精神分裂症患者磷酸丝氨酸氨基转移酶1基因多态性与利培酮疗效关联性研究

目的观察精神分裂症患者磷酸丝氨酸氨基转移酶1基因多态性与利培酮疗效的相关性。方法精神分裂症患者158例,按隔日加量法则,利培酮逐渐加至治疗剂量(2～6 mg.d-1),根据不良反应情况调整剂量,平均治疗量(3.82±0.95)mg.d-1。出现药物不良反应时采取对症治疗、减量或换药治疗。观察6周,在第0,6周评定阳性与阴性量表评分(PANSS)。采用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术测定磷酸丝氨酸氨基转移酶1基因的rs69287125、rs137824326多态性分型,比较不同分型患者的利培酮疗效。结果 rs69287125和rs137824326位点基因型和等位基因频数在男女患者中差异无统计学意义(P>0.05);治疗6周后,rs69287125位点PANSS总分、阳性因子分、阴性因子分在三个不同基因型中差异有统计学意义(P<0.05),A/A基因型分值最高;rs137824326位点PANSS总分、阳性因子分、阴性因子分、一般精神病理分在3个不同基因型中差异有统计学意义(P<0.05),A/A基因型分值最高。结论精神分裂症患者磷酸丝氨酸氨基转移酶1基因多态性与利培酮疗效存在关联。

磷酸丝氨酸氨基转移酶1基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的探讨磷酸丝氨酸氨基转移酶1（PSAT1）基因多态性与精神分裂症的关联性。方法收集西安市精神卫生中心精神分裂症患者158例作为研究组，其生物学父母316例作为对照组。运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术，对PSAT1基因的rs69287125、rs137824326多态性分型，进行精神分裂症与磷酸丝氨酸氨基转移酶1基因多态性的关联分析和单体型相对风险率分析。结果rs69287125等位基因与精神分裂症相关联（P=0．011），其中等位基因G是保护因素（Z=-2．31），A为危险因素（Z=2．31）；rs137824326等位基因与精神分裂症相关联（P=0．007），其中等位基因G是保护因素（Z=-2．54），A为危险因素（z=2．54）。rs69287125-rs137824326单体型的A／A、G／G与精神分裂症有关联（P=0．021，0．015，Z=2．16，-1．85）。结论PSAT1基因与精神分裂症相关联。

甲醇利用菌MB200丝氨酸乙醛酸氨基转移酶基因(sga)的克隆、突变及对产L-丝氨酸的影响

sga基因是大多数Methylobacteriumsp.中丝氨酸循环途径里的一个关键酶基因,与单碳化合物的同化及二碳化合物的代谢有着密切的关系。根据已报道的M.extorquensAM1的sga基因序列,合成寡核苷酸引物,用本实验室保存的甲醇利用菌M.sp.MB200的染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增出sga基因,测序分析表明该基因与M.extorquensAM1的sga基因在核苷酸水平上有93%的同源性,氨基酸水平上具有85%的同源性。利用自杀质粒pK18mob构建含有sga基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合后导入原始菌株MB200中,经过进一步同源单交换,sga基因被pK18mob插入突变,利用PCR和Southern杂交进行验证,选择发生正向突变的突变株MB200sTB用于进一步研究分析。分析结果表明突变菌株的丝氨酸乙醛酸氨基转移酶(SGAT)的酶活性消失,同时失去了在以甲醇为唯一碳源的培养基上生长的能力,不能再合成L-丝氨酸,但仍能以二碳化合物和多碳化合物进行生长。

新生儿高氨血症11例临床及基因变异分析

目的分析11例新生儿高氨血症患儿临床特征、基因变异情况和病因。方法回顾性分析2016年7月至2022年8月新乡医学院第一附属医院新生儿科及甘肃省妇幼保健院收治的11例新生儿期发病的高氨血症患儿临床资料、实验室检查及基因检测结果,并对其中2例再生育家系进行产前基因诊断。结果11例患儿均表现为反应差,尚有惊厥、意识障碍及呕吐。5例患儿为OTC基因变异所致鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症(OTCD),分别为大片段缺失变异、错义变异及剪切变异;4例患儿为CPS1基因变异所致氨基甲酰磷酸合成酶1缺乏症(CPS1D),分别为无义变异、错义变异及剪切变异;1例为ASS1基因变异所致的瓜氨酸血症Ⅰ型(CTLN1),为错义变异;1例为基因检测阴性的新生儿暂时性高氨血症(THAN)。结论对临床新生儿高氨血症需警惕遗传性疾病可能,及时基因检测可明确诊断,积极给予血液净化和肝移植治疗可改善神经发育预后。

