磷脂酶Cδ3在大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤中的作用研究

目的观察骨骼肌缺血再灌注后大鼠血清炎性指标改变及磷脂酶Cδ3(PLCδ3)表达水平变化,探究磷脂酶Cδ3在骨骼肌缺血再灌注中的作用。方法以120只大鼠为研究对象,随机分为4组建立骨骼肌缺血再灌注模型(对照2小时组,对照4小时组,缺血2小时组,缺血4小时组),每组各30只大鼠,在大鼠缺血再灌注1天、3天和7天后分别检测各组大鼠血清IL-6、IL-1β含量水平及骨骼肌中PLCδ3表达水平。结果缺血再灌注大鼠血清中的炎性指标显著增加,同时缺血4小时组大鼠再灌注1天、3天和7天后血清中IL-6和IL-1β含量均显著高于缺血2小时组水平(P<0.05),而PLCδ3表达水平低于缺血再灌注2小时组。结论PLCδ3表达水平在一定范围内与骨骼肌损伤水平趋势相同,有望成为新的缺血再灌注损伤治疗靶点。

miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

背景:目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的:探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法:选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组,通过Real-time PCR法检测PLCD3和miR-34a-5p表达的关系;通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响;使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平;使用ELISA法检测炎症因子的表达。结果与结论:①PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标,同时PLCD3和miR-34a-5p表达水平呈负相关。②PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移,而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移;miR-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高,而PLCD3过表达则表现出相反趋势。③PLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达,而miR-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明,miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。

骨关节炎滑膜中PLCD3 mRNA的表达情况及其与免疫细胞浸润的关系

目的探究骨关节炎(OA)滑膜中磷脂酶Cδ3(PLCD3)mRNA的表达情况及其与免疫细胞浸润的关系。方法基于前期发现的OA差异表达基因,通过收集临床OA组和对照组的滑膜组织,检测相关差异表达基因PLCD3 mRNA的表达差异,并采用CIBERSORT算法分析免疫细胞在OA组及对照组中的浸润模式,并进一步对PLCD3与浸润性免疫细胞的相关性进行分析。结果相较于对照组,PLCD3 mRNA相对表达水平在OA组滑膜组织中明显升高(P<0.05),OA滑膜组织中幼稚B细胞、活化NK细胞、M2巨噬细胞和活化肥大细胞的比例相对较高(P<0.05),PLCD3与这4种免疫细胞比例呈正相关(P<0.05)。结论PLCD3可能是诊断OA的关键生物标志物,其可能通过与浸润性免疫细胞的相互作用参与了OA的发病过程。