“环境-遗传-基因互作”模式中磷脂酶Cε1对食管癌易感性的影响

随着全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)和后GWAS研究的深入,越来越多的疾病相关单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)被发现。近年的研究[1-3]提示,部分疾病相关SNP可导致其所在基因以及相关基因转录和蛋白表达水平发生变化,进一步影响肿瘤的发生和发展,甚至影响肿瘤的转归(预后),这些发现极大丰富了“环境-遗传-基因互作”模式对肿瘤发生、发展和转归影响的新理论;这些SNP可分为增加疾病易感性的SNP和致病性SNP两大类。推测致病性SNP不但影响相关基因的转录和蛋白表达,并且也可能影响驱动基因突变。

磷脂酶Cε1在1型糖尿病大鼠病理性神经痛中的作用初探

目的观察糖尿病病理性神经痛(DNP)大鼠脊髓磷脂酶Cε1(PLCE1)表达变化及RhoA抑制剂C3胞外酶对其活性影响,阐明PLCE1在DNP发生中的作用。方法24只8周龄、健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=6):正常对照组(C组),单纯RhoA抑制剂组(E组),1型糖尿病DNP模型组(DNP组)和RhoA抑制剂干预组(EG组);静脉注射1%链脲佐菌素(STZ 65 mg/kg)用于建立1型糖尿病DNP大鼠模型。对E组和EG组大鼠进行每天1次为期1周的RhoA抑制剂C3胞外酶(10 pg/10μL)鞘内注射治疗;C组和DNP组在相应时间点鞘内给予同等容积的溶剂;应用葡萄糖测定仪测定空腹血糖浓度(mmol/L);采用von Frey细丝法和冷热板测痛仪测定大鼠后爪机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL)作为痛阈观察指标;Westernblot检测脊髓活化RhoA蛋白(RhoA-GTP)、总RhoA蛋白和PLCE1蛋白表达,用脊髓PLCE1蛋白表达水平和RhoA-GTP/总RhoA比值分别评价PLCE1和RhoA活性。ELISA检测脊髓TNF-α和IL-6含量以评价炎症反应。结果单纯应用RhoA抑制剂C3胞外酶对非DNP大鼠各项检测指标无明显影响;1型糖尿病DNP大鼠脊髓组织RhoA和PLCE1活性均显著增加(P<0.05),TNF-α和IL-6含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05),TWL及MWT显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);C3胞外酶治疗在显著抑制1型糖尿病DNP大鼠脊髓组织RhoA表达(P<0.05)的同时,伴有脊髓PLCE1活性的显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)、炎症因子TNF-α和IL-6生成的明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),并显著缓解1型糖尿病DNP大鼠的机械痛敏和热痛敏。结论PLCE1在1型糖尿病大鼠DNP中发挥重要作用,其活性受RhoA调控。

磷脂酶Cε1蛋白在不同部位胃癌细胞中的表达

目的:观察磷脂酶Cε1(PLCE1)在不同部位胃癌组织中的表达,探讨PLCE1在不同部位胃癌组织中的表达情况及PLCE1与胃癌生物学特征的关系。方法:采用免疫组化sp法测定60例贲门部胃癌组织(贲门癌)、60例胃窦部胃癌(胃窦癌)组织和30例正常胃粘膜组织中PLCE1的表达情况。结果:PLCE1在贲门癌组织中阳性表达率为73.3%,高于在胃窦癌组织中的表达率51.7%,高于在正常胃粘膜组织的表达率16.7%;PLCE1在胃窦癌组织中的表达率高于正常胃粘膜组织中的表达率。贲门癌与胃窦癌组织PLCE1的表达与淋巴结转移、原发肿瘤侵润深度及分化程度均有关(P<0.05),与性别、年龄均无关(P>0.05)。结论:PLCE1在贲门癌与胃窦癌的表达率不同,其表达率在不同病理分期中存在差异。

胃腺癌中磷脂酶Cε1和基质金属蛋白酶-9表达及相关性

目的检测胃腺癌中磷脂酶Cε(PLCE)1和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达特征,分析其意义。方法经病理医师确诊为胃腺癌患者57例为观察组,正常胃黏膜组织18例为对照组,均留取完整的临床资料及术后蜡块组织。采用免疫组化方法检测两组中PLCE1和MMP-9的表达。结果观察组PLCE1和MMP-9阳性率明显高于对照组,观察组中PLCE1和MMP-9表达与肿瘤脉管累犯和淋巴结转移密切相关,PLCE1表达与肿瘤细胞增殖有关。二者均与肿瘤性别、年龄无明显相关性。相关分析显示观察组中PLCE1和MMP-9无明显相关性。结论胃腺癌中PLCE1和MMP-9高表达对肿瘤形成和进展有一定促进作用,二者可能通过各自途径起作用。

