cGMP特异性磷酸二酯酶5活性及其抑制剂的研究

目的研究以cGMP为特异底物的磷酸二酯酶 5 (PDE5 )的水解酶活性及PDE5选择性抑制剂西地那非(sildenafil)的抑制作用。方法以牛阴茎海绵体为原料 ,通过快速蛋白液相系统分离纯化得到PDE同工酶 ,然后以3 H cGMP为底物 ,经纯化的PDE同工酶催化水解为3 H GMP ,进一步在含 5′ 核苷酸酶的蛇毒液作用下 ,脱去 5′ 磷酸生成3 H 鸟苷 ,在闪烁剂激发下测定3 H 鸟苷的变化 ,绘制PDE活性曲线。以不同剂量的PDE5选择性抑制剂西地那非作用于PDE5 ,经DixonPlots法处理结果以观察西地那非的抑制效应。结果由牛阴茎海绵体纯化得到三个PDE同工酶峰 ,其中第三个峰对cGMP水解活性最强 ,且西地那非对第三峰抑制作用明显。结论海绵体中的PDE以cGMP 特异的PDE5为主 ,西地那非是PDE5的选择性抑制剂 ,通过以上实验观察可初步确定第三峰为PDE5 ,其结果与文献报道相符。