磷酸二酯酶4D交互蛋白基因对布加综合征隔膜形成的影响

目的探讨磷酸二酯酶4D交互蛋白（PDE4DIP）基因对布加综合征（BCS）隔膜形成的影响。方法通过小干扰RNA特异性沉默人血管内皮细胞（HUVECs）中的PDE4DIP基因，应用CCK8实验、划痕实验及血管形成实验分别检测转染后各组的增殖、迁移及血管形成能力，分析其改变情况。结果沉默该基因后，其mRNA及蛋白水平表达均下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）；各组细胞增殖的差异无统计学意义（P=0．51），迁移能力（P=0．003）及血管形成能力（P=0．001）明显降低。结论在HUVECs细胞中，PDFADIP基因沉默具有抑制HU—VECs细胞迁移及血管形成能力的作用，可能与BCS隔膜形成有关。

磷酸二酯酶4D基因多态性与缺血性脑血管病的关系

目的探讨中国汉族人群磷酸二酯酶4D(PDE4D)基因多态性与缺血性脑血管病(ICVD)的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测116例ICVD患者和110名正常对照者PDE4D基因SNP45、SNP83和rs918592位点的多态性及其与糖代谢指标的关系。结果PDE4D基因rs918592的A等位基因频率ICVD组(58.6%)、腔隙性脑梗死亚组(63.8%)较正常对照组(48.6%)明显增高(均P<0.05);rs918592、SNP83基因型及等位基因频率各组间差异无统计学意义(均P>0.05);SNP45位点未见多态性。糖代谢指标在不同的SNP83、rs918592基因型间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论中国汉族人群PDE4D基因rs918592位点上A等位基因可能是ICVD的危险因素之一;PDE4D基因可能不是通过糖代谢影响ICVD的发生。

5-脂氧合酶激活蛋白及磷酸二酯酶4D基因多态性与脑梗死易患性的分子流行病学研究

目的:分析5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)及磷酸二酯酶4D(PDE4D)基因多态性与脑梗死(CI)易患性的分子流行病学特征。方法:收集CI患者396例作为病例组,另选取300名健康体检者作为对照组,运用PCR检测技术和基质辅助激光解析分析2组受检者ALOX5AP基因中SG13S89、SG13S114和PDE4D基因中SNP83的多态性,分析ALOX5AP及PDE4D基因多态性与CI的关系。结果:病例组SG13S89中AG基因型、A等位基因频率均高于对照组(P<0.05)。多元logistic逐步回归分析显示,调整年龄、高血压及糖尿病等因素的影响后,SG13S89中AG基因型是增加CI发生的危险性因素(P<0.05);AT型及SAD型CI患者SG13S89基因中的基因型及基因频率差异均无统计学意义(P>0.05);年龄分层后分析发现,女性是增加SG13S89基因中的AG基因型发生脑卒中的危险因素(P<0.05)。结论:SG13S89中的AG基因型和A等位基因使得CI的频率高于其他等位基因,可能的机制是通过介导的血管炎性反应实现,而未发现SG13S114及SNP83基因的多态性与CI有关。

新疆地区维、汉族缺血性脑卒中患者磷酸二酯酶4D基因单核苷酸多态性的研究

目的探讨新疆地区维、汉族缺血性脑卒中患者磷酸二酯酶4D(PDE4D)基因87位点的单核苷酸多态性(SNP)。方法采用PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和基因测序方法检测226例缺血性脑卒中患者(病例组,维族110例,汉族116例)和220例无神经系统疾病的患者(对照组,维族102例,汉族118例)PDE4D基因87位点的多态性。对各组基因型分布和等位基因频率进行比较。结果病例组与对照组PDE4D基因87位点的基因型分布比较,差异无统计学意义;病例组PDE4D基因87位点C等位基因频率明显高于对照组(P<0.05)。病例组维族亚组PDE4D基因87位点CC型的比率及C等位基因频率明显高于对照组维族亚组(均P<0.05);病例组汉族亚组PDE4D基因87位点CC型的比率及C等位基因频率明显高于对照组汉族亚组(均P<0.05)。病例组中,维族亚组与汉族亚组PDE4D基因87位点的基因型分布及等位基因频率比较,差异无统计学意义;对照组中,维族亚组与汉族亚组PDE4D基因87位点的基因型分布及等位基因频率比较,差异亦无统计学意义。结论 PDE4D基因87位点C等位基因频率增高可能增加缺血性脑卒中发生的风险,此风险在新疆地区维、汉族人群中没有差异。