胰腺癌中磷脂酶Cε1和B淋巴细胞瘤-2表达的研究

目的获取胰腺癌组织,检测并探究PLCε1和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)在其中的表达及与胰腺癌临床资料的关系。方法收集中南大学湘雅医院胰腺癌患者(2013年1月至2016年12月确诊)病理石蜡标本69份。另取11个正常的胰腺组织作为对照。应用免疫组织化学的方法,检测所得标本组织中PLCε1和Bcl-2的染色情况。所得数据按临床资料进行分组并分析其相关意义。结果PLCε1和Bcl-2在胰腺癌组织中表达高于正常组织(P<0.05)。肿瘤组中PLCε1和Bcl-2的阳性表达强度在肿瘤大小组之间(P<0.05)和淋巴结转移组之间差异存在统计学意义(P<0.05)。PLCε1与Bcl-2的表达强度呈正相关(相关系数r=0.639,P<0.05)。结论PLCε1可能与胰腺癌的发生、发展有关;PLCε1和Bcl-2可能在某些信号通路中扮演重要角色,对胰腺癌内信号通路的调节发挥一定的作用。

磷脂酶Cε1在胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系

目的探讨磷脂酶Cε1（PLCε1）在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法收集浙江省人民医院2005年1月至2007年12月间125例胃癌手术标本及其癌旁胃黏膜组织，应用免疫组织化学染色方法检测PLCε1在胃癌及癌旁组织中的表达，并通过实时荧光定量PCR检测其中41例胃癌及其癌旁组织中PLCε1mRNA表达水平。分析PLCε1蛋白表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。结果PLCε1蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为53．6％（67／125）和24．0％（30／125），差异有统计学意义（P〈0．01）；在65．9％（27／41）的胃癌组织中PCLε1mRNA表达水平较癌旁胃黏膜上调2倍以上。PLCε1蛋白表达与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关（均P〈0．01）。PLCε1阴性与阳性表达者5年总体生存率分别为54．O％和31．2％，差异有统计学意义（P〈0．01）；但多因素分析显示，PLCε1表达并不是影响胃癌患者预后的独立因素（P〉0．05）。结论PLCε1在胃癌组织中高表达，且与胃癌的恶性生物学行为相关。

原发性肝细胞癌组织中磷脂酶CE1和基质金属蛋白酶-14的表达及意义

目的检测原发性肝细胞癌组织中磷脂酶Cε(PLCE)1和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达,关注其相关性。方法以61例原发性肝细胞癌的临床资料及术后新鲜组织为观察组,以18例距肿物边缘>5 cm的正常肝组织新鲜组织为对照组,应用流式细胞术检测两组PLCE1和MMP-14表达。结果两组中PLCE1和MMP-14表达量差异有统计学意义(P<0.001),观察组PLCE1和MMP-14表达量与病变脉管累犯和肿瘤最大径密切相关,PLCE1表达与肿瘤增殖指数和炎细胞浸润程度密切相关。相关分析显示观察组PLCE1和MMP-14表达呈正相关。结论 PLCE1和MMP-14在原发性肝细胞癌术后组织中表达明显升高,且具有协同正向作用,对肿瘤形成和发展有一定调节作用。

