磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β_1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用。方法采用组织块贴壁法培养 SD 大鼠胸主动脉 AF。Bradford 方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和 PDE1A 蛋白表达,Leica Qwin 软件进行图像灰度分析。结果 1)TGF-β_1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以 TGF-β_1(10 ng/mL)诱导 AF 24 h 上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05)。2)TGF-β_1上调 PDE1A 蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β_1(20ng/mL)诱导 AF 24 h PDE1A 蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性 PDE 抑制剂 IBMX 和特异性 PDE1A 抑制剂 IC86340均显著抑制 TGF-β_1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05)。结论 PDE1A 参与 TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节。

酪氨酰-DNA磷酸二酯酶1在非小细胞肺癌中的表达

目的研究酪氨酰-DNA磷酸二酯酶1(TDP1)在非小细胞肺癌组织中的表达水平,探讨其与肺癌进展的关系。方法运用免疫组化和RT-PCR法检测肺癌根治术患者肺癌组织和癌旁组织中TDP1及其mRAN的表达水平。结果 TDP1在非小细胞肺癌组织表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01);TDP1mRNA在非小细胞肺癌组织表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TDP1参与了非小细胞肺癌的发生和发展。

核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1基因K121Q多态性与儿童青少年肥胖及代谢指标的相关性研究

目的:研究核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase1,ENPP1)基因K121Q与青少年儿童肥胖及其相关代谢指标的相关性。方法:6～18岁肥胖/超重儿童青少年464例,体质量正常对照者223例,分别测量身高体质量,计算体质量指数(BMI);测定血清空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和敏感指数(QUICKI)。抽提外周血基因组DNA,采用Taqman-MGB探针技术检测ENPP1基因K121Q多态性。采用国际肥胖工作组BMI标准评估肥胖程度,分析基因型与生化指标和体质量指标间的关联性。结果:(1)肥胖/超重合并组的体质量指数、FPG、Fins、TG、HOMA-IR均显著高于体质量正常对照组。(2)肥胖组K等位基因频率89.4%,Q等位基因10.6%;在超重组K等位基因90.7%,Q等位基因9.3%;正常对照组K等位基因87.9%,Q等位基因为52例12.1%,3组间无显著差异(P=0.4171)。(3)不同基因型的FPG、FIns、TG、TC、HOMA-IR、QUICKI均无显著性差异。结论:ENPP1基因K121Q多态性与中国汉族青少年单纯性肥胖及其代谢指标间无显著关联性,提示该多态性位点可能不是中国儿童肥胖和代谢综合征的关键位点。

核苷酸内焦磷酸酶磷酸二酯酶1基因K121Q多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的探讨中国黑龙江汉族人群核苷酸内焦磷酸酶磷酸二酯酶1（Ecto—nucleotidepyrophosphatase／phosphodies-terase1，ENPPl）基因第4外显子K121Q对糖尿病发病的影响及其两者之间的关系。方法运用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测146例2型糖尿病（T2DM）患者（T2DM组）和238例糖耐量正常对照健康人（对照组）EN—PPl基因K121Q的多态性分布，同时检测其临床及生化指标，进行随机对照研究。结果①T2DM组XQ（KQ＋QQ）基因型频率高于对照组（21．23％VS10．50％，P=0．0038），其Q等位基因频率亦高于对照组（10．96％VS5．25％，P=0．0034），差异有统计学意义；②携带Q等位基因个体与携带K等位基因个体两组比较，在性别构成、年龄、身高、体重、体重指数（BMI）l、腰围、臀围、腰臀比（WHR）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素水平（FINS）、HOMA—IR差异均无统计学意义（P〉0．05）；（④Logistic回归显示，ENPPl基因K121Q多态性与T2DM相关（OR=2．30，95％CI=1．29—4．08，P=0．0038）；④汉族人群Q等位基因携带频率低于其他人群（非西班牙裔白人、美国黑人和西班牙人）。结论①ENPPl基因K121Q位点Q等位基因与中国黑龙江省汉族人群T2DM发病相关；②T2DM患者中携带Q等位基因个体无明显胰岛素抵抗表现；（~）ENPPl基因K121Q位点的多态性有明显种族地域差异性。