磁共振血管造影在磷酸二酯酶4D基因多态性与缺血性脑卒中相关性研究中的应用

目的探讨磷酸二酯酶4D（PDE4D）基因多态性与缺血性脑卒中（IS）患者磁共振血管造影（MRA）结果的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测245例IS患者和208例正常对照组PDE 4D基因SNP83及SNP87酶切多态性。同时开展MRA检查结果与PDE 4D基因SNP83及SNP87多态性相关性分析。结果 245例IS患者中,77.78%患者MRA结果异常,其中,颅外血管（ECMRA）异常占53.37%,颅内（ICMRA）异常占65.80%,两者兼有占41.97%。脑卒中患者的PDE 4D基因SNP 83的CC基因型频率较正常对照组高（OR为3.57,95%CI 1.39～6.52,P〈0.01）;与ICMRA结果正常的患者相比较,ICMRA结果异常的脑卒中患者的PDE 4D基因SNP 87的TT基因型频率增高（OR为0.57,95%CI 0.01～0.43,P=0.01）。PDE 4D基因SNP 83的基因型及等位基因频率与MRA异常结果无显著相关（P〉0.05）。结论 PDE 4D基因SNP 87多态性与MRA结果异常相关。PDE 4D基因SNP 83与IS相关,与MRA结果异常无显著性相关。

广西汉族人群磷酸二酯酶4D基因多态性与脑出血的关系

目的:探讨广西汉族人群磷酸二酯酶4D基因(PDE4D)单核苷酸多态性(SNP)与脑出血(ICH)的关系。方法:采用SNaPshot技术对124例广西地区汉族人群ICH患者(ICH组)及149例健康体检者(对照组)的PDE4D基因SNP83(rs966221)位点单核苷酸多态性进行检测,根据出血部位不同对ICH组患者进行非脑叶出血组和脑叶出血组两个亚组分型进行分析。结果:ICH组、非脑叶出血组、脑叶出血组和对照组SNP83的CC、CT和TT基因型分布比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。多因素非条件Logistic回归分析显示,PDE4D基因SNP83多态性与ICH组及其亚组均无明显相关性(均P>0.05)。经过校正混杂因素后,在隐性模型及加性模型下,SNP83多态性与ICH相关(隐性模型:OR=7.30,95%CI:1.44~37.04,P=0.02;加性模型:OR=6.47,95%CI:1.19~35.22,P=0.03);在隐性模型下,SNP83多态性与非脑叶出血相关(隐性模型:OR=6.76,95%CI:1.21~37.90,P=0.03);在3种遗传模型下,SNP83多态性均与脑叶出血不相关(均P>0.05)。结论:广西汉族人群PDE4D基因SNP83可能是ICH的重要危险因素。

磷酸二酯酶4D基因多态性与缺血性卒中的研究进展

冰岛deCODE研究组报道，编码磷酸二酯酶（Pnospnodiesterase，PDE）4D的基因可能使缺血性卒中的危险性增高，这一发现对于缺血性卒中的预防具有重要意义。但是，在世界其他一些国家进行的后续研究中，结果却不尽相同，提示对该基因仍有进一步详细研究的必要。

磷酸二酯酶4D基因与缺血性卒中

冰岛deCODE遗传学研究组报道,编码磷酸二酯酶(PDE)4D的基因可使缺血性卒中的危险性增高,与颈动脉粥样硬化性和心源性卒中的关系最为密切。这一发现对于缺血性卒中的预防具有重要意义,努力开发PDE4D抑制剂有可能成为卒中预防的一个新的方向。

