5-HT1A基因C-1019G多态位点的研究进展

5-HT1A基因编码5-羟色胺(血清素)的G蛋白偶联受体(属于5-羟色胺受体亚家族)。C-1019G多态位点是5-HT1A基因启动子区一个重要的功能性多态位点,人群中存在3种基因型即CC、CG、GG,它与个体的恋爱关系及抑郁症、焦虑症等精神疾病密切相关。本文对5-HT1A基因C-1019G多态位点的相关机制、检测方法、研究进展等进行综述。The 5-HT1A gene encodes a G protein-coupled receptor for serotonin, which belongs to the 5-hydroxytryptamine receptor subfamily. C-1019G polymorphism is an important functional poly-morphism in the promoter region of 5-HT1A gene. There are three genotypes (CC, CG and GG) in the population, which are closely related to individual’s romantic relationship and mental disorders such as depression and anxiety. In this paper, the mechanism, detection methods and research progress of C-1019G polymorphism of 5-HT1A gene were reviewed.

桑树磷脂酶MaPLA1-2D亚型4个基因的克隆与胁迫应答分析

磷脂酶(phospholipase)是一类在植物生长发育和胁迫应答中起重要调控作用的磷脂水解酶,也是一类重要的信号转导酶。而磷脂酶A1(PLA1)在植物应答生物胁迫和非生物胁迫中的功能研究鲜见报道。研究从桑树(Morus alba L.)中克隆了磷脂酶PLA1的1个亚型MaPLA1-2D基因,对其进行了序列分析、组织表达、胁迫诱导表达和蛋白亚细胞定位分析。结果表明,桑树PLA1-2D亚型基因包括4个成员,命名为MaPLA1-2D.1~MaPLA1-2D.4。4个基因在桑树根和叶中高水平表达,蛋白亚细胞定位在叶绿体。序列和进化分析表明MaPLA1-2D基因4个成员与拟南芥AtDAD1基因的保守结构域序列具有较高相似度且进化关系紧密。MaPLA1-2D基因4个成员的启动子含有多种胁迫应答顺式元件和激素响应元件;胁迫诱导表达模式分析表明MaPLA1-2D基因表达受干旱和脱落酸处理显著诱导。以上结果说明,MaPLA1-2D基因与拟南芥DAD同源,可能在桑树非生物胁迫应答中发挥重要功能。

PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达分析

为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、睾丸、卵巢、子宫)及淋巴组织(颈前淋巴、肩前淋巴、网胃淋巴、瓣胃淋巴、瘤胃淋巴、肠系淋巴、十二指肠淋巴、腹股沟淋巴、空肠淋巴和回盲淋巴)的表达规律进行研究。结果表明:哈萨克绵羊胰腺PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),卵巢PLC-γ1基因的相对表达量显著高于肾脏和子宫(P<0.05),其余器官PLC-γ1基因相对表达量均差异不显著(P>0.05);十二指肠淋巴PLC-γ1基因的相对表达量显著高于瓣胃淋巴(P<0.05),瓣胃淋巴PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他淋巴组织(P<0.01)。说明PLC-γ1基因在哈萨克绵羊各系统器官和淋巴组织中均有表达,并且在胰腺、卵巢、十二指肠淋巴、瓣胃淋巴中的表达明显,对机体免疫、生殖和消化等方面具有重要作用。

中国浙江汉族成年男性Apo C-1基因型与脂蛋白相关磷脂酶A2活性的关系

目的研究中国浙江汉族成年男性载脂蛋白C-1(Apo C-1)基因型与血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性以及血脂代谢指标的关系。方法应用高分辨熔解(HRM)技术检测756例成年男性体检者Apo C-1rs4420638单核苷酸多态性(SNP)的基因型频率分布并检测血浆Lp-PLA2活性。同时检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖(Glu)、体重指数(BMI)和血压。结果 HRM可以清楚地区分Apo C-1基因rs4420638位点的AA型和AG型,未能检测到GG基因型。该SNP位点的AA和AG基因型在成年男性人群分布频率分别是76.1%和23.9%。不同的Apo C-1基因型个体中血浆Lp-PLA2活性差异有统计学意义。AG基因型个体的平均Lp-PLA2活性水平和LDL-C水平均显著高于AA型基因型携带者。结论 Apo C-1基因rs4420638 SNP位点的基因型可影响Lp-PLA2酶活性和LDL-C的水平。

