磷脂酸磷酸酶2域1A在不同转移能力肝癌细胞系中的表达

目的研究磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)在7种不同转移能力的肝癌细胞系中表达的差异。方法以7种不同转移能力的肝癌细胞系(BEL-7402、Hep G2、MHCC-97L、SMMC-7721、HCCL-M6、BEL-7404、MHCC-97H细胞)为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法分别检测其PPAPDC1A mRNA和蛋白的表达。结果在7种不同转移能力的肝癌细胞中,PPAPDC1A mRNA与PPAPDC1A蛋白的表达从低到高依次为BEL-7402细胞<Hep G2细胞<MHCC-97L细胞<SMMC-7721细胞<HCCL-M6细胞<BEL-7404细胞<MHCC-97H细胞;7种不同转移能力肝癌细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达比较差异均有统计学意义(F=38.373、441.937,P<0.05)。其中Hep G2细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于BEL-7402细胞(P<0.05);MHCC-97L细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于Hep G2细胞(P<0.05);SMCC-7721、HCCL-M6细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于MHCC-97L细胞(P<0.05);HCCL-M6细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于SMCC-7721细胞(P<0.05);MHCC-97L、SMCC-7721、HCCL-M6、BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于BEL-7402细胞(P<0.05);SMCC-7721、HCCL-M6、BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于Hep G2细胞(P<0.05);BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于MHCC-97L细胞(P<0.05);BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于SMCC-7721细胞(P<0.05);BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于HCCL-M6细胞(P<0.05);MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于BEL-7404细胞(P<0.05)。结论 PPAPDC1A可能促进肝细胞癌的侵袭与转移。

磷脂酸磷酸酶2域1A在不同子宫颈癌细胞中的表达

目的探讨磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)在人4种子宫颈癌细胞中表达的差异。方法通过实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法分别检测PPAPDC1A mRNA和蛋白在人子宫颈癌C33-A细胞、Caski细胞、HeLa细胞和SiHa细胞中的表达。结果子宫颈癌SiHa、HeLa、Caski和C33-A细胞中PPAPDC1A mRNA的表达量分别为0.344±0.027、0.593±0.017、0.899±0.030和2.920±0.045,PPAPDC1A蛋白的表达分别为0.514±0.030、1.185±0.096、1.379±0.084和1.761±0.072;子宫颈癌SiHa、HeLa、Caski和C33-A细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。PPAPDC1A mRNA和蛋白在4种子宫颈癌细胞中表达的顺序为:C33-A细胞>Caski细胞>HeLa细胞>SiHa细胞。结论 PPAPDC1A基因在不同子宫颈癌细胞中存在差异表达。

磷脂酸磷酸酶2域1A基因在乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中的表达

目的探讨磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)基因在正常乳腺上皮细胞和不同转移能力的乳腺癌细胞中表达的差异。方法以正常乳腺上皮HBL-100细胞、低转移乳腺癌MCF-7细胞、高转移乳腺癌MDA-MB-435s细胞和高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和Western blot法分别检测PPAPDC1A基因mRNA和蛋白在上述细胞中的表达。结果与正常乳腺上皮HBL-100细胞比较,3种不同转移能力的乳腺癌细胞中的PPAPDC1A mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.01),且高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞和高转移乳腺癌MDA-MB-435s细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白表达水平均高于低转移乳腺癌MCF-7细胞(P<0.01),高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白水平的表达高于高转移乳腺癌MDA-MB-435s细胞(P<0.01)。PPAPDC1A在4种细胞中表达的顺序为HBL-100细胞<MCF-7细胞<MDA-MB-435s细胞<MDA-MB-231细胞。结论 PPAPDC1A基因可能促进了乳腺癌的发生、转移。

