8-型磷酸二酯酶抑制剂PF-04957325对冈田酸诱导阿尔茨海默病小鼠认知障碍的改善作用及机制

目的探讨磷酸二酯酶8(phosphodiesterase 8,PDE8)抑制剂PF-04957325对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠学习记忆、焦虑、抑郁的影响,并对其机制进行初步探讨。方法选取21只2月龄雄性C57BL/6J小鼠进行实验,随机分为对照组、AD模型组、PDE8抑制剂组(0.1 mg·kg^(-1))。模型组和PDE8抑制剂组小鼠双侧海马定位注射OA(每侧50 ng)诱导AD模型,注射OA 2 d后,PDE8抑制剂组给予0.1 mg·kg^(-1)抑制剂,AD模型组和对照组给予等剂量溶剂,共给药21 d。给予抑制剂d 13,对小鼠学习记忆能力及焦虑抑郁行为进行相关行为学检测,HE染色观察小鼠海马DG、CA1、CA3区神经细胞形态,Western blot检测小鼠海马内不同位点磷酸化Tau蛋白水平以及PDE8/cAMP/CREB通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,AD模型组Y迷宫轮替比、新物体识别指数、被动回避逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),水迷宫穿越平台次数及在目标象限停留的时间减少(P<0.05),表现出学习记忆能力的下降,而给予PF-04957325可明显改善AD小鼠学习记忆能力;AD模型组进入旷场中央区次数及在中央区停留时间明显减少(P<0.05)、悬尾不动时间明显增加(P<0.01),提示小鼠有焦虑抑郁情况,给予PF-04957325后小鼠焦虑行为没有得到改善,对抑郁行为有一定改善;AD模型组小鼠海马DG、CA1、CA3区表现出核仁固缩、神经元排列不整齐,给予PF-04957325可缓解小鼠海马神经细胞的损伤。与对照组相比,AD模型组小鼠海马中Tau蛋白Ser199、Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显升高(P<0.01)、PDE8A及PDE8B蛋白表达量明显增加(P<0.01)、p-PKA/PKA和BDNF蛋白表达量降低(P<0.05),给予PF-04957325后Tau蛋白Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显降低(P<0.01)、PDE8A和PDE8B蛋白表达量明显降低(P<0.01)、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB和BDNF蛋白表达量明显升高(P<0.01)。结论PDE8抑制剂PF-04957325能够提高AD小鼠的学习记忆能力、降低认知功能障碍,恢复Tau蛋白功能,减轻AD小鼠海马内神经元细胞的损害,具有改善AD的作用。作用机制可能与激活PDE8/cAMP/CREB通路、抑制Tau蛋白磷酸化有关。

磷酸二酯酶4抑制剂在中枢神经系统疾病中的作用研究进展

磷酸二酯酶(PDE)通过催化细胞内的环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的水解参与调节神经元可塑性、突触发生、突触传递、记忆形成和认知功能等细胞生理过程及功能发挥。大量基础和临床研究证明PDE4抑制剂主要通过抑制cAMP水解、提高cAMP含量,增强其下游效应,从而改善中枢神经系统疾病的发生和发展。PDE4抑制剂可提高长时程增强效应、海马神经元cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化和记忆相关Arc基因的表达,从而改善认知和记忆障碍以及阿尔茨海默病样症状;通过减轻α-突触核蛋白诱导的细胞毒性,增加miR-124-3p对细胞活性的作用而抵抗帕金森病的发生发展;可激活cAMP/PKA/CREB通路,从而减弱神经炎症和氧化应激,增强神经可塑性,改善精神分裂症;通过抑制海马的晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Toll样受体4和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3通路降低小胶质细胞激活和IL-1β产生,下调HMGB1/RAGE信号通路和抑制炎症因子,在抑郁症中发挥作用;通过减少小脑神经胶质细胞损伤,增加伤害性感受阈值,改善相互学习和记忆缺陷,从而在孤独症谱系障碍的治疗中发挥作用;通过调节cAMP含量影响脆性X智力低下蛋白表达,有望应用于脆性X染色体综合征治疗;促进少突胶质祖细胞分化并增强髓鞘形成而影响多发性硬化症治疗。PDE4与双向情感障碍也有关,可能作为治疗靶点之一。目前还有不少PDE4抑制剂处于中枢神经系统疾病的临床试验阶段。本文综述了PDE4抑制剂治疗中枢神经系统疾病的基础研究和临床试验进展,以期为中枢神经系统疾病的预防和治疗提供新的思路,为中枢神经系统药物的研发提供新策略。

