蛋白激酶Cγ和蛋白磷酸酯酶Aα在慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马中表达的变化

目的 探讨蛋白激酶Cγ (PKCγ)和蛋白磷酸酯酶Aα (PP2B Aα)在慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马中的表达及其意义。方法 将成年雄性Wistar大鼠随机分为应激组和对照组 ,对应激组实行慢性复合应激 4 2d后 ,用Morris水迷宫 ,Y 迷宫对 2组大鼠进行学习和记忆能力测试 ,然后用免疫组织化学方法 ,观察 2组大鼠PKCγ和PP2B Aα的表达 ,并用计算机图像分析系统对免疫阳性反应结果进行处理。结果 应激组比对照组学习记忆能力明显增强 ;在海马CA3区PKCγ的免疫反应阳性明显增强 ;PP2B Aα在海马CA1和CA3区的免疫反应阳性明显减弱。结论 海马内PKCγ和PP2B Aα表达的变化可能参与了慢性复合应激致大鼠学习记忆增强的机制。

磷酯酶Cβ亚型和蛋白激酶C在糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌中的表达

[目的]观察糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌组织中磷酯酶Cβ亚型(PLCβ)和蛋白激酶C(PKC)的表达情况.[方法]取Wistar大鼠,腹腔注射给予STZ制作糖尿病大鼠模型,利用RM-6240四道生理信号记录仪观察大鼠胃窦环行平滑肌的自发性收缩运动情况,将自发性收缩运动减弱的大鼠确定为糖尿病胃动力障碍模型.通过免疫组织化学方法检测PLCβ和PKC蛋白在糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌组织中的表达水平.[结果]与正常对照组比较,糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌组织中PLCβ和PKC蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).[结论]糖尿病大鼠发生胃动力障碍原因认为可能与胃窦平滑肌中PLCβ和PKC蛋白表达水平下调有关系.

P85磷酯肌醇-3激酶-蛋白激酶C-ζ复合物对血管紧张素Ⅱ激活平滑肌细胞p70核蛋白体S6激酶的调节作用

作者以前的研究发现蛋白激酶C ζ介导血管紧张素Ⅱ经Ras MEK途径激活血管平滑肌细胞丝裂素活化的蛋白激酶MAPK或细胞外信号调节激酶ERK1/ 2。本文研究了P85磷酯肌醇 3激酶 蛋白激酶C ζ复合物核蛋白体激酶p70S6激酶活性的调节作用及其信号传递途径。WesternBlot分析显示正常培养的血管平滑肌细胞表达p70S6激酶、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ。 10 0nmol血管紧张素Ⅱ和 10 μg/L血小板源生长因子刺激并不影响p70S6激酶、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ表达。p70S6激酶磷酸转移酶活性分析发现血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌细胞作用 5min即开始激活p70S6激酶 ,2 0min达高峰 ,并呈剂量依赖性。磷酯肌醇 3激酶抑制剂wort mannin (10nmol)、蛋白激酶C ζ抑制剂PseudoZ (5 0 μmol)和p70S6激酶抑制剂rapamycin (10 0 μg/L)均可明显阻断血管紧张素Ⅱ诱导的p70S6激酶激活。有趣的是 ,我们观察到p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ受血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子刺激后均向Ras转位并与之结合 ,抗Ras抗体可将p85磷酯肌醇 3激酶或蛋白激酶C ζ混合沉淀 ,抗p85磷酯肌醇 3激酶抗体亦可使蛋白激酶C ζ沉淀下来。提示Ras、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ三种蛋白结合在一起形成一个功能复合体 。