磷脂酸磷酸酶2域1A在不同结直肠癌细胞中的表达

目的探讨磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)在人结直肠癌细胞中的表达及意义。方法取结直肠癌细胞系高转移潜能细胞LOVO、SW620和低转移潜能细胞SW480、RKO、HCT116、DLD-1进行常规培养,待细胞生长至对数生长期时,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测不同结直肠癌细胞中PPAPDC1A mRNA表达,Western blot检测不同结直肠癌细胞中PPAPDC1A蛋白表达。结果 6种人结直肠癌细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白表达比较差异均有统计学意义(F=41.213、344.116,P<0.05)。高转移潜能细胞LOVO、SW620中PPAPDC1A mRNA和蛋白表达显著高于DLD-1、HCT116、RKO、SW480细胞(P<0.05);高转移潜能细胞LOVO中PPAPDC1A蛋白表达显著高于SW620细胞(P<0.05);DLD-1细胞中PPAPDC1A蛋白表达显著高于HCT116、RKO、SW480细胞(P<0.05);低转移潜能细胞HCT116中PPAPDC1A蛋白表达显著高于RKO、SW480细胞(P<0.05);RKO细胞中PPAPDC1A蛋白表达显著高于SW480细胞(P<0.05)。高转移潜能细胞LOVO与SW620细胞中PPAPDC1A mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05);SW480、RKO、HCT116、DLD-1细胞中PPAPDC1A mRNA表达两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PPAPDC1A在结直肠癌细胞系中存在差异性表达,其可能与结直肠癌的侵袭和转移有关。

磷脂酸磷酸酶在酿酒酵母中的过表达及表型分析

磷脂酸磷酸酶(PAP)是一类重要的去磷脂酸酶,该酶的低水平表达会降低酿酒酵母细胞对外源脂肪酸的耐受性,从而阻碍了改造酿酒酵母使其生产多不饱和脂肪酸的研究进程。本实验克隆获得磷脂酸磷酸酶的编码基因PAH1,构建了过表达PAH1的酿酒酵母重组菌株BY-PAH。限氮发酵72 h后,重组菌株BY-PAH胞内油脂浓度较对照菌株BY4741提高了49%。当在培养基中添加棕榈油酸浓度从0.25 mmol/L提高到1 mmol/L时,重组菌株BY-PAH的胞内油脂浓度从26.7%提高到38.5%。该结果表明,磷脂酸磷酸酶通过其自身的去磷酸化活性能够将更多的脂肪酸整合到甘油三酯TAG上,使酿酒酵母对脂肪酸有更高的耐受性。

大豆紫色酸性磷酸酶GmPAP14克隆与生物信息学分析

采用RT-PCR技术克隆大豆紫色酸性磷酸酶(Purple acid phosphatase,PAP)基因,并对基因及其编码蛋白进行生物信息学分析,为植物磷高效转基因育种及分子机制解析提供候选基因。结果表明:从低磷处理14d的‘中黄15’cDNA中克隆获得一条开放阅读框1 395bp的基因,经保守域分析发现该基因属于紫色酸性磷酸酶类,命名为GmPAP14(GenBank No.JN967626)。对基因编码蛋白进行生物信息学分析发现,GmPAP14编码1条含有464个氨基酸残基的多肽链,分子量约53.1kD,理论等电点6.14,且含有紫色酸性磷酸酶所特有的5个保守基序和7个金属离子结合位点。进一步分析发现GmPAP14具有跨膜结构与信号肽,定位于质膜或分泌到胞外。经系统发育树分析显示GmPAP14与苜蓿MtPAP1及大豆GmPAP1具有同源性,预测可能与植物磷素高效吸收利用有关。