高效液相色谱-离子阱飞行时间串联质谱法快速筛查保健食品中非法添加的磷酸二酯酶-5抑制剂及其类似物

采用离子阱飞行时间串联质谱（LC-MS-IT-TOF）技术对保健食品中非法添加的西地那非、他达那非和红地那非等28种磷酸二酯酶-5抑制剂（PDE-5）及其类似物进行快速筛查和确证.建立了此28种化合物的精确分子质量数和多级质谱碎片离子数据库.样品经甲醇超声提取,以C18色谱柱（150 mm ＆#215;4.6 mm,3.5 μm）分离,乙腈-0.1％乙酸为流动相梯度洗脱.结果显示,28种化合物的筛查检出限为0.2～7.0μg/L,定量下限为0.04～1.18 mg/kg（胶囊样品）和0.007～0.235 mg/L（口服液）.以定量下限浓度为加标水平的平均回收率为31.0％～114.0％,相对标准偏差（RSD）为2.5％～14.9％.利用精确质量数匹配和自建标准谱库检索,实现快速筛查;结合保留时间、同位素丰度和多级特征碎片离子对目标化合物进行确证.该方法具有简便、快速、准确、灵敏度高等优点,适用于保健食品中非法添加的磷酸二酯酶-5抑制剂（PDE-5）及其类似物的高通量筛查和定性鉴定.根据裂解规律的归纳总结,还可应用于其未知衍生物及结构类似物的分子式预测和结构推导.

5-磷酸二酯酶抑制剂对噪声性聋影响的实验研究

目的探讨5-磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂对豚鼠噪声性聋的影响。方法豚鼠随机数字表法分为对照组、噪声暴露组和西地那非给药组,每组15只。西地那非组及噪声组豚鼠在白噪声暴露1周后分别腹腔注射西地那非10mg/(kg.d)及生理盐水4 ml/(kg.d),连续给药4周。分别测试噪声暴露前1天、噪声暴露后1、2及4周听性脑干反应(ABR)阈值及80dB HL下ABRⅠ波潜伏期,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态变化。结果与噪声暴露前相比,西地那非组ABR阈值及Ⅰ波潜伏期均小于噪声组,差异具有统计学意义(P值均<0.01)。扫描电镜显示,噪声组豚鼠耳蜗内、外毛细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而西地那非组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象。结论西地那非能够减轻噪声对豚鼠耳蜗毛细胞的损害,降低噪声性听觉损伤引起的ABR阈值升高,缩短其引起的Ⅰ波潜伏期延长。

磷酸二酯酶抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者PBMC中IL-08 mRNA表达的影响

目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制。方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC。A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram。应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Westernblot检测I-κB蛋白的含量。结果:(1)A1组PB-MC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;IκB的水平显著低于B组(P<0.01)。(2)与A1组比较,A2组和A3组的PB-MC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P>0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P<0.01)。(3)与A1组比较,A2组NFκB阳性细胞的百分率及IκB的水平无显著差异(P>0.05);而A3组的PBMC中NFκB阳性细胞的百分率下降(P<0.05),IκB蛋白的水平无显著变化(P>0.05)。A4组PB-MC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P<0.01)。结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Roli-pram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关。

超高效液相色谱-串联质谱法测定保健食品中10种磷酸二酯酶-5抑制剂

建立了超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定保健食品中10种磷酸二酯酶-5（PDE-5）抑制剂。样品采用Waters Acquity UPLC BEH C18（100mm×2.1mm×1.7μm）色谱柱分离,以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,甲醇为提取溶剂超声萃取,经HLB固相萃取柱净化浓缩;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测（MRM）模式进行检测。结果表明,10种磷酸二酯酶-5抑制剂在1.0-100.0μg/L范围内线性关系良好,线性相关系数（R2）均大于0.993,方法定量限为1.0μg/kg;空白样品在100.0、200.0和1 000.0μg/kg添加水平下的回收率为85.6%-94.3%。该方法简便、快速、检出限低,适用于保健食品中10种磷酸二酯酶-5抑制剂的同时检测。