NO-1886对高糖高脂喂养小型猪肾脏蛋白激酶C表达的影响

目的探讨合成化合物脂蛋白酯酶活化剂NO-1886对高糖高脂喂养小型猪肾脏蛋白激酶C表达的影响。方法广西巴马小型猪共15只,按体重随机分为3组,5只/组:正常对照组,喂正常猪饲料;高糖高脂组,喂高糖高脂饲料;加药组,喂加入1.0%NO-1886的高糖高脂饲料。动物分栏喂养,每日投食3次,日粮为体重的4%,自由饮水。实验期为5个月。实验前和实验过程中每月末分别抽取血样,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;GPO-PAP酶法测定血浆三酰甘油;放射免疫法测血浆胰岛素。第5个月从左肾下极的相同部位取部分组织(包括皮质和髓质),HE染色以观察细胞显微结构,同时免疫组化染色;免疫组织化学方法和Western blot方法分别检测肾脏蛋白激酶C表达情况。结果使用NO-1886组的葡萄糖、胰岛素和三酰甘油水平显著下降;肾脏细胞显微结构结构基本正常;免疫组织化学方法和Western blot方法检测的结果同时说明NO-1886可以降低高糖高脂饮食所致巴马小型猪肾脏组织中蛋白激酶C的表达。结论NO-1886可以通过降低糖尿病肾病中的高血糖和高血脂,下调巴马小型猪肾脏组织中蛋白激酶C的表达。

北京鸭红细胞膜G-蛋白与磷酯酶C的偶联及腺苷受体的调节

GDP、GTP和GTPγS激活北京鸭红细胞膜上的磷酯酶C,在10^(-7)～10^(-4)mol/L的范围内,使磷酸肌醇产量增加。其中GTPγS作用最强,分别使IP_2和IP_3增强550％和580％。GTP与GDP的效力相近,使IP_2增加140％和150％;IP_3增加230％和330％。A-嘌呤能受体激动剂6-N-cyclohe-xyladenosine(CHA)对抗ATP通过P-嘌呤能受体激活的磷酯酶C,使其活性下降60％。CHA的这种作用可被其特异拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dimethylxanthine对抗。以上结果表明鸭红细胞是研究受体、G-蛋白及磷酯酶C偶联的良好模型。表明不同嘌呤能受体在调节磷酯酶C中的相反作用。

脂蛋白相关磷酯酶A2、D二聚体、C反应蛋白及外周血嗜中性粒细胞绝对值联合检测对急性脑血栓形成的诊断价值

目的：探讨脂蛋白相关磷酯酶A2（Lipoprotein Associated Phospholipase A2,Lp-PLA2）、D二聚体（D Dimer,DD）、高敏C-反应蛋白（Hypersensitive C Reative Protein,hsCRP）、外周血嗜中性粒细胞绝对值（Neutrophils Absolute Value，Neu）联合检测对急性脑血栓形成（Cerebral Thrombosis，CT）的诊断价值。方法：选取2014年1月至2014年8月佛山市第二人民医院神经内科/外科门诊初诊患者,通过病史、症状和体查拟诊为疑似脑CT患者，再采用诊断金标准将疑似患者（研究对象）确诊分为脑CT（65例）和非脑CT组（50例）。LP-PLA2测定用双抗体夹心ELISA法，DD和hsCRP测定用免疫比浊法，Neu测定用血细胞分析仪法。采用循证检验医学的方法统计各联合指标的诊断价值性能指标。结果：脑CT组Lp-PLA2、DD的ln值、hsCRP的ln值及Neu明显高于非脑CT组[（250.62±145.60）ng/ml vs （152.94±59.01）ng/ml；（2.84±0.33）ng/ml vs （2.06±0.26）ng/ml；（0.55±0.22）mg/l vs （0.24±0.08） mg/l；（4.23±2.05）＆#215;10-9/L vs （3.02±1.38）＆#215;10-9/l，P〈0.05]。Lp-PLA2、DD、hsCRP和Neu对脑CT具有最高诊断正确率的诊断界值分别为173.5ng/ml、330.0ng/ml、1.99mg/ml和3.27＆#215;109/L，依据指标联合诊断价值四格表获得指标并联和串联的各诊断价值参数，4指标并联灵敏度95.4%（漏诊率4.6%）为最高，4指标串联特异性98.0%（误诊率2.0%）为最高，综合考虑单一指标的检测成本和操作方便性，DD和Neu并联灵敏度90.8%（漏诊率9.2%）为最佳，DD和hsCRP串联的特异性94.0%（误诊率4.0%）为最佳。结论：在目前所选择研究指标中,DD＋Neu并联是最佳脑CT筛查联合指标，DD＋hsCRP串联是最佳脑CT确诊联合指标。