苹果紫色酸性磷酸酶相关基因MdPAP10的克隆及功能鉴定

【目的】克隆苹果紫色酸性磷酸酶相关基因Md PAP10,研究其组织表达模式和低磷响应,并进一步研究Md PAP10在低磷条件下的功能,为深入研究Md PAP10在果树中参与紫色酸性磷酸酶分泌和影响磷吸收的分子机理奠定基础。【方法】本研究以‘嘎啦’苹果(Malus×domestica‘Royal Gala’)为试材,利用同源序列比对和PCR技术,克隆苹果紫色酸性磷酸酶相关基因Md PAP10。通过NCBI分析Md PAP10的蛋白质结构并获得白梨、桃和草莓等10个物种的PAP10氨基酸序列,利用MEGA5.0构建系统进化树。利用q RT-PCR检测Md PAP10在苹果不同组织的表达情况和对低磷胁迫的响应特性。将Md PAP10连接到植物过表达载体p BI121,转化LBA4404农杆菌,用于侵染苹果愈伤组织。通过在抗性培养基上筛选和PCR鉴定,获得Md PAP10转基因愈伤组织。在低磷培养基上培养Md PAP10转基因愈伤组织检测其酸性磷酸酶积累情况以及对低磷胁迫的耐受性和磷含量。最后利用q RT-PCR检测Md PAP10转基因愈伤组织中磷相关基因的表达量。【结果】克隆获得苹果紫色酸性磷酸酶基因Md PAP10(基因序列号:MDP0000272096),开放阅读框为1 332 bp,编码含有443个氨基酸的蛋白。蛋白质结构分析显示,Md PAP10包含一个信号肽和一个磷酸酶结构域。基因结构分析显示,Md PAP10含有5个外显子和4个内含子。进化树分析显示,苹果Md PAP10与白梨Pb PAP10同源性最高,亲缘关系最近。表达分析显示,Md PAP10在根、茎、叶、花、果中均有表达,并且在根中的表达量最高。Md PAP10对低磷条件有明显响应,在根中表达量逐渐升高,在6 h达到最大后逐渐下降;在叶中的表达量始终低于对照组。Md PAP10转基因愈伤组织在低磷条件下能够明显促进酸性磷酸酶的分泌。在低磷条件下培养转基因愈伤组织20 d发现过表达Md PAP10提高了愈伤组织对低磷胁迫的耐受性,并且提高了对磷的吸收。q RT-PCR结果显示,过表达Md PAP10能够明显促进苹果磷相关基因的表达。【结论】Md PAP10能够对低磷胁迫有明显响应,在低磷条件下能够促进磷吸收和酸性磷酸酶的分泌。Md PAP10在响应低磷胁迫过程中发挥着重要的正调控作用。

碱性磷酸酶标A蛋白加强的PAP技术

本文介绍一种碱性磷酸酶标Ａ蛋白加强的ＰＡＰ技术。采用ＰＡＰ技术、碱性磷酸酶标Ａ蛋白（ＰＡＡＰ）技术ＰＡＡＰ和加强的ＰＡＰ（ＰＡＰ－ＰＡＡＰ）技术显示下丘脑室旁核催产素（ＯＴ）能神经元。结果发现，其中使用ＰＡＰ－ＰＡＡＰ技术免疫反应产物的显色最深。此技术的原理可能是，由于Ａ蛋白分子至少有四个位点能与ＩｇＧ分子的Ｆｃ段高亲合性地结合，故在该技术中，先经过ＰＡＰ程序的三步免疫反应并显色后，每个与一抗结合的二抗分子上和每个与二抗结合的ＰＡＰ复合物分子上各暴露一个能与Ａ蛋白分子结合的Ｆｃ段，在随后经过ＰＡＡＰ技术处理时，部分ＰＡＡＰ复合物分子就结合在这些Ｆｃ段上，经显色后，ＰＡＡＰ技术显示的浅紫兰色与ＰＡＰ技术显示的浅棕褐色重叠，变成更深的反差明显的深棕褐色。

拟南芥中PAP特异磷酸酶(AtAHL)的折叠识别与结构预测

通过现有的序列同源性比较、二级结构预测、三维结构预测和模拟方法 ,得到了拟南芥中PAP特异磷酸酶的三维结构 .这是一种与酵母中的Hal2 p蛋白质类似 ,并且N端为α +β ,C端为α/ β结构域的多结构域蛋白质 .分析预测所得结构 ,发现了Mg2 + 等金属离子的结合位点 ,推测了对Na+ 敏感的结构基础 .这些结合位点与其生化功能相关 .而且 ,通过结构与功能分析 ,讨论了蛋白质数据库 (PDB)

宫颈酸性磷酸酶CAP单克隆抗体的制备及CAP在早期宫颈癌筛查中的临床意义

目的制备出宫颈酸性磷酸酶蛋白(CAP)的单克隆抗体,并对其相关的生物学特性进行鉴定;同时应用Mark-Pap试剂盒检测患者宫颈涂片中的CAP表达,并与TCT制片诊断确诊结果进行比较。方法将CAP蛋白免疫Balb/c雌性小鼠,常规聚乙二醇介导融合,以间接ELISA方法筛选阳性克隆,有限稀释法亚克隆筛选单克隆细胞株,并使用秋水仙素对其核型进行鉴定,使用ISO-2鼠源单克隆抗体亚型检测试剂盒检测其亚类,并检测其效价、特异性等;用Mark-PAP试剂盒检测CAP蛋白在350例行常规妇科体检女性宫颈组织细胞中的表达,细胞内出现红色沉淀即为CAP阳性,并与TCT制片诊断确诊结果进行比较。结果筛选出能够稳定分泌抗CAP单抗的杂交瘤细胞株1B11和3C12,其单克隆抗体的亚型经鉴定为IgG2b和IgG1,抗体的效价在106以上;宫颈酸性磷酸酶在宫颈癌患者组织细胞中呈阳性表达,而正常的子宫颈上皮细胞及炎症细胞中无CAP表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本实验制备出了CAP蛋白单克隆抗体1B11和3C12;CAP在1例高度鳞状上皮内病变患者和1例确诊为早期宫颈鳞癌患者的组织切片中呈阳性表达,提示宫颈酸性磷酸酶在宫颈癌早期诊断中可能具有指导意义。

