检测磷酸肌醇 4 激酶蛋白表达水平的变化。结果 (1)心肌细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在心肌缺血后 1h达到最高 ,为对照组的 6 .1倍 ,随着时间的延长 ,其活性逐渐下降 ,48h接近于正常水平 ;免疫组织化学结果显示 :与正常组相比 ,缺血组磷酸肌醇 4 激酶蛋白表达水平明显升高。 (2 )红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在缺血后 1h和 2 5h达到最高 ,随后酶活性开始下降 ,缺血后 48h酶活性水平低于正常水平。结论 心肌缺血早期 (1h)心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性显著提高 ,提示磷酸肌醇 4 激酶参与了心肌缺血后的调节过程 ,其活性升高可能与心肌受损伤程度相关。

TRPV4激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对PI3K/AKT/eNOS通路的影响

【目的】探讨瞬时受体电位香草素受体亚型4(TRPV4)激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及相关机制。【方法】72只大鼠随机分为Sham组、I/R组、4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4α-PDD)组、LY294002组,每组18只。建模前30 min,4α-PDD组尾静脉注射4α-PDD 0.2 mg/kg,LY294002组尾静脉注射4α-PDD 0.2 mg/kg和LY2940020.5 mg/kg,Sham组、I/R组尾静脉注射等体积生理盐水,均为一次性给药。I/R后24 h检测大鼠神经功能和脑梗死体积;检测离体脑基底动脉(CBA)舒张功能;免疫印迹法检测脑组织蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p-eNOS蛋白表达。【结果】与I/R组比较,4α-PDD组神经功能评分降低,脑梗死体积减小(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组神经功能评分升高,脑梗死体积增大(P<0.05)。与Sham组比较,I/R组CBA舒张率增加(P<0.05);与I/R组比较,4α-PDD组CBA舒张率增加(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组CBA舒张率降低(P<0.05)。HE染色结果显示,Sham组海马神经元核仁清晰、着色均匀、染色质少,排列整齐、胞体表现为椭圆形或圆形;I/R组神经元大量变形、坏死,胞核浓缩、固染,排列杂乱;4α-PDD组、LY294002组神经元数量较I/R组增加,坏死程度改善,其中4α-PDD组改善程度优于LY294002组。与Sham组比较,I/R组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与I/R组比较,4α-PDD组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS降低(P<0.05)。【结论】TRPV4激动剂可改善脑I/R大鼠神经功能及海马区病理变化,促进CBA舒张,减小脑梗死体积,其可能通过激活PI3K/AKT/eNOS通路来实现。

血浆磷脂酰肌醇蛋白聚糖4水平对肺炎合并急性呼吸窘迫综合征儿童的影响分析

分析血浆磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(Glypican-4)水平给肺炎合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿带来的影响。方法 纳入2018-2021年我院收治的46例肺炎伴ARDS患儿为肺炎+ARDS组,纳入同期46例肺炎患儿为肺炎组,纳入同期46例健康体检儿童为对照组,对肺炎+ARDS组与肺炎组患儿进行小儿危重病例评分;三组受试者Glypican-4水平仪酶联免疫吸附法(ELISA)测定;血浆Glypican-4对肺炎伴ARDS患儿的预后预测价值评定结合受试者工作特征曲线,预后相关因素以多因素Cox风险回归模型进行分析。结果 以肺炎组、对照组为参照,肺炎+ARDS组患儿的心率、肺炎病史、28d病死率以及血浆Glypican-4水平均更高,各组间差异显著(P<0.05);与肺炎组患儿相比,肺炎+ARDS组患儿的危重病例评分更低,差异显著(P<0.05);以肺炎+ARDS组患儿28d后的预后情况为依据,分为存活组(37例)与死亡组(9例),存活组患儿的血浆Glypican-4水平为(3.93±0.32)μg/L,死亡组患儿的血浆Glypican-4水平为(4.79±0.36)μg/L,死亡组显著更高(P<0.05);结合ROC曲线分析结果,儿童肺炎伴ARDS的预后以血浆Glypican-4水平进行预测的ROC曲线下面积为0.93,灵敏度为94.20%、特异度为88.30%、截断值为4.12μg/L。结合多因素Cox分析,影响肺炎伴ARDS患儿预后的危险因素包括:血浆Glypican-4高表达、高频心率以及肺炎史(P<0.05)。结论 血浆Glypican-4水平在肺炎伴ARDS患儿中显著较高,且是影响患儿预后的关键性因素,可指导临床预测肺炎伴ARDS患儿的预后效果,临床应用价值较高。

过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制

目的:探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将携带INPP4B的重组质粒载体p EAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系(Flag-INPP4B组),同时设立未处理组为对照(Mock组)。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2(Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2)以及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)下游信号分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和血清糖皮质激素调节激酶-3(serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3)蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内PI(3,4)P2和PI(3)P的水平。结果:INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升(mRNA:t=9.724,P=0.000;蛋白:t=19.520,P=0.000),提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强(F=31.870,P=0.000)。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率(t=6.999,P=0.002);使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降(t=24.710,P=0.000)、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加(t=6.398,P=0.003)。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平(t=10.470,P=0.000),而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响(t=0.285,P=0.790)。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI(3,4)P2的水平(t=4.515,P=0.011),同时明显升高PI(3)P的水平(t=5.681,P=0.005)。结论:本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。

酰基辅酶A结合结构域蛋白3在病原微生物复制中的作用

病毒及细菌等病原微生物侵入细胞后,复制过程离不开宿主细胞内的宿主蛋白.近年来研究表明,酰基辅酶A结合结构域蛋白3(ACBD3)可以与一些病原体的蛋白质相互作用,影响病原体微生物在宿主细胞的复制.本文通过总结爱知病毒、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、丙肝病毒、人类鼻病毒以及沙门氏菌侵染宿主细胞时,病毒蛋白质与ACBD3及磷脂酰肌醇4-激酶B(PI4KB)相互作用的研究进展,探讨ACBD3在病原微生物中的作用.

INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探讨磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)调控蛋白激酶B(Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹分别测定胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中INPP4B表达变化。INPP4B过表达慢病毒感染HGC-27细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白、p-Akt蛋白表达。Akt信号激活剂处理感染INPP4B过表达慢病毒的HGC-27细胞,检测细胞增殖、凋亡和Bax、Bcl-2、p-Akt蛋白表达变化。结果胃癌细胞中INPP4B mRNA和蛋白水平均明显低于正常胃黏膜细胞。INPP4B过表达慢病毒感染后的HGC-27细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率明显升高,细胞中Bax蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,p-Akt蛋白表达水平明显降低。Akt信号激活剂可以提高INPP4B过表达慢病毒感染的HGC-27细胞增殖能力,明显减少细胞凋亡,明显减少细胞中Bax蛋白表达,明显促进细胞中Bcl-2、p-Akt蛋白表达。结论INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡。

2型糖尿病患者血清磷脂酰肌醇蛋白酶4与胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的关系

改善胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要治疗目标之一。噻唑烷二酮类药物因其心血管疾病潜在风险，在临床上的使用范围受限。因此，开发更多的胰岛素增敏药物靶位对于2型糖尿病的治疗具有积极意义。磷脂酰肌醇蛋白酶（GPC）家族是通过糖基磷脂酰肌醇锚连接到质膜外表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族。

钠-葡萄糖共同转运体2抑制剂对2型糖尿病患者胰岛素敏感性及血清GPC-4的影响

目的 :探讨达格列净对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者胰岛素敏感性及血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖-4(glypican-4,GPC-4)的影响。方法:80例T2DM患者采用达格列净治疗12周,观察血糖、血脂、胰岛素敏感性及血清GPC-4水平的变化。以40例健康人作为正常对照。结果:T2DM组(5.05±0.98)的血清GPC-4水平低于正常对照组(6.42±0.51)(P=0.000),T2DM组经达格列净治疗后血糖(P=0.000)、HbA1c(P=0.000)和HOMA-IR(P=0.000)均降低,而GPC-4水平升高(P=0.000)。在T2DM组,HbA1c(β=-0.608,P=0.000)和1/HOMA-IR(β=-2.566,P=0.003)均是血清GPC-4的独立影响因子,但治疗前后GPC-4的升高程度与HbA1c降低程度正相关(r=0.397,P=0.002),与HOMA-IR的变化无关(r=-0.062,P=0.539)。结论:达格列净具有降糖、改善胰岛素敏感性和升高循环GPC-4水平的作用,但其对血清GPC-4的影响可能与降糖有关,与其改善胰岛素敏感性的作用无关。

非酒精性脂肪肝患者血清Asprosin、Glypican 4表达水平及临床意义

目的检测非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清白脂素(Asprosin)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC-4)表达水平并探讨其临床意义。方法选取2018年10月至2020年10月延安市人民医院收治并确诊的98例NAFLD患者为研究对象,根据疾病严重程度不同分为轻度组(42例)、中度组(31例)和重度组(25例),另选取同时期来我院体检的30例健康人群作为对照组。检测并比较各组受检者的血清Asprosin、Glypican 4水平和血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平。采用Pearson相关分析探讨Asprosin、Glypican 4与各项指标的相关性,同时采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清Asprosin、Glypican 4及两者联合诊断NAFLD的价值。结果重度组、中度组、轻度组患者的血清Asprosin表达水平分别为(2.68±0.74)ng/mL、(1.94±0.65)ng/mL、(1.56±0.54)ng/mL,明显高于对照组的(1.07±0.23)ng/mL,且血清Asprosin表达水平随着疾病严重程度的加重而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);重度组、中度组、轻度组患者的血清Glypican 4表达水平分别为(3.86±0.85)μg/L、(2.97±0.46)μg/L、(2.62±0.43)μg/L,明显高于对照组的(2.21±0.41)μg/L,且血清Glypican 4表达水平随着疾病严重程度的加重而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);轻度组、中度组、重度组患者的血清AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR表达水平明显高于对照组,且随着疾病严重程度的加重而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关分析结果显示,血清Asprosin、Glypican 4均与BMI、FBG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),血清Asprosin、Glypican 4均与AST、ALT无关(P>0.05);经ROC曲线分析结果显示,血清Asprosin、Glypican 4诊断NAFLD的AUC(95%CI)分别为0.856(0.805~0.907)、0.841(0.791~0.893),截点值分别为1.82 ng/m L、3.71μg/L,敏感度分别为79.62%、78.93%,特异度分别为85.65%、86.18%;Asprosin、Glypican 4两者联合检测诊断NAFLD的AUC(95%CI)为0.894(0.845~0.963),敏感度为85.16%,特异度为80.53%。结论NAFLD患者血清Asprosin、Glypican 4水平均升高,且与疾病的严重程度有关,两者对辅助诊断NAFLD具有一定的临床价值。