蛋白激酶C在血管收缩中的调节机制

血管的收缩可以调节血管紧张度,引起血流量和血压的变化。在高血压、糖尿病等慢性疾病的发病过程中,蛋白激酶C（PKC）信号通路表达异常会引起血管收缩功能异常,进而影响发病进程。在血管平滑肌上以及与其相关的神经末梢表达有多种PKC的亚型,并且大量研究表明PKC的活性与血管收缩密切相关。

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ通过介导凋亡加重H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase II,Ca MKII)在H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用。方法:H9c2心肌细胞随机分为4组:正常对照(control)组、Ca MKII特异性抑制剂KN-93(1μmol/L)对照(KN-93)组、H/R组和KN-93+H/R组,其中KN-93组及KN-93+H/R组先用1μmol/L KN-93预处理2 h后,再进行其它处理。倒置显微镜观察各组H9c2心肌细胞的形态变化,CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测各组培养基中LDH的活性,Western blot法检测Ca MKII及其底物受磷蛋白(phospholamban,PLN)的磷酸化水平以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,TUNEL染色和流式细胞术观察细胞凋亡。结果:与control组相比,KN-93组各项指标均无显著性差异;H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力明显降低,培养基中LDH活性明显升高(P<0.01),Ca MKII及PLN的磷酸化水平和cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P<0.01),TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率显著增加(P<0.01);1μmol/L KN-93干预H/R可明显改善细胞形态,增加细胞活力,降低培养基中LDH活性(P<0.01),减少Ca MKII和PLN的磷酸化水平以及cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),降低TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率(P<0.01)。结论:Ca MKII通过介导细胞凋亡参与H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤。

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅰ——对血小板聚集率和粘附率的作用

目的 通过研究PLC对家兔血小板粘附率和聚集率的作用 ,以探讨PLC对血小板功能的影响。方法 家兔麻醉后 ,经十二指肠给予阴性对照辅料 ,阳性对照ASA和 6种剂量的PLC ,于给药前及给药后 1、2、4h颈动脉取血测定以ADP、AA、Collagen为诱导剂时的血小板聚集率 ,同时用玻球法测定血小板的粘附率。结果 PLC 10 0、 2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附率无明显影响。PLC 4 0 0～ 10 0 0IU·kg-1可显著地降低血小板粘附率 ,并呈现一定的剂量效应依赖关系。同一剂量PLC组给药后 1、2、4h时相比P <0 0 5。PLC10 0～ 10 0 0IU·kg-16种剂量组在用ADP、AA、Collagen诱导时 ,均可显著地抑制血小板聚集 ;与阴性对照辅料组相比P <0 0 5 ,与阳性对照组相比 ,在ADP诱导时 ,10 0IU·kg-1组的抑制较弱 (P <0 0 5 ) ,而 80 0、10 0 0IU·kg-1组的抑制较强 (P <0 0 5 ) ,并呈一定的剂量效应和时间效应关系 ;而在AA诱导时 ,PLC各组在给药后 2、4h时的抑制率与ASA的相当 ,无明显剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系 ;在Collagen诱导时 ,PLC各组的抑制作用均弱于ASA(P<0 0 5 ) ,无明显的剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系。结论 ①PLC经十二指肠给药 ,10 0、2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附性无明显影响 ,而

磷酯酶C对家兔血小板聚集和超微结构的影响

目的 应用电镜研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对家兔血小板聚集和超微结构的影响 ,以探讨用药后PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 家兔颈动脉插管取血 ,制备PRP ,将其分为 4组 :①空白对照组 ;②生理盐水组 ;③ 0 5UPLC组 ;④ 2 5UPLC组。 2～ 4组分别用ADP诱导聚集 ,测出其聚集抑制率 ,各组分别制成超薄切片样品进行电镜观察、摄片。结果 0 5、2 5UPLC明显抑制血小板聚集反应 ,聚集抑制率分别为 86 0 3 %± 12 6%和 82 47%±5 49% ;0 5UPLC抑制血小板形成伪足 ,α颗粒和致密颗粒较多 ,OCS管腔较小 ,其超微结构较生理盐水组变化小 ;2 5UPLC处理血小板的形态结构和超微结构与空白对照组无差异 ,血小板呈圆形或椭圆形 ,边缘光滑 ,无伪足样突起 ,α颗粒、致密颗粒、OCS等正常分布于胞质中。结论 PLC明显抑制ADP诱导的血小板聚集反应及其超微结构的改变 。