磷酸二酯酶4D纯合子敲除小鼠的构建

目的应用CRISPR/Cas9技术构建磷酸二酯酶4D(PDE4D)纯合子敲除小鼠,为深入探究PDE4D基因的功能及作用机制提供基础。方法针对PDE4D基因外显子4,5号构建载体显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵中,经过母本繁育和子代交配获得PDE4D^(-/-)小鼠,通过PCR产物测序及基因型鉴定技术测定小鼠基因型。使用超声成像系统和HE染色检测小鼠主要器官形态和功能的变化,通过Westernblot实验验证PDE4D蛋白在小鼠体内的表达情况。结果PDE4D^(-/-)小鼠基因型稳定遗传,小鼠体型较小,体内主要器官无明显形态及组织学改变。PDE4D杂合或纯合敲除小鼠主要组织中PDE4D表达减少或基本不表达,敲除效果较好。结论本课题利用CRISPR/Cas9技术成功建立了PDE4D^(-/-)小鼠,未发现明显生理异常,可用于以PDE4D为靶点的疾病发病机制及药物研究。

连接酶反应分析ALOX5AP基因、PDE4D基因与江苏南京地区腔隙性脑梗死的易感性

目的:分析江苏省南京地区汉族人群腔隙性脑梗死患者的ALOX5AP基因、PDE4D基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP),并研究其与脑梗死的发病是否存在相关性。方法:运用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR),观察280例腔隙性脑梗死患者和258例对照组人群的ALOX5AP基因及PDE4D基因的4个SNP位点,并进一步分析其基因型。结果:PDE4D基因rs966221、rs456009的等位基因、基因型频率在两组间没有显著性差异,单倍体型构成在两组间亦无显著性差异;ALOX5AP基因的两SNP(rs4073259、rs4769055)的等位基因和基因型频率在两组间差异均有显著性(P<0.05),SNP单倍体型(GA、GC)在两组间差异更为明显(P<0.01)。结论:本研究未发现PDE4D基因与腔隙性脑梗死的发病相关,但ALOX5AP基因可能为中国江苏省南京地区腔隙性脑梗死的易感基因。

PDE4D基因多态性与辽宁省汉族人群缺血性脑卒中的相关性

目的探讨磷酸二酯酶(PDE)4D基因多态性与辽宁省汉族人群缺血性脑卒中(IS)潜在的遗传发病机制分子流行病学依据。方法采用病例对照的研究方法,检测PDE4D基因多态性位点SNP83、SNP 87、SNP219和SNP220在病例组、对照组中的频率分布。结果病例组SNP83位点CC基因型和C等位基因型频率分布均高于对照组(CC:P=0.001;OR=1.788;95%CI:1.280～2.497;C:P=0.003;OR=1.368;95%CI:1.115～1.678)。SNP219位点AA基因型和A等位基因型频率高于对照组(AA:P=0.029;OR=1.444;95%CI:1.037～2.010;A:P=0.048;OR=1.228;95%CI:1.001～1.505)。经条件Logistic回归校正后,SNP83CC基因型分布频率仍然高于对照组(P=0.036;OR=1.603;95%CI:1.032～2.489),SNP219AA基因型分布频率也仍然高于对照组(P=0.046;OR=1.567;95%CI:1.008～2.436)。由SNP219、SNP220位点构建的单体型中,AA单体型频率病例组高于对照组(P=0.013;OR=1.296;95%CI:1.056～1.591)。GA单体型频率病例组低于对照组(P=0.005;OR=0.650;95%CI:0.482～0.878)。结论 PDE4D基因SNP83、SNP219位点可能与辽宁省汉族人群大血管性IS具有相关性,而在由SNP219、SNP220位点构建的单体型中,AA可能是危险性单体型,GA可能是保护性单体型。

蜂胶黄酮对人结肠癌细胞PDE4D及Gadd45G基因表达的影响

目的探讨蜂胶黄酮(PB3A)对人结肠癌SW480细胞生长的抑制作用及机制。方法将培养的人结肠癌SW480细胞分为PB3A组及对照组。PB3A组予100μg/mL PB3A干预,对照组不干预。干预后两组均培养24 h,倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测细胞磷酸二酯酶4D(PDE4D)、生长阻滞和DNA损伤诱导基因G(Gadd45G)mRNA和蛋白表达。结果干预后倒置显微镜下可见PB3A组细胞缩小、皱缩、折光性减弱,细胞内出现颗粒状物质;对照组无明显变化。PB3A组PDE4D mRNA及蛋白表达水平均低于对照组,Gadd45G mRNA及蛋白水平表达均高于对照组(P均<0.01)。结论 PB3A能抑制SW480细胞生长,诱导其凋亡;其作用机制可能为下调PDE4D mRNA和蛋白表达,上调Gadd45G mRNA和蛋白表达。