磷酸二酯酶1抑制剂ITI-214在心血管疾病中的研究现状及治疗潜力

磷酸二酯酶1作为一种多种潜在疾病的独特治疗靶点,通过对环磷酸腺苷及环磷酸鸟苷信号通路的基本调节在心血管疾病的发生和发展中扮演着重要角色。ITI-214是一种高选择性的磷酸二酯酶1抑制剂,在哺乳动物研究中显示,对心力衰竭、心律失常及衰老相关心血管疾病有较好的调节作用,也表现出有改善血管功能、减轻炎症反应及调节离子电流等作用。这些证据表明,ITI-214在心血管疾病治疗方面有很大的潜力。现就ITI-214在心血管疾病中的研究现状及其治疗潜力做简要的介绍。

妊娠期糖尿病患者核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1基因多态性研究

目的了解妊娠期糖尿病(GDM)患者核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)基因位点rs1044498 K121Q,rs7754561 A>G+1044TGA和rs1799774 IVS20deIT-1 1多态性的分布情况。方法选取94例GDM患者(GDM组)与94例健康孕妇(对照组)。采用聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线(PCR-HRM)技术检测ENPP1基因位点rs1044498 K121Q,rs7754561 A>G+1044 TGA和rs1799774 IVS20de1T-1 1的3个基因型。样本的群体代表性进行哈丁温伯格遗传平衡(HWE)检验;组间基因型频率比较采用SPSS 20.0软件进行x^2检验,连锁不平衡采用SHEsis软件进行分析。结果 rs1044498的C等位基因在GDM组的频率为68.1%高于对照组的12.2%,差异有统计学意义(P<0.01);CC、AC基因型携带者患GDM的风险分别是AA基因型携带者的90.46和2.339倍。rs7754561的A等位基因在GDM组的频率为43.1%高于对照组的32.4%,差异有统计学意义(P<0.05);AA、AG基因型携带者患GDM的风险分别是GG基因型携带者的3.576和0.445倍。rs1799774等位基因频率分布差异无统计学意义,-I-基因型携带者患GDM的风险是TT型携带者的3.084倍,是Tdel+TT携带者的3.478倍。单倍型AAT、ACdel、GAT、GCT、ACT与GDM发病正相关(OR>1)。结论 rs1044498 K121Q和rs7754561 A>G+1044TGA位点的基因多态性与GDM有关,rs1044498 C等位基因和rs7754561 A等位基因可能是导致GDM发病的高危因素。

胞外腺苷代谢酶ENPP1的功能和药物研发进展

胞外腺苷代谢系统在多种生理病理过程中发挥重要作用,已成为重要的药物靶点,但针对胞外核苷酸-焦磷酸酶/磷酸二酯酶-1(ENPP1)的研究进展较少。近年来发现ENPP1是胞外环磷酸鸟苷-腺苷合成酶最主要的水解酶,其作用得到越来越多的重视。本文在简要回顾ENPP1结构的基础上,重点介绍其在生物矿化、肿瘤等生理病理过程中的作用,以及针对ENPP1靶点在酶替代疗法和小分子药物方面的研发进展。

胃腺癌中miR-550a-3p和TDP1 mRNA的表达水平及临床意义

目的:分析胃腺癌中微小RNA-550a-3p(miR-550a-3p)和酪氨酰-DNA磷酸二酯酶1(TDP1)mRNA的表达水平及临床意义。方法:选取2020年1月至2022年10月在该院行手术治疗的54例胃腺癌患者进行前瞻性研究,留取术后胃腺癌组织和距肿物边缘>5 cm的正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法检测胃腺癌组织和正常胃黏膜组织中miR-550-5p和TDP1 mRNA水平,比较胃腺癌组织与正常胃黏膜组织、不同病理特征胃腺癌组织miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平,分析miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平与胃腺癌发病的相关性。结果:胃腺癌组织miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平均高于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、淋巴结转移、分化程度、脉管侵犯的胃腺癌组织miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤最大径≥5cm、浸润深度浆膜及以下胃腺癌组织的miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平均高于肿瘤最大径<5 cm、浸润深度未及浆膜的胃腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平与胃腺癌发病呈正相关(r>0,P<0.05)。结论:miR-550a-3p和TDP1 mRNA水平与胃腺癌的病灶大小和浸润程度明显相关,且与发病情况呈正相关。