磷酯酶C对人血小板细胞质游离钙离子浓度的影响

目的 测定磷酯酶C(phospholipaseC ,简称PLC ,下同 )对静息状态和激活状态下人血小板胞质游离钙离子浓度的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 将健康成人的洗涤血小板用荧光指示剂Fura 2 /AM进行负载 ,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理荧光负载后的血小板 ,采用双波长荧光分光光度法分别测定经过不同处理后的血小板在静息状态和以ADP为诱导剂时的激活状态下的胞质游离钙离子浓度 [Ca2 + ]i。结果 以健康成人血为样品时 ,经生理盐水、ASA 334μmol·L-1、2 5、3 75、5、10和 2 0UPLC·ml-1处理后的血小板 ,在静息状态下测得的胞质游离 [Ca2 + ]i 浓度 (nmol·L-1)分别为15 2 5 5± 15 0 7,131 6 3± 15 5 8,14 0 2 7± 12 0 3,139 4 8± 1 73,12 1 11± 9 5 8,116 6 2± 15 96和 10 7 2 0± 17 0 7,而以ADP为诱导剂激活血小板后测得的胞质游离 [Ca2 + ]i(nmol·L-1)分别为 90 2 6 2± 94 74 ,6 87 99± 6 2 86 ,810 99± 72 37,70 1 73± 2 1 37,4 2 9 6 7± 71 5 9,342 82± 4 4 86和 2 6 3 2 7± 2 5 4 6。以生理盐水作为对照 ,ASA 334μmol·L-1、2 5、3 75、5、10和 2 0UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板胞质 [Ca2 + ]i 的抑制率I(% )分别为 2 5

高产磷酯酶C菌株筛选及其抗血小板功能的研究

在湖北省、湖南省、江苏省、山东省、广东省 15 6个点采土样 12 6 8份 ,利用卵黄琼脂的LB培养基初筛获得产生乳白色晕圈的菌株 6 48株 ;再用卵黄琼脂滤纸圆片检测获得产生乳白色晕圈和透明圈菌株 2 6 6株 ;这些菌株用卵黄琼脂杯蝶法筛选出产生大于 13 0mm乳白色晕圈及少量透明圈共 73株 ,经过菌生物量、卵黄杯碟法和抗兔血小板聚集率的测定 ,从 73株菌中筛选出 15株 ,菌号为 :183,198,2 47,42 4,5 87,5 96 ,6 92 ,744 ,75 4 1,791 2 ,779,970 ,998,110 7,1182 ;将此 15菌株经菌生物量、卵黄琼脂杯碟法、NPPC法和抗人血小板聚集率的测定 ,从中选出 75 4 1,779,970 ,110 7四株菌进行分类鉴定和已知菌CW W 90 3菌对照比较的研究。

高产磷酯酶C菌株的诱变选育

在前面进行的高产磷酯酶C(PLC)菌株筛选、分类鉴定及其抗血小板功能研究的基础上,对选育出的高产PLC菌株BacilluscereusShenZhen7541进行了紫外线和Co60γ射线诱变处理,以期提高其产PLC的水平,从而有利于PLC的纯化制备。B.cereus7541经过三次紫外线照射及两次Co60γ射线辐射诱变处理,通过分离与卵黄琼脂杯碟法及NPPC法酶活检验筛选,最终获得了三株高产PLC突变菌株9287、9289和5612,其产PLC酶活水平分别达到14.878±1.428u/mL、16.450±0.793u/mL、16.400±0.967u/mL,较原始出发菌株B.cereus7541产酶水平(5.803±0.793u/mL)分别提高了2.879、3.236和3.226倍。经t值检验,三株菌产PLC水平与7541差异均达极显著(P<0.001)。