PDE4D基因SNP83多态性与中国人群缺血性脑卒中相关性的Meta分析

目的通过Meta分析的方法综合评价磷酸二酯酶4D(PDE4D)基因SNP83多态性与中国人群缺血性脑卒中(IS)的相关性。方法计算机检索Pub Med、EMbase、CNKI、CBM、Wanfang Data和VIP,搜集关于探讨PDE4D基因SNP83多态性与中国人群IS相关性的病例-对照研究,检索时限均为建库至2017年1月。由两人独立对符合纳入标准的研究进行数据提取,并对纳入研究按照NOS量表进行质量评价,然后采用Stata 12.0软件进行Meta分析。结果共纳入14项病例-对照研究,中文文献9篇,英文文献5篇,包括4119例IS和4286例对照。总体Meta分析结果显示,对于中国汉族人群,PDE4D基因SNP83多态性与IS发病风险无相关性(C vs.T:OR=1.13,95%CI:0.95~1.33,P=0.17;CC vs.TT:OR=1.12,95%CI:0.80~1.57,P=0.52;CT vs.TT:OR=1.22,95%CI:0.91~1.63,P=0.23;CC vs.CT+TT:OR=1.10,95%CI:0.81~1.49,P=0.56;CC+CT vs.TT:OR=1.14,95%CI:0.93~1.41,P=0.21)。结论当前研究证据显示,PDE4D基因SNP83多态性与中国汉族人群IS发病风险无相关性。由于纳入研究数量的限制,该结论尚需进一步开展相关研究进行验证。

磷酸二酯酶4D基因rs966221多态性与急性心肌梗死的易感性

Gretarsdottir等于2003年首次发现位于人类染色体5q12上的磷酸二酯酶4D（PDE4D）基因单核苷酸多态性与冰岛人群缺血性脑血管病（ICVD）显著相关，认为PDFAD基因是脑卒中的候选基因。国内研究表明，冠心病（CAD）已成为实施院前急救最主要的病因，而急性心肌梗死（AMI）是其中最危险的类型。AMI与ICVD的发病机制具有相似之处，且都与遗传密切相关，关于其发病风险是否与PDE4D基因多态性有关的问题，迄今尚未见有报道。本研究将探讨PDE4D基因rs966221多态性与中国常武地区汉族人群AMI易感性的可能关系。

人参、三七、川芎提取物对血管平滑肌细胞衰老相关β半乳糖苷酶及p16-cyclinD/CDK-Rb通路的影响

目的:观察人参、三七、川芎提取物延缓自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法:取大鼠胸主动脉用于分离VMSC,采用原代细胞培养的方法建立SHR大鼠VMSC模型,实验分为Wistar-Kyoto(WKY)大鼠对照组、SHR模型组、缬沙坦组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用衰老相关β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色法观察细胞衰老情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测各组细胞p16、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase4,CDK4)和成视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)的表达。结果:SA-β-gal染色显示,与WKY组比较,SHR组SA-β-gal阳性细胞数明显增多(P<0.01),人参、三七、川芎提取物可使SHR VSMC SA-β-gal阳性细胞数明显减少(P<0.01);流式细胞仪检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC在G1期明显减少,S期细胞明显增加,中药干预后SHR的VSMC G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05);实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16和Rb mRNA表达量明显减少,cyclin D1和CDK4mRNA表达增加;人参、三七、川芎提取物干预后SHR VSMC p16和Rb mRNA表达量增加,cyclin D1和CDK4mRNA减少。蛋白质印迹法显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16蛋白表达量明显减少,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量明显增加(P<0.05);中药干预后SHR VSMC p16蛋白表达增加,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量减少(P<0.05)。结论:人参、三七、川芎提取物通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达而发挥延缓SHR VSMC衰老的作用。