前列腺酸性磷酸酶镇痛机制与研究现状

疼痛,如癌性疼痛和术后疼痛,给患者造成极大痛苦。因此研究疼痛机制,寻找新的疼痛缓解方法,提高患者生活质量,成为当前急需解决的问题。最新的研究表明,前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase,PAP)具有潜在的镇痛效果,本文就前列腺酸性磷酸酶的结构、分布、镇痛效果和镇痛机制及其应用前景作一综述。

甘蓝型油菜紫色酸性磷酸酶基因类似物的生物信息学分析

利用生物信息网络数据库,对甘蓝型油菜紫色酸性磷酸酶基因(PAP)类似物编码的蛋白进行生物信息学分析,以预测该蛋白的理化性质、分子结构与生物学功能。结果表明:该基因编码的蛋白含481个氨基酸,其蛋白的分子式为C2520H3714N666O719S19,分子量为55.45kDa,等电点为6.35,为亲水性分泌型蛋白,并且不稳定;存在3个跨膜螺旋区域及3个卷曲螺旋结构,含有1个信号肽、39个潜在磷酸化位点和3个N-糖基化修饰,存在6种类型特定的功能位点,主要定位于高尔基体;氨基酸序列同源性分析表明,该基因编码的蛋白与甘蓝型油菜PAP12家族具有较近的亲缘关系,直系同源于甘蓝型油菜PAP12-5;二级结构主要为无规则卷曲、延伸链和α?螺旋,具有较为明显的10个螺旋和26个折叠;具有PAP的保守结构域,属于金属磷酸二酯酶超家族成员;根据保守结构域及功能位点分析发现该基因属于紫色酸性磷酸酶类,可能属于甘蓝型油菜PAP基因家族成员,预测其编码产物在植物磷高效利用与吸收中发挥重要的生理功能。生物信息学分析及结合蛋白的结构与功能预测分析可为深入研究甘蓝型油菜PAP提供理论指导。

磷脂酸磷酸酶与中性脂肪代谢调控

中性脂肪主要指三酰甘油(triacylglycerol,TAG),是动植物细胞贮脂的主要形式。TAG约占人体脂类的95%,它的合成与动员是能量平衡调节的主要环节,而这一调节的失衡是诱发肥胖,产生高血压、心脏病及皮下脂肪丢失等疾病的主要原因。油脂代谢受到油脂基因所编码的脂肪相关调节酶的直接调控,中性脂肪代谢过程有高度的真核系统保守性。磷脂酸磷酸酶(phosphatidate phosphatase,PAP)也称脂素,相关基因PAH1(酿酒酵母)、LPIN1、LPIN2、LPIN3(哺乳动物)是研究人员近年确定的一类中性脂肪代谢调控的关键基因。相关的研究为进一步了解脂肪代谢有关疾病提供了一个重要线索,并且可能为研发控制脂肪代谢的新药提供新靶点。就近年PAP的相关研究主要成果进行概述。

磷脂酸磷酸酶在脂质代谢和信号转导中的作用及其调控

磷脂酸磷酸酶(phosphatidic acid phosphatase,PAP)催化磷脂酸(phosphatidic acid,PA)而产生二脂酰甘油(diacylglycerol,DAG)。PA和DAG均是脂代谢的关键中间产物,也是信号分子。因此,PAP在脂质代谢和信号转导过程中具有重要作用。本文回顾了近期有关PAP的研究进展,概述了PAP的结构特征、生化特性和时空调控,阐述了PAP在脂质代谢中的作用及其生理效应和分子调控,并提出有关PAP尚未清楚的问题及今后的研究方向。

