磷脂酶C-γ_2对鼠成纤维细胞株迁移能力的影响

通过对敲除磷脂酶 C-γ1 基因的鼠成纤维细胞株及其转染磷脂酶 C-γ2 基因后的迁移指标的统计学分析 ,揭示出磷脂酶 C-γ1 和γ2 在 PDGF引起的细胞迁移信号传导中均有正调控作用 ,前者作用显著而后者作用微小 ,并且仅在磷脂酶 C-γ1 功能缺失的条件下方可发挥出来 ;同时进一步证明敲除磷脂酶 C-γ1 基因的细胞株中 ,未见出现磷脂酶 C-γ2 的代偿 ,说明磷脂酶 C-γ2 与 γ1 在功能上不可相互取代 ,反映了一种信号可由多种途径传导即细胞信号传导的交互性。

磷脂酶C-γ_2在鼠成纤维细胞株克隆形成中的作用

通过对敲除磷脂酶 C-γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶 C-γ2 基因后克隆形成能力的统计学分析揭示出磷脂酶 C-γ2 有显著的促克隆形成作用 ,磷脂酶 C-γ1作用微小 ,但与磷脂酶 C-γ2 有协同作用 ,提示磷脂酶C-γ2 与 γ1在功能上有一定的交互性、冗余性 ,但不可相互取代 .

磷脂酶C-γ1和γ2对成纤维细胞生长及增殖的影响

目的 观察磷脂酶C-γ1和γ2基因在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的成纤维细胞生长和增殖信号转导中的作用。方法 测定PDGF刺激后，敲除磷脂酶C-γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C-γ2基因后的生长和增殖能力，并对数据进行统计学分析。结果 磷脂酶C-γ1和γ2在PDGF引起的细胞生长、增殖信号转导中均有正调控作用，并不是必需的因素，两者有协同作用，但各自的作用力度和时期不同，γ1作用显著，γ2作用较弱且较晚；磷脂酶C-γ1对DNA合成和细胞周期进程有重要影响，缺失时，细胞G1和S期缩短，DNA合成能力增强；γ2对DNA合成无显著影响，但在野生型成纤维细胞中表达时，可使S期提前并相对延长。结论 在成纤维细胞中，磷脂酶C-γ1和γ2对细胞生长和增殖的影响各不相同，有相同处，起不同程度的协同作用；又有不同处，不能相互取代。

磷脂酶C-γ1在人胚胎脊髓中的表达变化

为了了解磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)的发育表达变化特点,本研究采用免疫组织化学方法检测不同发育时期的人胚胎脊髓中PLC-γ1的表达及变化。结果显示:PLC-γ1在人胚胎脊髓3周到7个月的整个发育过程中均有表达,在发育早期阳性反应可见于神经管内、外界膜,随着套层、边缘层的形成,神经上皮层、套层中均可见到PLC-γ1阳性反应物,且翼板阳性细胞较基板密集;套层阳性细胞在8、9周时达到高峰,随后开始逐渐减少。3个月时边缘层出现散在的阳性细胞,并随着脊髓的发育而逐渐增多。以上结果提示,PLC-γ1及其与PLC-γ1相关的细胞信号通路对人胚胎脊髓的发育可能发挥了重要的生物学作用。

磷脂酶C-γ1对乳腺癌细胞增殖、粘附及迁移的作用

目的探讨磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对乳腺癌细胞生长、粘附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生的分子机制。方法在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中加入PLC-γ1抑制剂(U-73122),用MTT试验、划痕试验、细胞粘附及趋化运动试验检测细胞生物学行为的变化,western blot检测抑制PLC-γ1后的信号传导通路中整合素β1和PKCζ分子磷酸化激活的情况。结果 PLC-γ1被U-73122抑制后MDA-MB-231细胞的增殖、粘附和迁移运动能力下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。western blot结果表明,细胞粘附相关整合素β1的磷酸化激活水平降低;趋化运动相关PKCζ磷酸化水平降低。结论 PLC-γ1参与调控乳腺癌细胞增殖、粘附和迁移运动,可能是乳腺癌分子诊断和靶向治疗的有效靶点。

磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎组织表达的免疫细胞化学研究

目的研究磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎各组织的表达及规律。方法制备小鼠胚胎标本,进行石蜡包埋并切片,采用免疫细胞化学方法检测磷脂酶C-γ1的表达。结果各种胚胎组织中软骨、骨骼肌、心肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑等均有不同程度的表达。结论磷脂酶C-γ1相关的信号通路对于小鼠胚胎细胞(软骨、骨骼肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑神经元等)的发育可能具有重要的生物学意义。

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行PLC-γ1水平检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:在加载牵张应变初期,细胞内的PLC-γ1水平维持较低水平;随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内的PLC-γ1水平逐渐升高。50min时,PLC-γ1水平达到各应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60min时,各应变组的PLC-γ1水平都显著下降(P<0.01)。结论:牵张应变可引起细胞内PLC-γ1水平的变化。

新生大鼠磷脂酶C-γ1mRNA的表达变化

目的探讨新生大鼠早期各主要脏器磷脂酶C-γ1(PLCγ1,基因为PLCG1)的mRNA表达状况。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析大鼠出生后1、3、5、7 d及2、3、5周等7个时期肝、肺、肾和脑等4种脏器共28例样本的PLCG1的表达变化,以看家基因磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)为内参照,同步逆转录PLCG1特异性片段和内参片段,以二者积分吸光度比值作为PLCG1 mRNA的相对表达量。结果肝、肺、肾和脑4种脏器组织PLCG1在出生后早期的不同时期均有较强表达,并且各时期之间的表达有显著性差异(P均<0.01),第1天肝脏组织中PLCG1几乎没有表达,第7天脑组织的表达最高;而在同一时期4种不同的组织间PLCG1的表达也有显著性差异(P均<0.01)。结论同种脏器组织在不同的发育时期及在同一时期不同脏器组织之间PLCG1的差异性表达提示,PLCG1可能参与了大鼠早期生长发育过程中细胞的增殖与分化。

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果PLC-γ1信号通路阻断后,大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变,存活细胞明显减少,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞株LoVo细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的:磷脂酶C-γ1(phospholipase C gamma1,PLC-γ1)是跨膜信号转导中关键和重要的一个信号中介,是细胞增殖与细胞凋亡调控的一个重要分子,最近研究发现它在大肠癌等许多肿瘤组织中呈过表达状态,与肿瘤的发生、发展有密切关系。本研究主要探讨阻断PLC-γ1信号通路后对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响,及其上述影响的信号机制。方法:以人大肠癌LoVo细胞作为研究模型,利用PLC-γ1特异的化学阻断剂U73122处理以阻断LoVo细胞中PLC-γ1信号通路,通过绘制细胞生长曲线、PI单染的流式细胞仪检测细胞周期而评估对其细胞增殖的影响,通过细胞形态观察及DNA片段琼脂糖凝胶电泳评估是否启动细胞凋亡,同时检测阻断PLC-γ1信号通路后HSP70、Caspase-3表达水平的变化来探讨可能的信号机制。结果:阻断PLC-γ1信号通路明显减缓大肠癌LoVo细胞的生长,其细胞增殖抑制率随药物作用时间和浓度的增加逐渐增高,10μmol/LU73122作用24、48h后其抑制效果可分别达到35%和45%,使LoVo细胞G1期细胞比例增加,而S期细胞比例降低,延缓细胞从G1期向S期的过渡,即抑制细胞周期的进行,阻断PLC-γ1信号通路后LoVo细胞未能出现凋亡特征性的形态学改变,DNA琼脂糖凝胶电泳未能检测到凋亡特征的梯状带的出现,不能引起Caspase-3的激活,同时PLC-γ1信号通路的阻断可上调HSP70的表达水平,HSP70的分子伴侣作用可能是其抑制大肠癌细胞周期进行的机制。结论:阻断磷脂酶C-γ1信号通路能够抑制大肠癌LoVo细胞的过度增殖、抑制其细胞周期的进行,其机制可能是通过上调热休克蛋白70的表达水平而实现,但不能启动LoVo细胞凋亡,磷脂酶C-γ1不是调控LoVo细胞凋亡的关键信号分子。

磷脂酶C-γ功能研究进展

磷脂酶C-γ(PLC-γ)被激活后,通过两种不同的活化机制催化水解PIP2,产生IP3和DAG。IP3和DAG分别介导钙离子从钙泵中释放以及激活蛋白激酶C,从而形成一个关键的跨膜转导信号组分。现已知道,PLC-γ在细胞周期、细胞转化、生长和发育、细胞凋亡以及调控细胞肌动蛋白骨架等生命活动过程中起着重要的调节作用。另外,PLC-γ与其他转导信号,如PKC、Ras、Ca2+等存在cross-talk关系。

磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎肾组织中的表达及意义

目的:研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在小鼠胚胎肾组织中的表达,探讨其临床意义。方法:制备小鼠胚胎肾组织标本,进行石蜡包埋并切片,采用免疫细胞化学方法检测PLC-γ1的表达情况,并进一步利用Western blot技术对磷脂酶C-γ1的表达进行初步定量。结果:免疫细胞化学结果表明,PLC-γ1在小鼠胚胎肾组织中的集合管上皮细胞游离面阳性反应较强,而周围的肾小球、肾小囊、肾小管等为阴性反应。在胚胎第18、16天的肾切片中,集合管反应仍呈现弱阳性,在胚胎第14天的肾切片中,集合管上皮呈现较强阳性反应。Western blot结果表明,PLC-γ1在胚胎第14、16、18天的表达量逐渐降低。结论:PLC-γ1相关的信号通路对于小鼠胚胎肾的发育,尤其是早、中期发育,具有重要的生物学作用。

磷脂酶C-γ1在人胚组织中的表达

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论PLC-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。

蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达

目的研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcg1-/)-及野生型PLC-γ1基因(plcg1+/)+小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对HSP70表达及细胞热耐力的影响.结果plcg1+/+细胞经高温处理,PLC-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcg1-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcg1+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递.

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞贴壁能力的影响

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断后对大肠癌细胞贴壁能力的影响。方法以人大肠癌LoVo细胞株为研究模型,利用PLC-γ1特异的化学阻断剂U73122(1,5,10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、扫描电镜观察细胞形态改变,MTT法计算贴壁细胞数目变化。结果PLC-γ1信号通路被阻断后,LoVo细胞形态发生明显改变,梭形细胞减少,圆形细胞增多,贴壁细胞数减少。结论阻断PLC-γ1信号通路能够降低LoVo细胞的贴壁能力,可能影响LoVo细胞的细胞骨架功能,从而对LoVo细胞的侵袭能力有重要影响。

大鼠磷脂酶C-γ1前体mRNA剪接的初步鉴定

目的探讨在大鼠中是否存在磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)选择性剪接变异体的表达及其可能意义。方法针对在人中已发现的选择性剪接位点(即第30内含子的3'末端与第31外显子交界处)自行设计引物,将大鼠RNA逆转录为cDNA后,再用该对引物进行PCR扩增及序列测定。用此方法初步筛查了大鼠包括胚胎时期、出生早期、成年时期6种脏器组织心、肝、肺、肾、脑和眼球样品共21份。结果在大鼠中未发现与人相似的第一种剪接方式PLC-γ1a(NM_002660)。结论(1)由于不同物种之间的差异,在大鼠中可能不存在与在人类中已发现的PLC-γ1前体mRNA相似的选择性剪接方式,在大鼠中PLC-γ1转录后的剪接主要以与人类相似的第二种剪接方式(PLC-γ1b)为主。(2)在大鼠中PLC-γ1的选择性剪接位点可能与人不同而位于其他位点。

磷脂酶C-γ1对乳腺癌细胞运动作用的影响

目的研究磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对乳腺癌细胞生长、黏附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生的新分子机制。方法在乳腺癌MDA-MB-231细胞中加入PLC-γ1抑制剂,观察细胞划痕、趋化和黏附运动能力变化,应用Western blot技术检测相应的乳腺癌信号转导通路中整合素β1分子磷酸化的表达。结果 PLC-γ1被抑制后乳腺癌细胞的迁移和黏附运动能力下降,差异有统计学意义(P<0.05);整合素β1的磷酸化表达水平降低。结论 PLC-γ1参与了乳腺癌细胞迁移和黏附运动,可作为乳腺癌分子诊断和靶向治疗的靶点。

磷脂酶C-γ1在肿瘤中的表达及其意义

肿瘤转移是癌症患者死亡的主要原因,而肿瘤转移与肿瘤细胞的增殖和侵袭密切相关。因磷脂酶C-γ1过表达增强肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,故其可能成为肿瘤靶向治疗的潜在靶点。本文就磷脂酶C-γ1在细胞活动性中的作用,促进肿瘤的发展和扩散,在肿瘤发展转移中的机制等研究进展作一综述。