磷脂酶C1基因rs2274223位点多态性与下咽癌临床病理特征及预后的相关性分析

目的 探讨磷脂酶C1(phospholipase C1,PLC1)基因rs2274223位点多态性与下咽癌临床病理特征及预后的相关性。方法 收集2016年1月~2022年12月间浙江大学医学院附属金华医院耳鼻咽喉头颈外科收治的42例下咽癌患者,所有患者均行根治手术,记录临床病理数据,并均取全血3 ml作DNA提取,Sanger法测序检测PLCE1基因rs2274223位点单核苷酸多态性,分析其与下咽癌临床病理特征及预后的相关性。结果 PLCE1基因rs2274223位点在42例下咽癌患者中有16例突变为AG,位点突变与肿瘤分化程度相关(χ^(2)=5.301,P=0.021),K-M生存分析提示rs2274223位点突变与未突变的下咽癌患者3年生存率分别为75.0%和83.1%,5年生存率分别为18.8%和31.2%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.475,P=0.019)。结论PLCE1基因rs2274223位点突变与下咽癌低分化相关,该位点突变的下咽癌患者预后更差。

绵羊磷脂酶C-γ1基因克隆及生物信息学分析

本研究旨对绵羊磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)基因预测序列进行筛选鉴定,获取PLC-γ1基因序列并对其生物信息学进行分析。根据GeneBank(登录号:NC_040264.1)及Ensembl(登录号:ENSOARG00000001700.1)给出的绵羊PLC-γ1的4种不同预测的转录本的编码区(CDS)区进行BLAST对比,在非同源区内两端设计引物,从绵羊卵巢提取总RNA并转录成cDNA,运用RT-PCR方法扩增该特异性片段,胶回收后测序,经BLAST比对筛选出和与该片段一致基因序列。根据筛选序列的引物,运用LA Taq(GC Buffer)高保真酶对绵羊PLC-γ1基因进行PCR扩增,胶回收产物连接PUC57-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑选单克隆进行测序。利用生物信息学技术对该基因及编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出非同源片段330 bp,经BLAST对比分析,预测的转录本X3预测序列与其一致,连接PUC57-T载体,经测序成功扩增3870 bp的绵羊PLC-γ1基因。绵羊PLC-γ1基因与山羊关系紧密,与牛、马、猪等家畜具有较强的进化关系,蛋白分子式为C_(6582)H_(10160)N_(1812)O_(1962)S_(58)。理论分子质量为147.9 ku,存在于细胞质内,且不具备跨膜性,无信号肽,为亲水性弱酸不稳定蛋白。该基因N、C端GC含量偏高,分别达80%、70%以上,具备SH2、SH3、C2等高度保守结构域,二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为36.46%、16.14%、5.04%和42.36%,磷酸化位点有112个,Y428、Y509和S514为关键磷酸化位点。本研究结果为绵羊PLC-γ1蛋白表达研究提供了理论依据,对研究新疆地方品种羊的胚胎发育、提高受精率等具有重要意义。

长链非编码RNA尿路上皮癌相关1基因与脓毒症患者炎症因子严重程度及预后的关系

目的探索长链非编码RNA尿路上皮癌相关1(lncRNA UCA1)基因与脓毒症患者炎症因子、严重程度及28天死亡关系。方法收集2022年1月至2023年12月期间中国人民解放军联勤保障部队第九六○医院收治的174例脓毒症患者临床资料。按照与脓毒症患者性别相同,年龄相差1岁之内1∶1配对收集同期健康体检者作为对照组。通过实时荧光定量(RT-qPCR)法检测外周血单核细胞中lncRNA UCA1水平。酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17、细胞间黏附分子1(ICAM1)和血管细胞黏附分子1(VCAM1)水平。使用COX风险比例回归模型分析影响脓毒症患者28天病死率相关危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估独立危险因素预测脓毒症患者28天死亡的效能。结果与对照组比较,脓毒症患者lncRNA UCA1水平更高(Z=76.235,P<0.001)。脓毒症患者lncRNA UCA1与TNF-α(r=0.384)、IL-6(r=0.308)、IL-17(r=0.472)、ICAM1(r=0.361)和VCAM1(r=0.492)水平、APACHEⅡ(r=0.393)和SOFA评分(r=0.427)均呈正相关(P均<0.001),而对照组中lncRNA UCA1与上述参数均无相关性(P均>0.05)。LncRNA UCA1水平升高(HR=2.186,P=0.007)、年龄增加(HR=1.245,P=0.011)、真菌感染(HR=19.259,P=0.010),C-反应蛋白(CRP)升高(HR=1.334,P=0.036)及APACHEⅡ评分增加(HR=1.245,P=0.017)是脓毒症患者28天死亡的独立危险因素。ROC曲线分析可见lncRNA UCA1(AUC=0.757)、APACHEⅡ评分(AUC=0.865)、CRP(AUC=0.731)及年龄(AUC=0.616)均可预测脓毒症患者28天死亡情况。结论脓毒症患者lncRNA UCA1水平升高,IncRNA UCA1与多种促炎细胞因子、疾病严重程度和不良预后相关。