小麦-长穗偃麦草抗白粉病异代换系中一个新的磷酸丝氨酸氨基转移酶基因的克隆

以抗白粉病的小麦-长穗偃麦草异代换系山农551为材料,在接种小麦白粉病菌48h制备样品电子显微镜观察,结果表明山农551在白粉病菌侵染早期抑制孢子萌发和菌丝生长.在接种病菌48h后提取RNA,利用cDNARDA和RACE技术克隆WRP1和RPW2共2个基因.BLAST分析表明该二基因均是尚未被克隆的新基因.WRP1没有大的ORF;RPW2的翻译产物含有保守的氨基转移酶结构域,与多种生物的磷酸丝氨酸氨基转移酶有同源序列,可以认为是一新的磷酸丝氨酸氨基转移酶基因.Northern杂交结果显示在小麦白粉病侵染早期RPW2在山农551的叶片中就开始表达.RPW2探针同山农551及其亲本鲁麦5号、济南13和长穗偃麦草基因组DNA进行Southern杂交结果显示,探针与鲁麦5号和济南13无杂交信号,而与山农551和长穗偃麦草都有较强的杂交信号,这表明RPW2来源于长穗偃麦草基因组.

磷酸丝氨酸氨基转移酶1介导肺腺癌细胞粘附及其机制探究

目的:探究丝氨酸生物合成途径(SSP)关键酶磷酸丝氨酸氨基转移酶1(PSAT1)与肺腺癌细胞粘附的关系,并初步探讨其作用机制。方法:使用si RNA抑制PSAT1蛋白表达,观察肺腺癌细胞形态以及粘附变化,同时过表达PSAT1,反向观察PSAT1对肺腺癌细胞粘附的影响。初步探究其作用机制,采用免疫共沉淀-蛋白质谱法寻找与PSAT1直接相互作用的蛋白,筛选差异蛋白,并在过表达细胞体系中验证。结合临床公共数据库分析互作蛋白与患者预后关系。结果:发现敲低PSAT1引起肺腺癌细胞形态改变;敲低PSAT1抑制肺腺癌PC9、HCC827细胞粘附;过表达PSAT1增强PC9及HCC827细胞粘附;免疫共沉淀-蛋白质谱检测到2560个可能与PSAT1结合的蛋白,进一步通过免疫共沉淀-免疫印迹法验证PSAT1过表达使细胞中与间皮素(MSLN)结合显著上升;通过临床样本数据观察PSAT1与MSLN共同高表达的肺腺癌患者,其预后更差。结论:本文首次报道PSAT1可能通过与MSLN等蛋白-蛋白相互作用影响肺腺癌细胞粘附的新机制,提示PSAT1有望成为潜在抗肿瘤靶点,靶向其相互作用蛋白能为小分子抑制剂设计及患者个体化治疗提供新思路。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

金属烤瓷冠对龈沟液中IL-1β、AST及ALP水平的影响

目的:了解不同金属烤瓷冠对局部牙周组织造成的影响,以及龈沟液中白细胞介素(IL)-1β、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平与牙周组织健康状况的关系。方法:选择28例接受金属烤瓷冠修复患者的上颌切牙(共34颗)为实验对象,其中镍铬合金烤瓷冠19颗,金铂合金烤瓷冠15颗。以患牙的对侧同名健康牙为对照组,在烤瓷冠戴入6～8个月后复诊,并对龈沟液中IL-1β、AST、ALP水平进行分析。结果:镍铬合金烤瓷组IL-1β及ALP水平均高于对照组,差异有统计学意义;金铂合金烤瓷组IL-1β、ALP与对照组差异无统计学意义;两种金属烤瓷冠AST水平均普遍高于对照组,差异有统计学意义。结论:镍铬合金烤瓷冠对牙周组织的不利影响较明显,而金铂合金烤瓷冠修复前后各项指标变化不明显。龈沟液中IL-1β、AST及ALP的浓度水平可以较敏感地反应金属烤瓷冠对牙周组织的影响。