5-磷酸二酯酶抑制剂他达拉非治疗对伴有感音神经性聋的性功能障碍患者听功能的影响

目的观察5-磷酸二酯酶(5-phosphodiesterase,PDE5)抑制剂他达拉非对伴有感音神经性聋性勃起功能障碍患者听功能疗效的影响。方法38例患者(60耳)给予PDE5抑制剂(选用他达拉非Tadalafil Eli Lilly Nederland B.V生产,国药准字H20170286)10 mg口服,性生活前1 h服用,以连续治疗2周为1个疗程。在治疗前和治疗2周后用纯音测听测试患者的听力。结果PDE5抑制剂在治疗伴有感音神经性聋的勃起功能障碍患者前后60耳感音神经性聋患者中治疗总有效率高达83.33%,轻度聋患者治疗有效率为100%,中度聋患者92.3%治疗有效,重度聋患者治疗有效率为80%,极重度聋患者有50%治疗有效。38例感应神经性聋患者服用PDE5抑制剂前后纯音测听频率均值比较治疗前(64.5±5.2)dB HL,治疗后(42.3±3.4)dB HL,差异有统计学意义(P<0.01)。结论PDE5抑制剂在改善勃起功能障碍伴感音神经性聋患者勃起功能的同时,对感音神经性聋也有一定的治疗效果,尤其在改善轻度、中度感音神经性聋患者听功能、耳鸣症状方面具有显著的效果,PDE5抑制剂可能成为治疗或保护感音神经性聋的一种潜在的药物。

特异性磷酸二酯酶抑制剂sildenafil增加缓激肽对血-肿瘤屏障的通透性

目的 研究新的cGMP特异性磷酸二酯酶sildenfil抑制剂是否能增加颈动脉灌注缓激肽对脑肿瘤的血-肿瘤屏障的通透性。方法 用放射自显影方法检测单独应用sildenfil,缓激肽以及sildenfil与缓激肽伍用时血-肿瘤屏障通透性的变化。结果sildenfil与缓激肽伍用与单独应用缓激肽相比较,能显著增加反映血-肿瘤屏障通透性的指标单向转运系数Ki值(P<O.O5)。经缓激肽灌流的肿瘤组织中cGMP含量显著增加(P<O.05)。结论特异性磷酸二酯酶抑制剂sildenafil与缓激肽伍用能显著增加血一肿瘤屏障的通透性,从而能够增加药物选择性地转运到脑肿瘤组织。cGMP可能是缓激肽选择性增加血-肿瘤屏障的重要因素之一。

磷酸二酯酶9及其抑制剂的研究进展

目的为磷酸二酯酶9(phosphodiesterase 9,PDE 9)的研究与开发提供参考。方法查阅PDE 9及其抑制剂的研究开发现状的多篇相关文献,进行整理和归纳。结果大多数PDE9抑制剂都能选择性地在体外和体内抑制PDE 9,并取得较好的药理活性。结论PDE 9将成为药物治疗的新一代靶点,其抑制剂的研究与开发具有广阔的发展前景。

磷酸二酯酶抑制剂吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮类衍生物的研究

目的寻找新型磷酸二酯酶抑制剂 ,设计合成未见文献报道的吡唑并 [4 ,3 d]嘧啶 7 酮类衍生物。方法合成了 8个新的衍生物 ,结构经IR、1H NMR和MS确证 ,并进行离体主动脉条和离体气管螺旋条药理实验。结果目标化合物均具有一定的血管扩张作用和支气管扩张作用 ,其中 ,Ⅸc的血管扩张作用优于对照药维拉帕米 ,Ⅸa的支气管扩张作用强于对照药氨茶碱。结论吡唑并[4 ,3 d]嘧啶 7