弥漫大B细胞淋巴瘤内TNFAIP3、PDE4B对肿瘤细胞凋亡、侵袭的影响

目的:研究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)内肿瘤坏死因子诱导蛋白3基因(TNFAIP3)、磷酸二酯酶4B(PDE4B)对肿瘤细胞凋亡、侵袭的影响。方法:选择2014年8月~2017年7月期间在广州四二一医院诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤的68例患者作为研究的DLBCL组,选择同期因淋巴结肿大在广州四二一医院接受淋巴结穿刺活检且诊断为反应性淋巴结增生的34例患者作为对照组。测定淋巴结组织中TNFAIP3、PDE4B以及凋亡基因、侵袭基因的表达量。结果:DLBCL组病灶组织中TNFAIP3、PTEN、PTPL1、Bax的蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05),PDE4B、c-myc、AURKA、AURKB、PLK1、Ets-1、β-catenin、MMP7、MMP9、CD44的蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05);DLBCL病灶组织中PTEN、PTPL1、Bax的蛋白表达与TNFAIP3的蛋白表达量呈正相关,与PDE4B的蛋白表达量呈负相关;c-myc、AURKA、AURKB、PLK1、Ets-1、β-catenin、MMP7、MMP9、CD44的蛋白表达量与TNFAIP3的蛋白表达量呈负相关,与PDE4B的蛋白表达量呈正相关。结论:弥漫大B细胞淋巴瘤内TNFAIP3的低表达以及PDE4B的高表达能够拮抗肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞侵袭。

磷酸二酯酶4D基因与缺血性脑卒中的研究进展

磷酸二酯酶4D(PDE4D)在人体组织中广泛分布,其活性受环腺苷酸(cAMP)依赖的蛋白激酶(PKA)和细胞外信号调节激酶(ERK)调节。PDE4D基因包含1.6Mb,含24个外显子,编码9种蛋白质亚型和至少7个启动子。磷酸二酯酶4D降解cAMP,通过改变cAMP活性,促进动脉粥样硬化形成从而引起缺血性脑卒中发生。PDE4D基因多态性研究,为防治缺血性脑卒中提供了一条重要途径。

磷酸二酯酶4D基因多态性与颈动脉粥样硬化相关性研究

目的探讨磷酸二酯酶4D（PDE4D）基因rs918592位点多态性与急性动脉粥样硬化性脑梗死患者的颈动脉斑块易损性以及颈动脉内中膜厚度（IMT）的关系。方法选择台州医院神经内科自2010年2月至2012年11月收治的首次因脑梗死住院患者502例为研究对象，运用聚合酶链反应一限制性酶切片段长度多态性（PCR-RFLP）方法分析患者PDE4D基因rs918592位点多态性，并通过经颅多普勒超声测定患者IMT及评估颈动脉斑块情况（分为易损斑块组和稳定斑块组）。结果易损斑块组AA＋AG基因型频率显著高于稳定斑块组（87．0％vs75．5％），差异有统计学意义（χ2=7．557，P=0．006，OR=2．170，95％CI：1．238-3．802），且A等位基因频率也明显高于稳定斑块组（61．3％vs53．4％），差异有统计学意义（χ2=4．746，P=0．029，OR=1．385，95％CI：1．033-1．856）。GG基因型和AA＋AG基因型的颈动脉IMT分别为（1．17±0．20）mm和（1．19±0．18）mm，比较差异无统计学意义（t=0．556，P=0．579）。非条件Logistic回归分析筛选出最终进入模型的危险因素有吸烟史（P=0．039，OR=I．753，95％CI：1．029-2．987）、低密度脂蛋白胆固醇水平（P=0．000，OR=2．537，95％CI：1．599-4．024）和AA＋AG基因型（P=0．017，OR=2．037，95％CI：1．137～3．651）。结论PDE4D基因rs918592位点AA＋AG基因型是急性动脉粥样硬化性脑梗死患者颈动脉易损斑块的危险因素之一，A等位基因是颈动脉斑块易损的遗传易患基因。