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅱ——对血小板释放和代谢的作用

目的 通过检测PLC对家兔血小板释放产物血栓素A2 (TXA2 )、代谢产物前列环素 (PGI2 )以及出血时间的影响 ,以探讨PLC抗血小板聚集的作用。方法 运用放射免疫方法测定以ADP、AA、collagen为诱导剂时 ,PLC对血小板TXB2 、6 Keto PGF1α生成量的影响。常规方法测定PLC对家兔出血时间 (BT)的影响。结果 6种剂量PLC均能延长出血时间 ,但在给PLC 4h时 ,BT恢复至给药前水平 (P >0 0 5)。以ADP、AA、Collagen为诱导剂时 ,6种剂量的PLC能显著降低TXB2 的生成 (P <0 .0 5) ;以AA为诱导剂时 ,PLC 10 0U·kg- 1及以collagen为诱导剂时PLC 10 0U·kg- 1和PLC 2 0 0U·kg- 1其对TXB2 的生成的抑制作用较ASA组弱 (P <0 0 5) ;以ADP为诱导剂时PLC 10 0～ 40 0U·kg- 1,以AA为诱导剂时PLC 2 0 0～ 60 0U·kg- 1和以collagen为诱导剂时PLC 40 0～ 80 0U·kg- 1其对TXB2 的生成的抑制作用与ASA组相当 (P >0 0 5) ;以ADP为诱导剂时PLC 60 0～ 10 0 0U·kg- 1、以AA为诱导剂时PLC 80 0～ 10 0 0U·kg- 1和以collagen为诱导剂时PLC10 0 0U·kg- 1其对TXB2生成的抑制作用强于ASA组 (P <0 0 5)。 6种剂量的PLC组均明显增加 6 酮 PGF1α的生成量 (P <0 0 5) ,其作用强于ASA组 (P <0 0 5) ,并存在剂量效应关系和时间效?

蜡状芽孢杆菌深圳菌株754-1产磷酯酶C培养条件的优化研究

通过单因素试验和正交试验,以蜡状芽孢杆菌(Bacilus cereus)深圳菌株754-1产磷酯酶C(PLC)在卵黄平板上形成的乳白色晕圈的直径大小作为考察指标,对影响754-1产PLC的各因素进行了初步研究。结果表明,754-1产PLC的最佳培养条件为:蛋白胨1.0%,牛肉膏0.3%,酵母膏0.2%,NaCl 0.5%,Zn2+0.1 mmol.L-1,卵黄5.0%,接种量0.5%,发酵温度32℃,培养时间12 h。

磷酯酶C抗实验性血栓形成和促纤溶作用

研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对实验性血栓形成和纤溶功能的影响。方法 :运用下腔静脉结扎法制造大鼠血栓形成模型 ,研究PLC对实验性血栓形成的影响并与尿激酶 (UK)比较 ;运用纤维蛋白平板法、双缩脲法、加钙法研究PLC对人和家兔体内、外纤溶功能的影响。结果 :PLC 173U kg与对照组相比可明显降低血栓的重量和长度 (P <0 .0 5 ) ,但对血栓形成率作用不明显 ,其作用比UK 2 2 2U kg稍弱 ;PLC能溶解标准、加热纤维蛋白平板 ,表现出较强的促纤溶活性 ;PLC在体外能显著降低人、家兔血浆纤维蛋白原 (Fg)和血浆优球蛋白溶解时间 (ELT)(P <0 .0 5 ) ;PLC在体内能显著降低家兔Fg和ELT(P <0 .0 5 )。结论 :PLC具有抗实验性血栓形成和促纤溶活性的功能。