ENPP1基因在人卵巢的定位表达及其与多囊卵巢综合征的关系

目的胰岛素抵抗及其伴随的高胰岛素血症是多囊卵巢综合征(PCOS)重要的病理生理改变,核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)表达异常与胰岛素抵抗有关,本研究拟了解ENPP1基因在卵巢颗粒细胞中的表达及其与PCOS的关系,为进一步研究ENPP1在卵巢中的生理功能及PCOS的发病机制打下基础。方法收集PCOS患者(PCOS组)12例,以及排卵功能正常的单纯输卵管因素不育及男性不育的正常体重妇女(非PCOS组)22例患者的卵巢颗粒细胞。利用mRNA RT-PCR、原位杂交和实时荧光定量PCR的方法检测ENPP1在育龄期妇女及PCOS妇女颗粒细胞中的表达。结果RT-PCR的方法及原位杂交结果均显示,ENPP1在颗粒细胞胞浆中表达。ENPP1在PCOS组的2-ΔCt值为1.67±0.89,高于非PCOS组的2-ΔCt值0.94±0.76,两组间差异有统计学意义(P=0.017)。结论ENPP1在卵巢颗粒细胞中的表达差异提示,ENPP1参与了颗粒细胞的生理功能及卵巢中PCOS发病的病理机制。

编码大鼠ENPP1蛋白的cDNA克隆及重组腺相关病毒构建

目的:克隆编码大鼠外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)的全长cDNA片段,构建ENPP1重组腺相关病毒载体(AAV-ENPP1)。方法:以大鼠血管平滑肌细胞mRNA为模板,通过RT-PCR扩增获得大鼠ENPP1基因大片段并克隆至pCDH载体中,经过EcoR I/Xho I酶切、连接、转化将该片段克隆至腺相关病毒载体pAAV-MCS中,酶切及DNA测序对阳性克隆进行鉴定。重组AAV-ENPP1经包装后转染目的血管平滑肌细胞,Western blot检测目的蛋白ENPP1的表达。结果:RT-PCR成功克隆出2721 bp的大鼠ENPP1基因大片段,并最终获得测序正确的pAAV/ENPP1克隆,Western blot检测显示目的蛋白ENPP1的表达升高。结论:成功构建大鼠ENPP1重组腺相关病毒载体。

酸性鞘磷脂酶与帕金森病

酸性鞘磷脂酶(ASMase)不仅介导溶酶体代谢,参与膜结构的调节和信号转导,而且对鞘磷脂转化为神经酰胺起关键作用。ASMase由鞘磷脂磷酸二酯酶1(SMPD1)基因编码。最近有研究显示SMPD1及ASMase与神经退行性疾病如帕金森病的发病和进展相关。该文就SMPD1及ASMase与帕金森病的相关研究进行介绍,以供同行们参考。

TDP1基因表达水平在肺腺癌患者预后中的价值研究

目的探究TDP1基因mRNA在肺腺癌组织中的表达及其与患者预后之间的关系。方法以TCGA数据库内登记的肺腺癌患者的临床信息及TDP1表达情况为研究数据,通过UALCAN数据库挖掘分析工具对TDP1基因mRNA的表达情况进行分析,并通过Kaplan-Meier生存分析法分析TDP1表达水平与患者总生存期(OS)之间的关系。结果肺腺癌组织中TDP1基因mRNA的表达水平高于正常肺组织(P=0.0000),TDP1基因mRNA的高表达与更差的OS相关(P=0.0057)。亚组分析中,TDP1基因mRNA的表达水平在男性患者和女性患者之间无显著差异(P=0.9412),在不同种族人群间的表达水平也无显著差异(P>0.05),但在女性患者及高加索患者中,TDP1基因mRNA的高表达均与更差的OS相关(女性患者:P=0.031;高加索患者:P=0.016)。结论 TDP1在肺腺癌组织中呈高表达,与更短的OS相关,提示TDP1可能在肺腺癌发生发展过程中有驱动作用,TDP1可作为肺腺癌治疗的下一个潜在靶点,但其内在机制需要更多的基础与临床研究予以揭示。

