磷酸丝氨酸转氨酶1在非小细胞肺癌中的表达水平和预后关系分析

目的探讨磷酸丝氨酸转氨酶1(phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1)在非小细胞肺癌组织中的表达水平,并分析PSAT1表达与非小细胞肺癌预后的相关性。方法选择2013年12月—2015年10月确诊的非小细胞肺癌患者89例为观察组,同期25例肺良性病变患者为对照组。分别采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测和比较两组PSAT1 mRNA表达水平和蛋白阳性表达率;并分析PSAT1表达与患者病理特征的关系。结果观察组PSAT1 mRNA和蛋白阳性表达率显著高于对照组(P<0.05)。PSAT1蛋白表达与肿瘤分化程度、TNM分期以及是否淋巴结转移有相关性(P<0.05);而与患者的性别、年龄和肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论 PSAT1在非小细胞肺癌组织中呈过表达状态,检测PSAT1的水平对预测非小细胞肺癌进程及患者预后有重要意义。

高表达磷酸丝氨酸转氨酶1抑制胃癌细胞增殖的实验研究

目的:代谢重塑是肿瘤重要特征之一,多种关键代谢酶在肿瘤发生、发展过程中功能异常。磷酸丝氨酸转氨酶1(phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1)催化磷酸丝氨酸生成,促进了肺腺癌、胶质瘤、乳腺癌、结肠癌等肿瘤的恶性发展。本研究分析PSAT1在胃癌中的生物功能。方法:利用Kaplan-Meier plotter数据库分析PSAT1与胃癌患者预后的关系;利用RT-qPCR检测PSAT1在胃癌细胞株中的mRNA表达水平;构建PSAT1慢病毒高表达载体,在胃癌BGC823和NCI-N87细胞中高表达PSAT1;通过CCK-8、克隆形成和裸鼠皮下成瘤试验分析PSAT1对胃癌细胞增殖能力的影响。结果:Kaplan-Meier plotter数据库分析显示PSAT1高表达的胃癌患者有更好的总生存期(P=1.7e-6,HR=0.52)。在胃癌KATOⅢ、AGS、SNU16、NCI-N87、MKN45、BGC823、MGC803和SGC7901细胞中,PSAT1的表达水平低于永生化的胃上皮细胞GES1。CCK8试验结果显示PSAT1高表达后可以显著抑制胃癌BGC823(120 h,P<0.0001)和NCI-N87(96 h,P<0.0001)细胞的体外增殖能力。克隆形成试验同样证实PSAT1可以抑制胃癌BGC823(P=0.0296)和NCI-N87(P=0.0365)细胞的克隆形成能力。进一步动物实验表明PSAT1抑制了BGC823细胞在裸鼠体内的增殖(n=7,P=0.0091)。结论:PSAT1高表达提示胃癌患者有更好的预后;PSAT1在多数胃癌细胞株中的表达低于GES1细胞;PSAT1高表达可显著抑制胃癌细胞体外、体内的增殖。

丝氨酸代谢在胶质瘤中的研究进展

神经胶质瘤是颅内常见恶性肿瘤,治疗难度大,且预后不佳。因此,胶质瘤的致病机制和治疗策略的研究是当前神经肿瘤领域的热点。丝氨酸是一种重要的非必需氨基酸,不仅为细胞内蛋白质、核酸和脂质的合成提供必要的前体,还可以为肿瘤细胞中氧化还原稳态的维持提供还原力,在细胞的生理和病理过程中发挥重要作用。近年来,有研究发现丝氨酸代谢与神经胶质瘤发展过程密切相关。本文旨在对丝氨酸在胶质瘤进展中的作用、潜在机制以及治疗策略做一综述。

磷酸丝氨酸氨基转移酶1在食管癌组织的表达及其对细胞增殖和耐药的影响

目的探讨磷酸丝氨酸转氨酶1在食管癌组织中表达及对细胞增殖和耐药的影响。方法收集郑州大学第一附属医院诊治的95例食管癌临床标本及癌旁组织作为研究对象,采用蛋白质免疫印迹分析癌旁组织和食管癌组织磷酸丝氨酸转氨酶1表达水平;人食管癌细胞系Ec-9706和顺铂耐药的Ec-9706随机分为对照短发卡RNA(shRNA)组和PSAT1 shRNA组,shRNA对照/耐药组和PSAT1 shRNA/耐药组,通过体内和体外细胞增殖实验分析磷酸丝氨酸转氨酶1对细胞体外增殖能力的影响;采用流式细胞术分析不同处理细胞的凋亡水平;采用蛋白质免疫印迹分析磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Akt)、耐药相关蛋白P-gp、剪切型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平。计量数据比较采用t检验。结果癌旁组织中磷酸丝氨酸转氨酶1表达水平(0.91±0.20)明显低于食管癌组织表达水平(1.76±0.26),差异有统计学意义(t=25.230,P<0.05)。对照shRNA组细胞抑制率[(7.14±2.06)%]明显低于PSAT1 shRNA组细胞[(54.79±11.97)%],差异有统计学意义(t=9.610,P<0.05)。对照shRNA组细胞裸鼠成瘤体积和质量[(1289.19±131.71)cm^(3)、(5.36±0.67)g]高于PSAT1 shRNA组细胞[(705.66±65.88)cm^(3)、(3.27±0.26)g],差异有统计学意义(t=9.706、7.110,P<0.05)。shRNA对照/耐药组细胞抑制率[(21.80±3.39)%]明显低于PSAT1 shRNA/耐药组细胞[(41.12±3.59)%],差异有统计学意义(t=9.581,P<0.05)。shRNA对照/耐药组细胞裸鼠成瘤体积和质量[(799.52±61.71)cm^(3)、(3.68±0.51)g]高于PSAT1 shRNA/耐药组细胞[(558.62±44.97)cm^(3)、(2.07±0.27)g],差异有统计学意义(t=7.728、6.932,P<0.05)。对照shRNA组细胞抑制率[(3.78±0.81)%]明显低于PSAT1 shRNA组细胞[(26.73±4.64)%],差异有统计学意义(t=11.940,P<0.05)。shRNA对照/耐药组细胞抑制率[(16.75±4.95)%]明显低于PSAT1 shRNA/耐药组细胞[(35.04±4.05)%],差异有统计学意义(t=6.998,P<0.05)。对照shRNA组细胞磷酸化PI3K、磷酸化Akt、耐药相关蛋白P-gp蛋白表达水平(0.91±0.10、1.26±0.18、1.19±0.12)明显高于PSAT1 shRNA组细胞(0.61±0.11、0.91±0.06、0.74±0.07),差异有统计学意义(t=5.024、4.487、7.693,P<0.05)。结论磷酸丝氨酸转氨酶1在食管癌组织中表达水平显著上调,参与食管癌细胞的增殖和耐药过程。