佛波酯处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶C-γ2的意义

目的探讨佛波酯(TPA)处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶Cγ-2(PLCγ-2)的意义。方法通过DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌MGC80-3细胞的影响;借助核浆分离手段获得胃癌细胞核浆蛋白,并通过免疫印迹(Western blotting)检测TPA对PLCγ-2蛋白表达水平影响;通过免疫荧光技术处理,激光扫描共焦显微镜观察胃癌细胞内PLCγ-2蛋白的定位和转运;用PLCγ-2的抑制剂(U73122)预处理细胞,免疫印迹和激光扫描共焦显微镜分别检测其对TPA作用胃癌细胞内PLCγ-2的影响;以及荧光显微镜下观察分析U73122是否影响TPA对胃癌细胞的作用。结果TPA诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡;同时TPA提高PLCγ-2蛋白表达水平,并诱导其发生核浆转运;其抑制剂(U73122)可以降低TPA对PLCγ-2蛋白表达水平的作用,但并不能影响TPA诱导胃癌细胞凋亡;而TPA诱导的PLCγ-2核浆转运却没有被PLCγ-2抑制剂(U73122)阻止。结论尽管TPA提高了胃癌MGC80-3细胞中PLCγ-2表达水平,但PLCγ-2表达水平和TPA诱导的胃癌MGC80-3凋亡没有直接关系,而其核浆转运可能与TPA诱导的胃癌细胞凋亡相关。

TRPA1通过PLC/PKC信号通路对偏头痛大鼠的行为学和疼痛敏感性的影响

目的 探讨瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)通过磷酯酶C(PLC)/蛋白激酶C(PKC)信号通路对偏头痛大鼠的行为学和疼痛敏感性的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、TRPA1敲低组(腺病毒包装的TRPA1 siRNA载体)、TRPA1空载组(空慢病毒载体)、TRPA1敲低+PMA(PKC激活剂)组,每组12只,分组以腺病毒包装的TRPA1 siRNA载体、空慢病毒载体及PMA干预处理24 h后,模型组与给药干预组皮下注射10 mg/kg硝酸甘油以制备偏头痛大鼠模型,对照大鼠组皮下注射等剂量0.9%氯化钠溶液,然后以qRT-PCR实验检测除TRPA1敲低+PMA组外其余5组大鼠脑组织及血液中TRPA1 mRNA的表达;观察5组大鼠行为,记录其耳红消失时间及一段时间内挠头次数、爬笼次数;检测5组大鼠机械性疼痛及温度痛阈;酶标仪检测5组大鼠血清促炎因子前列腺素E2(PGE2)、白介素(IL)-6及抗炎因子IL-10水平;免疫印迹实验检测5组大鼠脑组织PLC/PKC通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组、TRPA1空载组大鼠缩头阈值、热刺激潜伏期、血清IL-10水平显著降低(P<0.05),脑组织及外周血中TRPA1表达、耳红消失时间、挠头次数、爬笼次数、动态痛觉超敏评分、血清PGE2、IL-6水平、脑组织PLC/PKC通路蛋白p-PLC/PLC、p-PKC/PKC显著升高(P<0.05)。与模型组比较,TRPA1敲低组大鼠缩头阈值、热刺激潜伏期、血清IL-10水平升高(P<0.05),脑组织及外周血中TRPA1表达、耳红消失时间、挠头次数、爬笼次数、动态痛觉超敏评分、血清PGE2、IL-6水平、脑组织PLC/PKC通路蛋白p-PLC/PLC、p-PKC/PKC降低(P<0.05);TRPA1空载组大鼠各指标无显著变化(P>0.05)。与TRPA1敲低组比较,TRPA1敲低+PMA组大鼠缩头阈值、热刺激潜伏期、血清IL-10水平降低(P<0.05),耳红消失时间、挠头次数、爬笼次数、动态痛觉超敏评分、血清PGE2、IL-6水平、脑组织PLC/PKC通路蛋白p-PKC/PKC升高(P<0.05)。结论 TRPA1可通过调控PLC/PKC信号通路介导大鼠偏头痛的发生,下调TRPA1表达可通过抑制PLC/PKC信号通路激活减轻炎症,以降低大鼠疼痛敏感性,最终改善头疼症状。

磷酯酶C纯化的研究

采用硫酸铵分级盐析,DEAE-SephadexA-50离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶过滤层析从粘质沙雷氏菌发酵上清液中分离纯化磷脂酶C,纯化倍数为59.28,收率为20.35%.