外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶IK121Q基因多态性与多囊卵巢综合征发病相关性分析

目的:探讨外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I基因多态性与多囊卵巢综合征发病的相关性及该突变对多囊卵巢临床表型的影响。方法:采用PCR-限制性片段长度多态性分析外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I基因多态性并鉴定基因型,比较正常人与多囊卵巢综合征患者基因型的分布频率,并比较不同基因型之间患者的临床指标。结果:70例多囊卵巢综合征患者外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I K121Q突变率明显高于67例对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。无胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征患者外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I K121Q突变率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。无胰岛素抵抗的患者中外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I基因突变组睾酮、促黄体激素均高于野生型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I K121Q基因多态性与多囊卵巢发病相关,并且独立于胰岛素抵抗独立存在。

G蛋白、AC、PDE和CREB SNPs与双相障碍的关联分析

目的:探讨G蛋白、腺苷酸环化酶(AC)、磷酸二酯酶(PDE)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)SNPs与双相障碍的关联分析。方法:①选择符合双相障碍诊断标准的患者84例(其中双相-Ⅰ型55例,双相-Ⅱ型29例),在同地区选择91名与之相匹配的健康人群,分别比较基因型、等位基因分布频率差异,同时探讨上述基因是否与双相障碍存在关联;②采用连接酶反应技术(LDR),检测GNβ3rs5443、ADCY9rs2230739 PDE1Ars1549870和CREB1rs2551638的4个单核苷酸的多态性。结果:病例组与对照组SNPs基因型频率和等位基因频率比较发现,rs5443、rs2230739、s1549870的基因型和等位基因比较差异均无显著性意义(P>0.05)。另外,不同亚型间SNPs基因型和等位基因分布比较:两组之间,rs5443、rs2230739和rs1549870的基因型分布频率和等位基因频率未见存在明显差异(P>0.05)。病例组双相-Ⅰ型与双相-Ⅱ型3个SNPs基因型和等位基因分布比较,也未见明显组间差异(P>0.05)。结论:①没有发现GNβ3rs5443、ADCY9rs2230739、PDE1Ars1549870这3个SNPs与双相障碍存在关联的直接证据;②CREB1rs2551638位点在汉族人群中不存在多态性。

粉防己根中1个新的阿朴啡型生物碱及其细胞毒活性

目的 研究粉防己Stephania tetrandra根的化学成分及其生物活性。方法 采用各种柱色谱方法分离纯化化学成分,应用红外、高分辨质谱、核磁共振谱学技术鉴定化合物的结构;采用MTT法测定化合物对人肝癌Hep G2细胞的抑制活性。结果 从粉防己根的生物碱提取物中分离得到1个新的阿朴啡型生物碱,鉴定为7-甲基-7-(氯甲基)-9-羟基-6,7二氢-5H苯并[g]-1,3-苯并二氧杂环戊基[6,5,4-de]喹啉-7-铵(1);化合物1对Hep G2细胞显示出较强的增殖抑制活性,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为(6.61±3.67)μg/m L。结论 化合物1为新化合物,命名为粉防己碱E(stephtetrandrine E),具有作为抗肿瘤药物开发的潜在价值。

后纵韧带骨化症患者基因变异及表型分析

目的:通过对后纵韧带骨化症(OPLL)患者进行全外显子组测序(WES),明确其可能的致病原因。方法:提取2017年1月至2019年12月收治的93例OPLL患者外周血基因组DNA,进行WES及生物信息学分析,筛查与OPLL相关的基因变异。结果:在2例OPLL患者中发现了ENPP1基因的2个错义变异,其中患者1携带1个c.T802C(p.Tyr268His)杂合变异,患者2携带1个c.T253C(p.Cys85Arg)杂合变异和1个c.T802C(p.Tyr268His)杂合变异。2个变异位点在不同物种中均具有高度保守性,多种蛋白预测软件均预测变异有害或可能有害,表型分析发现2例患者均发生了颈椎、胸椎OPLL及黄韧带骨化症。患者2血清磷水平在正常低限,血清碱性磷酸酶水平高于正常值。结论:ENPP1基因变异可能是OPLL患者的致病原因。该研究丰富了ENPP1基因变异谱,也为今后OPLL患者应用新的治疗方法提供了分子诊断依据。