浮萍植物中一个衰老下调基因的初步鉴定(英文)

本文报道对一个衰老下调基因的鉴定 .从绿色和正在衰老的紫萍叶状体组织中分别提取总 RNA,然后使用一个 oligo-d T引物进行逆转录合成 c DNA.c DNA用 oligo-d T和简并引物进行 PCR扩增 ,然后进行琼脂糖凝胶电泳 .电泳后发现 ,一条 c DNA带存在于由绿色组织而不存在于由正在衰老的组织所得到的样品中 .将这一 c DNA回收 ,克隆进 T-vector并且进行了测序 .Northern blot分析表明 ,该 c DNA对应基因的表达受衰老调节而减少 .根据第一个 c DNA序列设计了一个特异性引物 ,进行 RT-PCR扩增 ,并且克隆到另外一个部分 c D-NA.测序结果表明 ,第二个克隆具有与第一个 c DNA相重叠的 40 bp的片段 .将第一个 c DNA序列与删去 40 bp重叠区的第二个 c DNA序列连接 ,我们得到一个 3 2 2个核苷酸的 c DNA3′端部分序列 .用 BLASTN程序将该序列翻译后与 NCBI non-redundant database中已知的蛋白进行比较 ,结果表明所克隆的 c DNA代表的基因与光呼吸途径的丝氨酸 -乙醛酸氨基转移酶编码基因有很高的相似性 .

NaAsO_(2)染毒HaCaT细胞中丝氨酸合成途径关键酶的表达及其作用

[背景]丝氨酸合成途径(SSP)关键酶在肿瘤的生长、增殖、侵袭中发挥重要作用,但其在砷致癌中的作用尚不明确。[目的]以人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)和NaAsO_(2)所致恶性转化HaCaT(T-HaCaT)细胞为研究对象,观察NaAsO_(2)染毒对SSP关键酶[如磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、磷酸丝氨酸转氨酶1(PSAT1)和磷酸丝氨酸磷酸酶(PSPH)]表达及对细胞增殖、迁移能力的影响,探讨SSP关键酶在砷致癌中的作用。[方法](1)取课题组前期构建的T-HaCaT细胞,实验分组为传代对照(0μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、THaCaT(0.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、NCT503(PHGDH抑制剂,25μmol·L^(-1)组、NCT503(25μmol·L^(-1)+T-HaCaT(0.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组。Western blotting法检测传代对照组和T-HaCaT组细胞的SSP关键酶蛋白表达水平,CCK8法和细胞划痕试验分别检测各组细胞的增殖率和迁移率。(2)取生长良好的对数生长期HaCaT细胞,以0、0.625、1.25和2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2)染毒细胞0、24、48和72 h,检测细胞增殖率和SSP关键酶的蛋白表达水平。后续实验给予HaCaT细胞25μmol·L^(-1)NCT503预处理6 h后,用2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2)继续染毒72 h,实验分组为对照(0μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、染毒(2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、预处理组(25μmol·L^(-1)NCT503)、预处理(25μmol·L^(-1)NCT503)+染毒(2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组,检测各组细胞的增殖率。[结果] T-HaCaT组细胞中PHGDH的蛋白表达水平是传代对照组的1.60倍(P <0.05),其增殖率(177.51%±14.69%)和迁移率(53.85%±0.94%)高于传代对照组[(100.00%±0.00%)、(24.30%±2.26%)](均P <0.05)。NCT503干预后,NCT503+T-Ha CaT组细胞的增殖率(144.97%±8.08%)和迁移率(35.80%±0.99%)较T-HaCaT组细胞降低(均P <0.05)。NaAsO_(2)染毒72 h后HaCaT细胞的增殖率随染毒浓度的增加而增加(r=0.862,P <0.05),与此一致,各染毒组HaCaT细胞中SSP关键酶的蛋白水平均较对照组表达增加(均P <0.05)。2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2)染毒后的HaCaT细胞增殖率随染毒时间的延长而增加(r=0.775,P <0.05),与细胞中PHGDH蛋白表达水平的变化一致。NCT503干预后,预处理+染毒组细胞增殖率低于染毒组细胞(P <0.05)。[结论] SSP关键酶可能在NaAsO_(2)所致的T-HaCaT细胞增殖中扮演重要的角色。