磷脂酶C-ε1基因单核苷酸多态性及基因表达与胃癌发病风险相关性探讨

目的探究磷脂酶C-ε1(PLCE1)基因单核苷酸多态性及基因表达和胃癌发病风险相关性。方法选取300例胃癌患者及同期300例正常人群,对其DNA进行提取以及测定。结果经研究结果表明其PLCE1基因和胃癌存在一定的易感性相关。结论经研究PLCE1基因单核苷酸多态性及基因表达与胃癌发病具有一定的相关性,并为胃癌以及相关组织来源肿瘤的预警起到了一定的作用。

转录因子HBP1通过负调控磷脂酶C-γ1基因表达抑制宫颈癌细胞的迁移

HMG盒转录因子1(HMG box transcription factor 1,HBP1)作为一个肿瘤抑制因子,具有双重转录因子活性,通过激活或抑制细胞生长相关基因(p16,p21或DNMT1)的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)是磷脂酶C家族的成员,在许多肿瘤细胞PLC-γ1表达升高,与肿瘤细胞的增殖和迁移密切相关。本研究通过生物信息学预测发现PLC-γ1可能是HBP1的下游靶分子;在宫颈癌细胞HeLa中分别过表达和敲低HBP1后,荧光定量PCR及Western印迹检测证明,过表达HBP1,PLC-γ1 mRNA水平下调至49%,蛋白质相对表达量下调至48%(P<0.01);反之,敲低HBP1,PLC-γ1 mRNA水平上调2倍,蛋白质相对表达量上调2倍(P<0.01);双荧光素酶报告基因结果证实,HBP1转录抑制PLC-γ1启动子活性;染色质免疫沉淀结果证实,细胞内HBP1与PLC-γ1启动子结合;细胞划痕实验48 h结果显示,HBP1组划痕面积改变率低于对照组约19%(P<0.05),“HBP1+PLC-γ1”组与HBP1组相比划痕面积改变率增加约17%(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,HBP1组与对照组相比穿过膜的细胞数量分别减少约90和68(P<0.01),“HBP1+PLC-γ1”组与HBP1组相比穿过膜的细胞数量分别增加约89和47(P<0.01),划痕和Transwell实验结果表明,HBP1下调PLC-γ1表达抑制了宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。上述所有结果表明,PLC-γ1是HBP1下游的靶基因,HBP1可以直接结合PLC-γ1基因的启动子,在转录水平抑制PLC-γ1基因的表达,从而抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。该研究初步阐明了HBP1调控PLC-γ1的分子机制及其在宫颈癌细胞迁移中的作用,为确定宫颈癌治疗的有效分子靶点提供了实验依据。

磷脂酶C-γ1在人胚胎脊髓中的表达变化

为了了解磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)的发育表达变化特点,本研究采用免疫组织化学方法检测不同发育时期的人胚胎脊髓中PLC-γ1的表达及变化。结果显示:PLC-γ1在人胚胎脊髓3周到7个月的整个发育过程中均有表达,在发育早期阳性反应可见于神经管内、外界膜,随着套层、边缘层的形成,神经上皮层、套层中均可见到PLC-γ1阳性反应物,且翼板阳性细胞较基板密集;套层阳性细胞在8、9周时达到高峰,随后开始逐渐减少。3个月时边缘层出现散在的阳性细胞,并随着脊髓的发育而逐渐增多。以上结果提示,PLC-γ1及其与PLC-γ1相关的细胞信号通路对人胚胎脊髓的发育可能发挥了重要的生物学作用。