PAP和PSA与前列腺癌诊治的关系

目的 :探讨前列腺酸性磷酸酶 (PAP)、前列腺特异抗原 (PSA)与前列腺癌的诊断、临床分期、预后判断的关系。方法 :用放射免疫测定法 (RIA)检测经病理检查证实的前列腺癌 5 2例 ,同时以 PAP、PSA辅助诊断。结果 :PSA阳性率明显高于直肠指检、B超和 PAP(P <0 .0 5 )。PAP和 PSA升高与前列腺癌的分期、肿瘤细胞分化程度具有相关性。结论 :PAP和 PSA对前列腺癌的诊断、临床分期。

前列腺疾病患者血清TPSA、FPSA和PAP的检测及其意义

为探讨总前列腺特异性抗原 (TPSA)、游离前列腺特异性抗原 (FPSA)、前列腺酸性磷酸酶 (PAP)的检测对前列腺疾病的诊断价值 ,采用双抗体夹心酶联免疫 (ELISA)法对 3 8例前列腺癌、85例前列腺良性疾病和 40例正常人血清中 TPSA、FPSA和PAP水平进行了检测。结果显示 ,前列腺癌患者血清中 TPSA、 FPSA和 PAP水平均显著高于前列腺良性疾病组和正常对照组 (P<0 .0 1) ,F/ T比值前列腺癌组明显低于前列腺良性疾病组和正常组 (P<0 .0 1) ,前列腺良性疾病组与正常组无明显差别。

抑制法测定血清PAP活性及其临床意义

目的 :建立PAP(前列腺酸性磷酸酶 )活性测定方法 ,探讨血清PAP与F PSA的相关性及在辅助前列腺癌临床诊疗中的应用价值。方法 :以酒石酸为抑制剂 ,采用Johson&Johson诊断公司干化学ACP测定方法 ,以VITROS 75 0全自动分析仪测定 2 0例健康志愿者 ,2 2例前列腺增生患者 ,2 8例前列腺癌患者治疗前后PAP活性变化 ,并与F PSA测定结果比较。结果 :前例腺癌PAP和F PSA值均显著高于前列腺增生 (P <0 0 1) ,前列腺癌治疗后PAP和F PSA值明显下降 (P <0 0 1) ,前列腺增生患者PAP和F PSA值与健康人相比较无统计学变化 (P >0 0 5 )。结论 :动态测定前列腺癌患者治疗前后PAP变化对前列腺癌的辅助诊断和治疗监测具有重要临床应用价值 ,且该方法稳定 ,操作简单。快速 。

PAP法与PAAP法结合的双重免疫染色技术

介绍在同一切片上显示两种抗原物质在同一结构内比较分布的一种双重免疫染色技术。实验用过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法作为第一染色序列,用碱性磷酸酶标A蛋白(PAAP)法作为第二染色序列,最终分别产生深棕褐色和紫蓝色反应产物。其特点在于利用A蛋白能与IgG抗体分子Fc段牢固结合的分子生物学特性,在进行第二序列反应显色的同时,使第一序列反应产物的染色强度得以增加。结果表明,此技术能反差鲜明地显示含有不同物质的两种细胞在同一区域内的比较分布。

PAP、PSA与前列腺癌的诊断

本院从1992年7月至1996年9月收治经病理检查证实的前列腺癌52例,均行直肠指检(DRE)、B超、血清前列腺酸性磷酸酶(PAP)和前列腺特异抗原(PSA)检查,其诊断前列腺癌阳性率分别为78.8％、50.0％、61.5％、84..％。PSA阳性率明显高于其它检查(P<0.005)。若结合DRE、TRUS则诊断前列腺癌之敏感性达到96.2％。经直肠前列腺穿刺活检31例,穿刺阳性率为87.1％。PAP、PSA升高患者的比例与前列腺癌的分期、肿瘤细胞分化程仅具相关性。因此,PAP、PSA对前列腺癌的诊断、临床分期、判断预后有较大价值。

Iodogen标记PAP

前列腺酸性磷酸酶(PAP)是前列腺癌较为特异的标志物，由于体液中含量甚微，故检测均采用RLA。已建立的PAP RLA均以氯胺-T法制备^130I-PAP,但因PAP结构的特殊性和分析方法灵敏度，可测范围的高需求，该方法得到的产品无论是理化特性和免疫反应性方面都难以达到应用的要求，