微小RNA-145调控磷脂酶Cε1抑制食管鳞癌的研究

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-145调控食管鳞癌（ESCC）细胞增殖与侵袭的分子机制。方法实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）检测miR-145和磷脂酶Csl（PLCEl）mRNA表达；Westernblot检测PLCEl蛋白水平；Targetscan软件预测PLCEl是否为miR-145的靶基因；荧光素酶报告基因检测miR-145是否作用于PLCElmRNA的3’端非编码区域（3’UTR）；噻唑蓝（MTT）和划痕实验检测细胞增殖和侵袭能力。结果4种ESCC细胞miR一145相对表达量分别为0．63±0．06、0．72±0．05、0．55±0．05、0．79±0．04，均明显低于正常食管上皮细胞（P=0．000，P=0．00l，P=0．000，P=0．003）。ESCC组织中miR-145相对表达量为0．68±0．03，较正常组织降低31．9％（P=0．000）。miR-145低表达与肿瘤浸润深度及TNM分期相关（x2=8．380，P=0．039；X2=6．810，P=0．033）。Targetscan预测PLCE1是miR-145的靶基因；荧光素酶报告基因证实miR-145作用于PLCElmRNA的3’UTR。ESCC细胞中PLCE1相对表达量分别为1．69±0．04、1．46±0．06、1。31±0．06、1．60±0．08，均明显高于正常食管上皮细胞（P=0．000，P=0．000，P=0．004，P=0．001）。ESCC组织中PLCEl相对表达量为1．85±0．04，为癌旁正常组织的1．85倍（P=0．000）。PLCEl表达水平与miR-145表达水平负相关（r=-0．828，P=0．002）。过表达miR-145抑制Ecal09增殖（P=0．006），侵袭能力降低22．1％（P=0．013）；过表达PLCE1促进增殖（P=0．003），侵袭能力增强24．9％（P=0．029）；而同时过表达miR-145与PLCE1则可抑制PLCE1的促增殖（P=0．003）和侵袭能力（P=0．001）。结论miR-145通过靶向调控PLCE1抑制ESCC细胞增殖和侵袭。

磷脂酶Cε1对鼻黏膜Th2细胞极化的促进作用研究

变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）是特异性个体接触到致敏原后由IgE介导的以炎症递质释放为开端的、有许多免疫活性细胞、促炎细胞及细胞因子等参与的鼻腔黏膜的慢性炎症反应性疾病,是一个相当复杂的网络结构。体外环境因素作用于特异性个体导致机体Th1和Th2细胞间免疫反应失衡是AR的免疫学基础,尤其是Th2型细胞因子的异常高表达在其发病过程中发挥着重要作用〔1-2〕。

PLCE1基因对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨干扰磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCE1)基因对胃癌细胞侵袭转移的影响及相关机制。方法采用免疫组化SP法检测63例胃癌组织中PLCE1的表达,分析PLCE1表达与胃癌临床病理特征的关系;将胃癌SGC7901细胞株随机分为SiPLCE1组和对照组,分别转染PLCE1基因干扰慢病毒和阴性对照空载体慢病毒,采用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭迁移能力;采用qPCR和Western blot法检测细胞PLCE1 mRNA和蛋白表达情况;采用Western blot法检测细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)以及PKC/ERK信号通路蛋白的表达情况。结果PLCE1高表达组胃癌患者的淋巴结转移率为37.93%、远处转移率为20.69%、Ⅲ~Ⅳ期患者占41.38%,均高于PLCE1低表达组(P<0.05)。细胞实验结果显示,Sh-PLCE1组24 h细胞迁移距离为(36.81±2.77)μm,细胞迁移数为(291.15±20.47)个,细胞侵袭数为(142.94±19.05)个,均明显低于对照组和ShRNA-NC组(P<0.05),PLCE1 mRNA和蛋白表达、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平均低于对照组和ShRNA-NC组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平高于对照组和ShRNA-NC组(P<0.05);Sh-PLCE1组PKCα、p-ERK/ERK蛋白表达水平均低于对照组和ShRNA-NC组(P<0.05)。结论PLCE1高表达可能与胃癌淋巴结转移、远处转移相关,抑制PLCE1基因可降低胃癌SGC7901细胞侵袭、迁移能力,其作用机制可能是通过抑制PKC/ERK信号通路进而抑制EMT。

PLCE1调控p53诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)基因抑制食管癌细胞凋亡的作用机制。方法选用人食管癌细胞株OE33和CPC作为研究对象。采用qRT-PCR、Western blot法分别检测转染PLCE1 siRNA前、后食管癌细胞OE33和CP-C中PLCE1、p53 mRNA和蛋白水平的表达;甲基化特异性PCR重亚硫酸盐法检测p53启动子区甲基化状态;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果食管癌细胞株OE33和CP-C均高表达PLCE1,抑制PLCE1表达后食管癌细胞CP-C中p53表达上调并促进p53去甲基化,细胞凋亡明显增加。结论 PLCE1通过促进p53启动子区甲基化抑制p53的表达,从而抑制食管癌细胞凋亡。