亲磷脂酸磷脂酶A1基因沉默降低MIN6细胞胰岛素分泌水平

目的:探讨亲磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)基因沉默对小鼠分泌胰岛素细胞MIN6分泌功能的影响。方法:根据GenBank中小鼠PA-PLA1基因mRNA序列构建siRNA表达载体(pGPU6-PA-PLA1)并转染MIN6,实时荧光定量PCR和Western blot筛选有效干扰载体。将获得的有效干扰载体转染MIN6细胞48 h后进行葡萄糖刺激实验,检测其胰岛素分泌的变化。结果:酶切及测序证实成功构建了4个靶向PA-PLA1的siRNA表达载体。实时荧光定量PCR和Western blot分析显示siRNA表达载体pGPU6-PA-PLA1-1885具有较高的干扰效率,其转染的MIN6细胞PA-PLA1 mRNA水平降至对照组的46.3%,PA-PLA1蛋白水平降至对照组的33.9%,同时胰岛素分泌水平降至对照组的65.0%(P<0.05)。结论:PA-PLA1基因沉默可降低MIN6的胰岛素分泌水平。

磷脂酶C-γ1对乳腺癌细胞增殖、粘附及迁移的作用

目的探讨磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对乳腺癌细胞生长、粘附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生的分子机制。方法在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中加入PLC-γ1抑制剂(U-73122),用MTT试验、划痕试验、细胞粘附及趋化运动试验检测细胞生物学行为的变化,western blot检测抑制PLC-γ1后的信号传导通路中整合素β1和PKCζ分子磷酸化激活的情况。结果 PLC-γ1被U-73122抑制后MDA-MB-231细胞的增殖、粘附和迁移运动能力下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。western blot结果表明,细胞粘附相关整合素β1的磷酸化激活水平降低;趋化运动相关PKCζ磷酸化水平降低。结论 PLC-γ1参与调控乳腺癌细胞增殖、粘附和迁移运动,可能是乳腺癌分子诊断和靶向治疗的有效靶点。

“环境-遗传-基因互作”模式中磷脂酶Cε1对食管癌易感性的影响

随着全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)和后GWAS研究的深入,越来越多的疾病相关单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)被发现。近年的研究[1-3]提示,部分疾病相关SNP可导致其所在基因以及相关基因转录和蛋白表达水平发生变化,进一步影响肿瘤的发生和发展,甚至影响肿瘤的转归(预后),这些发现极大丰富了“环境-遗传-基因互作”模式对肿瘤发生、发展和转归影响的新理论;这些SNP可分为增加疾病易感性的SNP和致病性SNP两大类。推测致病性SNP不但影响相关基因的转录和蛋白表达,并且也可能影响驱动基因突变。

磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎组织表达的免疫细胞化学研究

目的研究磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎各组织的表达及规律。方法制备小鼠胚胎标本,进行石蜡包埋并切片,采用免疫细胞化学方法检测磷脂酶C-γ1的表达。结果各种胚胎组织中软骨、骨骼肌、心肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑等均有不同程度的表达。结论磷脂酶C-γ1相关的信号通路对于小鼠胚胎细胞(软骨、骨骼肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑神经元等)的发育可能具有重要的生物学意义。

前列腺干细胞抗原基因和磷脂酶CE1基因多态性与老年幽门螺旋杆菌感染胃溃疡的易感性及对临床预后的影响

目的探讨前列腺干细胞抗原基因(PSCA)和磷脂酶(PL)CE1基因多态性与老年幽门螺旋杆菌(Hp)感染胃溃疡的易感性及对临床预后的影响。方法采用病例-对照研究设计,选取130例胃溃疡并且Hp检查为阳性的老年患者作为病例组,另外按性别和年龄匹配的胃溃疡并且Hp检查为阴性的老年患者作为对照组。所有患者治疗前抽取外周静脉血并提取DNA,设计PSCA(rs2294008)和PLCE1(rs11599672)聚合酶链反应(PCR)引物进行PCR扩增,扩增产物采用DNA测序分析PSCA和PLCE1基因类型,采用Logistic回归计算校正相对危险度(OR)和95%置信区间(95%CI)评价PSCA和PLCE1基因多态性与老年Hp感染胃溃疡的易感性。结果 1两组年龄、性别、病程、病变部位差异均无统计学意义(P>0.05);2与rs2294008基因型CC比较,基因型为CT、TT和CT/TT的患者Hp感染危险性降低(P<0.01);3与PLCE1 rs11599672基因型AA比较,基因型为AC、CC和AC/CC的患者Hp感染危险性降低(P<0.05);4不同PSCA多态位点rs2294008和LCEl多态位点rs11599672患者的Hp根除率和溃疡愈合率差异具有统计意义(P<0.01)。结论 PSCA rs2294008基因型CC和PLCE1 rs11599672基因型AA可增加Hp感染胃溃疡易感性,并且显著降低临床预后。