新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对人神经胶质瘤细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探讨新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对人神经胶质瘤U87细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法体外实验,CCK-8法检测不同浓度的ZL-n-91作用U87细胞48 h后细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测U87细胞周期和凋亡变化;Western blot检测细胞周期蛋白CDK2、CDK4、Cyclin D1及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达;体内实验,构建U87皮下移植瘤模型,检测5 mg·kg^(-1) ZL-n-91对神经胶质瘤的治疗作用。结果ZL-n-91呈浓度依赖性抑制U87细胞增殖(P<0.01),IC50值为274.5μmol·L^(-1);与对照组相比,经ZL-n-91处理后U87细胞出现明显的G0/G1期阻滞(P<0.01),并呈现剂量依赖性诱导细胞凋亡(P<0.05);Western blot结果表明,ZL-n-91降低了胶质瘤细胞CDK2、CDK4、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达(P<0.05);体内实验表明,ZL-n-91显著抑制U87皮下移植瘤的生长(P<0.05)。结论新型PDE4抑制剂ZL-n-91显著抑制神经胶质瘤U87细胞的增殖,将细胞阻滞在G0/G1期,可能通过Bcl-2/Bax途径诱导细胞凋亡。

前蛋白转化酶枯草溶菌素-kexin 9型抑制剂对血管内皮的保护作用机制研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素-kexin9型抑制剂(PCSK9抑制剂)不仅具有良好的降脂作用,还具有改善心血管结局、减轻氧化应激及改善血管内皮等多效性作用。近年来,PCSK9抑制剂的不断研发为心血管疾病治疗提供了新思路,本文就PCSK9抑制剂的多效性作用机制研究,尤其是对于血管内皮功能的作用机制研究予以综述。

磷酸二酯酶-4抑制剂在支气管哮喘和慢性阻塞性肺病中的临床研究进展

目的选择性磷酸二酯酶-4(PDE-4)抑制剂通过增加细胞内的环腺嘌呤核糖核酸(cAM P)的浓度来发挥其在哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)中的抗炎作用。现在认为PDE-4抑制剂的治疗作用取决于它们对磷酸二酯酶受体亚型的选择性,PDE-4抑制剂与PDE-4B亚型结合发挥的主要作用是抗炎作用。C ilom ilast和R oflum ilast是近期正在进行Ⅲ期临床试验的两个主要的PDE-4抑制剂的口服剂型。R oflum ilast具有较高的选择性和较强的治疗效果。现有的药物临床试验结论不一,但均能明显减少COPD急性发作频率和改善患者的生活质量,在肺功能的指标上也有轻微的改善,PDE-4抑制剂能减少过敏原和运动所诱发的哮喘急性发作。R oflum ilast比cilom ilast有较高的安全性和耐受性,其不良反应轻微。对于PDE-4抑制剂在COPD和哮喘的临床试验结果应持谨慎的乐观,现有的临床试验资料还有待完善。随后的研究重点应突出解决PDE-4抑制剂作为口服的非甾体类的抗炎药物对COPD和哮喘的治疗作用及其在COPD和哮喘防治中的地位。

磷酸二酯酶-4抑制剂治疗哮喘和慢性阻塞性肺疾病的研究进展

选择性磷酸二酯酶(PDE)-4抑制剂具有抗炎、调节免疫、松弛气道平滑肌等作用。PDE-4抑制剂罗氟司特(raflumilast)治疗哮喘疗效好,且对目前治疗药物匮乏的慢性阻塞性肺疾病(COPD)疗效也很显著。PDE-4抑制剂的开发为呼吸系统难治性疾病提供了新的治疗药物。

α1受体阻滞剂和5-磷酸二酯酶抑制剂联合治疗男性下尿路症状合并勃起功能障碍的临床研究

目的：研究对下尿路症状（lower urinary tract symptom,LUTS）合并勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）的男性患者,α1受体阻滞剂和5-磷酸二酯酶抑制剂（Phosphodiesterase Type 5 inhibitor,PDE-5i）联合治疗相比于单药治疗的优势及安全性。方法：2012年1~5月我院门诊年龄〉50岁、主诉LUTS合并ED的患者共35名。随机分为三组,坦索罗辛单药治疗组（n=12）、西地那非单药治疗组（n=11）、坦索罗辛和西地那非联合治疗组（n=12）,共治疗12周。统计分析治疗前后国际前列腺症状评分（IPSS）和国际勃起功能评分（IIEF）有无改善。结果：坦索罗辛组、西地那非组、联合治疗组的IPSS和IIEF分别改善了50.3%和11.2%、10.1%和49.7%、61.2%和58.9%。三组治疗前后的IPSS和IIEF均有显著改善（P〈0.05）。其中,联合治疗组的IPSS和IIEF改善最明显。结论：对于LUTS合并ED的部分患者,α1受体阻滞剂和PDE-5抑制剂的联合治疗优于单药治疗。