ENPP1低表达对口腔鳞癌细胞上皮间质转化的作用及机制

目的探讨外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)低表达对口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)细胞上皮间质转化的作用。方法取正常人口腔黏膜上皮细胞系、人口腔鳞癌细胞系CAL-27进行培养、传代,检测ENPP1 mRNA表达。取对数生长期CAL-27细胞进行转染,分为空白组(未处理)、对照组(转染NC-siRNA质粒)及转染组(转染ENPP1-siRNA),检测ENPP1 mRNA、蛋白表达。取对数生长期CAL-27细胞进行转染,分为A组(未转染)、B组(转染NC-siRNA质粒)、C组(转染ENPP1-siRNA质粒+MAPK激动剂)、D组(转染ENPP1-siRNA质粒)、E组(MAPK激动剂),检测CAL-27细胞增殖活性、侵袭细胞数、迁移能力及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MAPK)、磷酸化胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果各时段吸光度(A)值,D组<C组<A组、B组<E组(均P<0.05);A组、B组、C组、D组、E组侵袭细胞数分别为(85.23±2.22)个/视野、(85.41±1.59)个/视野、(53.67±2.10)个/视野、(37.39±2.06)个/视野、(111.08±5.20)个/视野,D组<C组<A组、B组<E组(均P<0.05);划痕宽度百分比,E组<A组、B组<C组<D组(均P<0.05);p-MAPK、p-ERK1、p-ERK2蛋白相对表达量,D组<C组<A组、B组<E组(均P<0.05)。结论ENPP1低表达可抑制口腔鳞癌细胞上皮间质转化,机制可能与抑制MAPK信号通路有关。

酸性鞘磷脂酶缺乏症诊断进展

酸性鞘磷脂酶缺乏症(ASMD)又称为A型及B型尼曼匹克病,是一组由于鞘磷脂磷酸二酯酶-1(SMPD1)基因突变使酸性鞘磷脂酶活性下降甚至缺失,从而导致鞘磷脂异常沉积的溶酶体内脂质贮积病。本病可通过骨髓穿刺、病理活检、酸性鞘磷脂酶活性测定及SMPD1基因检测等检查手段确诊。近年来随着分子诊断技术的快速进展,对ASMD分子遗传学检测手段、生物标志物及酸性鞘磷脂酶活性测定等实验室诊断方面有了新的认识。本文将对ASMD的诊断进展作一综述,旨在减少该病误诊漏诊,提高临床医生对该病的认识。

清化颗粒对db/db糖尿病小鼠肠道苦味受体的影响

目的:探讨清化颗粒对db/db糖尿病小鼠肠道苦味受体(taste receptor type 2,TAS2Rs)的影响。方法:将db/db糖尿病小鼠随机分为模型对照组及清化颗粒低、中、高剂量组,db/m小鼠为空白对照组。清化颗粒低、中、高剂量组分别灌胃给药(3.77、7.54、15.08 g·kg-1·d-1),模型对照组和空白对照组灌胃等体积的生理盐水,均干预4周。干预结束后,腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)观察每组小鼠血糖水平变化;ELISA法分析小鼠血清胰高血糖素样肽-1(GLP-1)浓度;qRT-PCR测定每组小鼠肠道苦味受体(TAS2R7、TAS2R9和TAS2R38)的mRNA水平;Western blot检测小鼠肠道苦味信号通路因子磷酸二酯酶1A(PDE1A)的蛋白水平。结果:清化颗粒各剂量组的空腹血糖水平均较模型对照组显著降低(P<0.01),血清GLP-1浓度显著高于模型对照组(P<0.01);清化颗粒中、高剂量组的TAS2R7、TAS2R9和TAS2R38的mRNA水平较模型对照组显著增加(P<0.01);清化颗粒各剂量组的PDE1A的蛋白水平较模型对照组显著增加(P<0.01),呈剂量依赖效应。结论:清化颗粒能够降低db/db糖尿病小鼠的空腹血糖水平,其机制可能与促进肠道GLP-1分泌的苦味信号通路有关。