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行PLC-γ1水平检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:在加载牵张应变初期,细胞内的PLC-γ1水平维持较低水平;随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内的PLC-γ1水平逐渐升高。50min时,PLC-γ1水平达到各应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60min时,各应变组的PLC-γ1水平都显著下降(P<0.01)。结论:牵张应变可引起细胞内PLC-γ1水平的变化。

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果PLC-γ1信号通路阻断后,大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变,存活细胞明显减少,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。

新生大鼠磷脂酶C-γ1mRNA的表达变化

目的探讨新生大鼠早期各主要脏器磷脂酶C-γ1(PLCγ1,基因为PLCG1)的mRNA表达状况。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析大鼠出生后1、3、5、7 d及2、3、5周等7个时期肝、肺、肾和脑等4种脏器共28例样本的PLCG1的表达变化,以看家基因磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)为内参照,同步逆转录PLCG1特异性片段和内参片段,以二者积分吸光度比值作为PLCG1 mRNA的相对表达量。结果肝、肺、肾和脑4种脏器组织PLCG1在出生后早期的不同时期均有较强表达,并且各时期之间的表达有显著性差异(P均<0.01),第1天肝脏组织中PLCG1几乎没有表达,第7天脑组织的表达最高;而在同一时期4种不同的组织间PLCG1的表达也有显著性差异(P均<0.01)。结论同种脏器组织在不同的发育时期及在同一时期不同脏器组织之间PLCG1的差异性表达提示,PLCG1可能参与了大鼠早期生长发育过程中细胞的增殖与分化。

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞株LoVo细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的:磷脂酶C-γ1(phospholipase C gamma1,PLC-γ1)是跨膜信号转导中关键和重要的一个信号中介,是细胞增殖与细胞凋亡调控的一个重要分子,最近研究发现它在大肠癌等许多肿瘤组织中呈过表达状态,与肿瘤的发生、发展有密切关系。本研究主要探讨阻断PLC-γ1信号通路后对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响,及其上述影响的信号机制。方法:以人大肠癌LoVo细胞作为研究模型,利用PLC-γ1特异的化学阻断剂U73122处理以阻断LoVo细胞中PLC-γ1信号通路,通过绘制细胞生长曲线、PI单染的流式细胞仪检测细胞周期而评估对其细胞增殖的影响,通过细胞形态观察及DNA片段琼脂糖凝胶电泳评估是否启动细胞凋亡,同时检测阻断PLC-γ1信号通路后HSP70、Caspase-3表达水平的变化来探讨可能的信号机制。结果:阻断PLC-γ1信号通路明显减缓大肠癌LoVo细胞的生长,其细胞增殖抑制率随药物作用时间和浓度的增加逐渐增高,10μmol/LU73122作用24、48h后其抑制效果可分别达到35%和45%,使LoVo细胞G1期细胞比例增加,而S期细胞比例降低,延缓细胞从G1期向S期的过渡,即抑制细胞周期的进行,阻断PLC-γ1信号通路后LoVo细胞未能出现凋亡特征性的形态学改变,DNA琼脂糖凝胶电泳未能检测到凋亡特征的梯状带的出现,不能引起Caspase-3的激活,同时PLC-γ1信号通路的阻断可上调HSP70的表达水平,HSP70的分子伴侣作用可能是其抑制大肠癌细胞周期进行的机制。结论:阻断磷脂酶C-γ1信号通路能够抑制大肠癌LoVo细胞的过度增殖、抑制其细胞周期的进行,其机制可能是通过上调热休克蛋白70的表达水平而实现,但不能启动LoVo细胞凋亡,磷脂酶C-γ1不是调控LoVo细胞凋亡的关键信号分子。