PLCE1通过调控p53抑制肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)抑制肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法:选用人肺腺癌细胞株A549作为研究对象。采用real-time PCR和Western blotting法分别检测PLCE1抑制剂U-73122处理前、后肺腺癌细胞株A549中PLCE1和p53 mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:肺腺癌细胞株A549高表达PLCE1,低表达p53;抑制PLCE1表达后A549细胞中p53表达上调,细胞凋亡明显增加。结论:PLCE1通过抑制肺腺癌A549细胞株中p53的表达,从而抑制A549细胞凋亡。

PLCE1基因与胃癌发生的相关性研究进展

PLCE1是新发现的磷脂酶C家族的成员之一,受GTP酶和G蛋白的双向调节,研究发现其对肿瘤的发生、发展有着不可忽视的作用,已经成为肿瘤研究的一个切入点。PLCE1基因与胃癌的相关性研究,不仅对于阐明PLCE1在胃癌发生的分子机制有着重要意义,还将为胃癌高危人群的筛查及分子生物学治疗提供新的突破口。胃癌的发病机制涉及环境和遗传等多种因素,本文就PLCE1基因结构与功能,以及目前报道的PLCE1多态性与胃癌相关性文献作一综述。

PLCE1蛋白在食管鳞状细胞癌及正常食管鳞状上皮中的表达情况及意义

目的研究磷脂酶Cε1(PLCE1)蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)及非肿瘤食管组织中的表达情况,探讨其与ESCC发病机制的关系。方法收集潮州市中心医院病理科存档的ESCC患者手术切除标本及非肿瘤患者内镜活检食管组织的蜡块。采用免疫组织化学染色PV-9000二步法(非生物素)检测非肿瘤患者食管正常鳞状上皮标本49例(A组)、肿瘤患者癌旁正常鳞状上皮标本73例(B组)和ESCC标本113例(C组)。结果 PLCE1蛋白在A组的表达水平明显高于C组和B组(P<0.05),且呈递减趋势。B组与C组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PLCE1蛋白在A、B、C组中的表达差异,提示它可能参与ESCC发生,且其在正常食管鳞状上皮中的表达高于ESCC组织,提示其低表达在ESCC的发生过程中可能起到促进作用。

PLCE1基因突变与激素耐药性肾病综合征的关系

磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)基因定位于常染色体10q23.32-q24.1,其编码蛋白为磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCε1)。PLCε1蛋白是最新发现的一种磷脂酶C(phospholipase C,PLC)同工酶,在成熟的肾小球足细胞表达,参与肾小球毛细血管袢的形成和正常发育。近来发现PLCE1基因突变可以引起常染色体隐性遗传性肾病综合征。PLCE1基因移码或无义突变可导致婴儿早发性肾病综合征,其病理特征为弥漫性肾小球硬化(diffuse mesangial sclerosis,DMS);而错义突变可导致局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glo-merulosclerosis,FSGS)。但其确切发病情况及机制目前尚不清楚,本文就PLCE1基因及其编码蛋白与激素耐药性肾病综合征之间的关系作一简要综述。

PLCE1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测PLCE1在83例OSCC组织和20例正常口腔黏膜组织中的表达,并分析PLCE1表达与OSCC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox风险比例回归模型分析影响OSCC患者预后的独立因素。结果:PLCE1在OSCC组织与口腔正常黏膜组织中高表达率分别为53.01%和15.00%,差异有统计学意义(P=0.002)。PLCE1的表达与患者年龄、性别、吸烟无相关性,而与肿瘤分化程度、T分期、临床分期、N分期有密切关系。单变量分析显示临床分期、PLCE1、T分期、N分期是影响OSCC预后的因素,双变量分析显示PLCE1是其独立预后因素。结论:PLCE1过表达与OSCC的发生、发展密切相关,可作为判断OSCC恶性程度和不良预后的参考指标。