磷酸二酯酶-5抑制剂检测方法研究进展

3种获准上市的磷酸二酯酶-5抑制剂药物(西地那非、伐地那非和他达那非)在市场上获得了巨大成功。不法商人把这些药品违法添加到植物保健品和药品中谋取利益,对公众的健康构成了威胁。不断出现的PDE-5抑制剂的结构类似物导致问题变得更加复杂。目前,在标准品的参照下,TLC、HPLC、LC-MS和MECC等检测方法可以实现对已知PDE-5药物的检测。只有液相/离子阱串联质谱能够同时检测合法的药物和未知的PDE-5抑制剂类似物。免疫学检测方法正成为快速、灵敏、高效检测PDE-5药物的新方法。

新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制剂Ariflo对内皮素-1诱发离体人子宫平滑肌收缩的影响

目的 :研究选择性磷酸二酯酶 (phosphodies terase ,PDE)Ⅳ抑制剂Ariflo对内皮素 1(endothelin 1,ET 1)诱发的非妊娠人子宫平滑肌收缩的影响。方法 :累积给药法观察药物对离体平滑肌收缩的作用。结果 :Ariflo可降低子宫平滑肌自主收缩的收缩频率及收缩幅度 (pD2 =7.90 ) ,且对ET 1(3×10 -8mol·L-1)诱发的子宫平滑肌收缩具有浓度依赖性抑制作用 (pD2 =7.4 0 ) ,作用强度与Rolipram相似。结论 :Ariflo对ET 1诱发的离体人子宫平滑肌的收缩具有显著抑制作用 ,提示在临床上有缓解痛经的作用。

环(L-脯-L-苯丙)二肽--潜在的磷酸二酯酶抑制剂

利用海藻来源的黄曲霉中提取到的次级代谢产物筛选GPR41的激动剂,发现环二肽类化合物环(L-脯-L-苯丙)二肽(17号)可在多种(G41-CHO,G12-CHO,Mock-CHO,SH-sy5y和HEK293)细胞中引起细胞内cAMP水平升高.实验结果表明,17号化合物引起cAMP升高不依赖于GPCR的激活,且腺苷酸环化酶激活剂forskolin与17号化合物共处理组比fsk单独处理组cAMP进一步增加.实验结果提示,17号化合物可能是通过抑制cAMP水解,从而引起cAMP水平的持续升高.17号化合物与已知的PDE抑制剂具有相似的结构特征,可能是潜在的磷酸二酯酶抑制剂.这是首次发现环(L-脯-L-苯丙)二肽具有在多种细胞内提高cAMP浓度的作用.

磷酸二酯酶-5抑制剂治疗良性前列腺增生所致下尿路症状的研究进展

BPH所至下尿路症状(LUTS/BPH)的药物治疗在解除患者症状、预防和阻断BPH的发展,有效降低严重并发症和手术疗法风险的效果令人瞩目,已经成为LUTS/BPH的一线治疗选择。近年来磷酸二酯酶-5抑制剂(PDE5-Is)用于治疗LUTS/BPH的研究成果显著,PDE5-Is不论是单独应用,还是与α1肾上腺能受体拮抗剂(α1-ARAs)联合应用,对于缓解LUTS/BPH的效果确切,联合治疗效果更优。本文就PDE5-Is治疗LUTS/BPH的国内外研究进展作一综述。

新型磷酸二酯酶-5抑制剂他达那非治疗勃起功能障碍

勃起功能障碍(ED)是男性较常见的性功能异常,随着人口的老龄化,ED 的患病率仍将显著增加。目前多数专家公认,磷酸二酯酶(PDE)-5抑制剂是ED 的一线治疗药物。新型的强效PDE-5抑制剂他达那非(tadalafil),可以有效改善各种ED 患者的勃起功能,且超过2/3的患者服药后24～36小时仍能成功进行性交,不良反应小。