小桐子光呼吸转氨酶GGAT与SGAT基因的克隆及原核表达分析

谷氨酸:乙醛酸氨基转移酶(GGAT)与丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶(SGAT)是植物光呼吸中催化乙醛酸转氨基生成甘氨酸的关键限速酶。基于同源序列比对的方法,从小桐子基因组中鉴定到1个GGAT基因(命名为JcGGAT)与1个SGAT基因(命名为JcSGAT),基因长度分别为5 113和4 526 bp,分别编码481和401 aa的酶蛋白。氨基酸序列分析显示,小桐子GGAT与SGAT蛋白的C端过氧化物酶体定位信号肽分别为-SRM-与-SRI-。启动子区顺式作用元件分析表明,小桐子GGAT基因重点响应非生物胁迫信号如厌氧、干旱,而SGAT基因主要响应激素信号如脱落酸、赤霉素及茉莉酸甲酯。qRT-PCR表达分析显示, GGAT基因与小桐子的抗冷性直接相关。随着低温处理时间的延长,其表达量逐渐升高,并且在低温处理12 h时达到最大表达量,较对照显著提高4.74倍(P<0.01)。构建了小桐子GGAT与SGAT基因原核表达载体pGEX-4T-1-JcGGAT与pET-28a-JcSGAT,并在BL21(DE3)中诱导表达,分别得到81.0和47.8 kDa的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。

养肝活血汤对酒精性肝病大鼠的影响

目的:探讨养肝活血汤对酒精性肝病大鼠的影响。方法:将SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、养肝活血汤组(12.8 g·kg-1)、硫普罗宁钠组(60 mg·kg-1)。检测各组大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransfease,ALT)水平,Western Blot法检测肝脏中磷酸化的c2Jun氨基末端激酶(phosphorylation-c2 JunN2 terminalkinase,p-JNK)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清中AST、ALT均明显升高(P<0.05);模型对照组大鼠肝脏中p-JNK、IL-1β、IL-6的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。与模型组比较,养肝活血汤组和硫普罗宁钠组大鼠血清中AST、ALT明显降低(P<0.05),肝脏中p-JNK、IL-1β、IL-6的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:养肝活血汤治疗酒精性肝病,能够抑制大鼠肝细胞IL-1β和IL-6的表达。

川芎嗪通过AMPK/SIRT1通路介导的自噬在急性肝衰竭中的作用及其机制研究

目的 探讨川芎嗪对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠的作用及其机制。方法 将C57BL/6J小鼠随机分对照组、模型组、川芎嗪组、川芎嗪联合SIRT1抑制剂(EX527)组,每组10只。通过ip LPS/D-GalN构建急性肝衰竭小鼠模型,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平;苏木精–伊红(HE)染色检测肝组织病理学变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β和环氧化酶-2(COX-2)mRNA水平;检测肝组织中氧化应激因子谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blotting检测肝组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)、磷酸化单磷酸腺苷活化蛋白激酶α(p-AMPK)α/AMPKα蛋白和自噬相关蛋白人微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/LC3-I、p62的水平。结果 与模型组比较,川芎嗪组小鼠血清ALT和AST水平均显著降低,肝细胞坏死区域以及炎症细胞浸润明显减少,肝组织中MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2 mRNA和p62蛋白水平均显著降低,SOD、GSH、SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、LC3-II/LC3-I蛋白水平显著升高(P<0.05)。EX527处理后显著逆转了川芎嗪对急性肝衰竭小鼠的作用。结论 川芎嗪通过抑制LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应发挥肝脏保护作用,其机制可能与AMPK/SIRT1信号通路和自噬有关。

酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连接蛋白及血清生化指标的影响

目的:观察酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连结蛋白及血清生化指标的影响。方法:12只雄性大鼠随机平均分为对照组和酸枣仁组。酸枣仁组给予酸枣仁浸膏,3 mg·(kg·d)-1,连续灌胃3 d;对照组给予等量的生理盐水。腹主动脉取血,分离血清;采用MDCK-MDR1细胞模型,培养3 d至融合,体积分数10%含药血清孵育12 h后进行F-actin染色,在倒置荧光显微镜下观察酸枣仁含药血清对MDCK-MDR1细胞紧密连接蛋白的影响;并采用Mindray BS-220全自动生化分析仪对含药血清总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和肌酐等生化指标进行分析。结果:F-actin染色结果显示:对照组细胞紧密连接蛋白F-actin形态完整,形成肌动蛋白丝呈环形分布于细胞周围,提示细胞紧密连接完好,酸枣仁含药血清处理后,F-actin荧光无明显变化,细胞周边肌动蛋白丝带无明显异常。血清生化分析结果显示:酸枣仁组与对照组比较,总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素等指标差异统计学意义(P>0.05);酸枣仁组天门冬氨酸氨基转移酶含量(162.2±3.04)U·L^(-1),高于正常对照组(146.0±4.9)U·L^(-1)(P<0.05);酸枣仁组碱性磷酸酶和肌酐含量较对照组显著下降(P<0.001)。结论:酸枣仁含药血清对于细胞紧密联接蛋白无显著影响,但可显著提高天门冬氨酸氨基转移酶,提示酸枣仁可能通过影响体内天门冬氨酸氨基转移酶的活性而发挥抗焦虑作用。

新疆哈密瓜AT2基因的克隆及初步功能验证

本研究利用RT-PCR技术从抗霜霉病哈密瓜(Cucumis melo L.)品种MR-1中克隆到AT2基因,其整编码区为1 229 bp,编码401个氨基酸,同源比对结果为99%,将其编码的丝氨酸乙醛酸转氨酶蛋白序列与多种物种进行系统进化树分析,结果显示,甜瓜与黄瓜SGT蛋白同源性较高,遗传距离最近,推测在同属中该蛋白进化相对保守。在线分析表明SGT蛋白不含信号肽及跨膜区,即该蛋白为非跨膜蛋白。RT-PCR分析表明AT2基因随着植株生长时期不同表达量不同,开花期表达量最高,幼苗期至开花期表达量呈上升趋势;且不同组织中,叶片表达量显著高于茎、根。构建了p CAMBIA2300-AT2植物表达载体,运用农杆菌介导法转化烟草,抗性筛选获得7株阳性转基因烟草;经q RT-PCR检测,AT2基因在不同株系转基因烟草T0代中表达量均高于野生型。通过对转基因烟草进行抗病性鉴定,转基因烟草对靶斑病、赤星病的抗性高于野生型烟草。本研究表明,过表达AT2基因能够提高烟草对部分真菌性病害的抗性。

心境障碍相关发病机制的研究进展

介绍如谷氨酸受体离子化NMDA1受体基因,神经营养因子,血浆同型半胱氨酸水平,N5,N10一亚甲基四氢叶酸还原酶,儿茶酚邻位甲基转移酶基因,糖原合成酶激酶3,血清肌酸磷酸激酶活性等在心境障碍发病机制的研究进展。

蛋白分子O-糖基化的研究进展

蛋白分子的氧连接糖基化(O-糖基化)修饰是生物体内必不可少的转录后化学修饰之一,其作用方式类似磷酸化,并且两者之间相互作用,共同调节生物大分子的活性。O-糖基化修饰在生物体的转录、翻译、核运输、细胞骨架的形成以及调节细胞器的功能中发挥着重要的作用。通过影响细胞信号的传导,在细胞吞噬、炎性细胞的迁移以及细胞内大分子物质的循环中也起着重要作用。该文主要通过介绍蛋白分子O-糖基化修饰的基础理论以及O-糖基化修饰作用的几个方面,来简要阐述O-糖基化修饰在生物体内发挥的作用。