胰腺癌组织中PSAT1表达及其介导的细胞增殖侵袭作用机制研究

目的:探讨胰腺癌磷酸丝氨酸转氨酶1(phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1)表达及其介导的增殖、侵袭作用机制。方法:采用免疫组织化学染色检测2013年7月至2017年7月98例胰腺癌组织和癌旁组织PSAT1表达,分析PSAT1表达与胰腺癌临床资料、总体生存率、无病生存率的关系。分别向胰腺癌细胞BxPC-3、SW1990转染PSAT1-siRNA,研究敲低PSAT1表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,Western blot检测敲低PSAT1对胰腺癌细胞PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达的影响。结果:PSAT1在胰腺癌组织中阳性表达率为69.4%(68/98),明显高于癌旁组织的阳性表达率5.0%(5/98),两者比较差异具有统计学意义(χ2=86.638,P<0.001)。PSAT1表达阳性率与淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);PSAT1高表达的胰腺癌患者总生存期和无病生存期明显低于PSAT1低表达患者(P<0.05)。Cox多因素结果显示,PSAT1表达是影响胰腺癌总体生存率和无病生存率的危险因素(均P<0.05)。在胰腺癌BxPC-3和SW1990细胞中,与NC-siRNA组比较,PSAT1-siRNA组细胞增殖能力、迁移能力和细胞侵袭能力明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时PSAT1-siRNA组p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显低于NC-siRNA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PSAT1在胰腺癌组织和细胞中呈高表达,PSAT1可能通过调节PI3K/Akt/mTOR通路参与胰腺癌细胞的增殖和侵袭。

杀虫剂辛硫磷诱导家蚕脂肪体蛋白的表达特征及SerB基因的组织转录活性分析

为了从蛋白质水平探讨家蚕对有机磷杀虫剂的抗性机制,采用双向电泳结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术,分析家蚕5龄中期幼虫在添食杀虫剂辛硫磷前后脂肪体蛋白的表达特征。经ImageMaster6.0软件分析表明,对照组共检测到465个蛋白点,实验组检测到396个蛋白点,其中能匹配的蛋白点有348对,匹配率为73.54%。对特征蛋白进行质谱分析,已鉴定的蛋白包括磷酸丝氨酸转氨酶(SerB)和5'-甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)。采用半定量RT-PCR分析家蚕5龄幼虫添食辛硫磷后脑、中肠、丝腺、脂肪体、精巢、马氏管等6个组织器官中SerB基因mRNA的转录水平,结果与对照组相比均呈现上调趋势,其中在脑组织的转录水平上调尤为明显,在脂肪体中的转录水平上调与其蛋白的表达上调一致。受辛硫磷诱导的影响,家蚕5龄中期幼虫脂肪体的蛋白数目减少,SerB基因在各组织器官增量表达,推测可能与蚕体对农药的代谢解毒作用有关。

大肠杆菌SerB基因的克隆及其在黄色短杆菌中的表达

磷酸丝氨酸转氨酶(Phosphoserine aminotransferase,SerB)是L-丝氨酸生物合成中的关键酶,应用PCR技术从大肠杆菌JM109(E.ColiJM109)中扩增出磷酸丝氨酸转氨酶基因,将其与表达载体pEC 7连接。通过电转化方法,将重组质粒转入黄色短杆菌(Brevibacterium flavumC-11,BfC-11)中,经酶活检测和摇瓶发酵培养,含有重组表达质粒的BfC-11B的磷酸丝氨酸转氨酶的活力和L-丝氨酸产率均比原宿主菌BfC-11有所提高,为构建L-丝氨酸高产基因工程菌的研究奠定了基础。

爱德华氏菌常规PCR检测体系的建立

根据NCBI公布的爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)磷酸丝氨酸转氨酶(phosphoserine transaminase,serC)的基因序列,设计一对特异性引物,建立了可快速而准确地检测爱德华氏菌的PCR方法,并对患病鱼组织进行了检测。研究结果表明,使用设计的引物能够扩增出与预计大小一致的124 bp的特异性片段,具有较好的检测特异性,对靶标DNA的检测灵敏度为50 pg/反应,对靶标细菌的检测灵敏度为56 cfu/反应。样品的检测结果与实际发病情况一致,表明成功建立了爱德华氏菌常规PCR检测方法,可用于爱德华氏菌病的诊断。