GSTP1和PLCE1基因多态性与原发性食管癌的相关性研究

目的研究谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)和磷脂酶Cε1(PLCE1)基因多态性对原发性食管癌易感性的影响及其与环境因素的交互作用。方法选取原发性食管癌患者和健康人群各162例为样本,采集性别、年龄、烟酒史和食管癌家族史等信息,并检测其GSTP1基因A105G位点和PLCE1基因rs3765524、rs2274223、rs3781264位点的单核苷酸多态性,建立Logistic回归模型,分析食管癌风险因素及各因素的交互作用。结果食管癌组吸烟史、食管癌家族史和热烫饮食人群占比高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);条件Logistic回归分析显示吸烟、食管癌家族史和PLCE1 rs2274223 GG基因型为食管癌的风险因素(P<0.05),GSTP1 A105G AG/GG基因型是食管癌的保护因素(P<0.05);两因素交互模型中GSTP1 A105G AA和PLCE1 rs2274223 GG基因型均与吸烟具有交互作用,食管癌患病风险分别升高83.6%和85.7%(P<0.05);GSTP1 A105G AA基因型、PLCE1 rs2274223 GG基因型和吸烟为最佳三因素交互模型,食管癌患病风险可升高244.0%(P<0.05);四因素交互模型分析显示同时存在GSTP1 A105G AA基因型、PLCE1 rs2274223 GG基因型、吸烟和食管癌家族史的人群食管癌患病风险可升高264.4%(P<0.05)。结论GSTP1基因A105G位点AG和GG基因型为食管癌保护因素,PLCE1基因rs2274223位点GG基因型为食管癌风险因素,且均可与吸烟产生交互作用,对食管癌易感性造成影响。

PLCE1与肺腺癌A549细胞凋亡的相关性及机制研究

目的探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)表达与肺腺癌A549细胞凋亡的关系及作用机制。方法将肺腺癌细胞株A549分为空白组(仅给予正常培养液)、实验A组(正常培养液+5mmol/L PLCE1抑制剂U73122共培养)、实验B组(正常培养液+10mmol/L PLCE1抑制剂U73122共培养),观察各组,采用流式细胞仪技术检测培养12h、24h及48h时刻A549细胞的凋亡率,采用RT-PCR及Western-blot技术检测各组共培养48h后的PLCE1、p53、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达水平。结果在培养12h、24h、48h后,实验A组、实验B组的肺腺癌A549细胞凋亡率显著高于空白组(P<0.05);实验B组的肺腺癌A549细胞凋亡率显著高于实验A组(P<0.05);在培养48h后,实验A组、实验B组的p53、Bax mRNA及蛋白水平显著高于空白组(P<0.05),实验A组、实验B组的Bcl-2、PLCE1 mRNA及蛋白水平显著低于空白组(P<0.05);在培养48h后,实验B组的p53、Bax mRNA及蛋白水平显著高于实验A组(P<0.05),实验B组的Bcl-2、PLCE1 mRNA水平显著低于实验A组(P<0.05)。结论通过抑制肺腺癌A549细胞PLCE1的表达,进而抑制上调细胞中p53、Bax表达,下调Bcl-2表达,从而达到促进肺腺癌A549细胞凋亡的目的。

鼻用糖皮质激素对变应性鼻炎鼻黏膜中PLCε1表达的影响及意义

目的通过检测磷脂酶Cε1（PLCε1）在变应性鼻炎（AR）患者鼻黏膜中的表达水平,探讨鼻用糖皮质激素治疗AR的作用机制及意义。方法选取2013年7月至2014年12月AR患者55例,其中25例术前2周使用鼻用糖皮质激素治疗（鼻用激素组）,30例患者鼻腔局部及全身未使用激素治疗（对照组）,采用免疫组织化学法对两组患者鼻黏膜PLCε1的表达进行检测,分析鼻腔局部用糖皮质激素对PLCε1表达的影响。结果 AR患者鼻黏膜组织重塑,主要表现为黏膜纤毛上皮损伤（纤毛脱落和部分上皮细胞剥脱）;细胞外基质沉积,黏膜下腺体增生、新生血管等改变。对照组中PLCε1强阳性8例,阳性17例,弱阳性3例,阴性2例,PLCε1高表达率为83.3%（25/30）;鼻用激素组PLCε1强阳性2例,阳性4例,弱阳性10例,阴性9例,PLCε1高表达率为24.0%（6/25）。鼻用激素组鼻黏膜PLCε1的阳性表达率较对照组明显降低,两组比较差异有统计学意义（χ^2=19.519,P〈0.01）。结论AR术前鼻腔局部应用糖皮质激素后鼻黏膜PLCε1表达明显下调,提示糖皮质激素抑制了PLCε1的表达,进而可能恢复AR的免疫平衡状态,达到治疗目的。