大肠癌中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶和磷酸酶-张力蛋白同源体的表达及其临床意义

目的 检测大肠腺癌组织磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（pAKT）、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白同源体（PTEN）表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测112例大肠癌pAKT和PTEN蛋白的表达.结果 大肠癌pAKT和PTEN的阳性表达率分别为79.5％（89/112）和47.3 ％（53/112）,与在大肠癌旁组织和腺瘤组织pAKT和PTEN的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.01）.pAKT的阳性表达与大肠癌肿瘤浸润深度、临床分期和淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.PTEN的阳性表达同肿瘤浸润深度、肿瘤组织分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.pAKT蛋白表达与PTEN蛋白表达呈负相关（P＜0.01）.结论 pAKT和PTEN与大肠癌发生、发展和转移密切相关,提示阻断PTEN-磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-AKT信号转导通路可能对大肠癌的治疗提供新的靶点.

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在舌鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在舌鳞状细胞癌(TSCC)及其癌旁非肿瘤组织中的表达差异及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测45例TSCC组织及30例癌旁非肿瘤组织中Pyk2和p-AKT蛋白的表达情况,并分析两者蛋白表达与临床病理参数的关系。结果在TSCC组织中Pyk2和p-AKT蛋白均呈高表达,而在癌旁非肿瘤中呈低表达或无表达(P<0.05)。并且两者的表达呈正相关(γs=0.412)。Pyk2蛋白的表达与病理分化程度、有无淋巴结转移及TNM临床分期有关(P<0.05),与性别、年龄无关。而p-AKT只与病理分化程度有关(P<0.05)。结论 Pyk2和p-AKT蛋白异常表达与TSCC的发生、发展密切相关,联合检测两者有望成为明确TSCC恶性程度的指标。

针刺足阳明经穴对食源性肥胖大鼠血脂及下丘脑胰岛素受体底物1及其丝氨酸磷酸化活性的影响

目的:观察针刺足阳明经穴(四白、天枢、足三里、内庭)对高脂饮食诱导的肥胖大鼠血脂及下丘脑胰岛素受体底物1(IRS1)及其丝氨酸磷酸化的影响。方法:将以高脂饮食诱导出的30只肥胖大鼠随机分为模型对照组、针刺足阳明经穴组(针刺组)、针刺非经穴组(非经穴组),并与以普通饲料喂养的10只(空白对照组)做正常对照,连续干预4周。针刺组取单侧四白、天枢、足三里、内庭穴(隔天交替针另一侧),局部750 g/L酒精常规消毒后,针入3～5 mm,接通电针仪,治疗15 min;非经穴组取四白、天枢、足三里、内庭穴旁开非经穴点针刺;空白对照组、模型对照组行抓取固定,不作任何治疗。1 d 1次,连续6 d休息1 d,持续4周。结果:①针刺组大鼠体质量下降,与非经穴组对比,差别有统计学意义(P<0.05)。②与空白对照组对比,模型对照组及非经穴组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TCH)、极低密度脂蛋白(VLDL)均升高,差别有统计学意义(P<0.01)。针刺组大鼠TG、VLDL均下降,与模型对照组及非经穴组对比,差别有统计学意义(P<0.01)。③IRS1蛋白表达由低到高依次为模型对照组、非经穴组、针刺组、空白对照组。模型对照组及非经穴组的IRS1-Ser307和pIRS1-Ser636/639表达增高,与空白对照组及针刺组对比,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:针刺足阳明经穴可有效改善食源性肥胖大鼠血脂,减轻体质量,其机制与抑制下丘脑胰岛素受体底物1及丝氨酸磷酸化活性有关。

胰岛素抵抗大鼠肝脏丝氨酸/酪氨酸磷酸化IRS-1表达异常与脂联素相关的研究

目的探讨胰岛素抵抗大鼠丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与脂联素(APN)的关系。方法高脂饲料喂养10周建立胰岛素抵抗大鼠模型,并用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术评估。应用ELISA法检测大鼠血清APN含量,Westernblot法检测肝脏组织中胰岛素受体底物1(IRS-1)磷酸化丝氨酸(IRS-1Ser636)及磷酸化酪氨酸(IRS-1Tyr465)表达。结果高脂组大鼠葡萄糖输注率(GIR60～120)明显低于基础饲料组(1.56±0.43vs5.15±0.66mg·kg-1·min-1,P<0.01);与基础饲料组相比,高脂饲料组大鼠血清APN水平显著降低(0.70±0.07vs0.85±0.12pg/ml,P<0.01),IRS-1Tyr465表达显著降低(111.68±13.41vs127.77±13.17,P<0.05),IRS-1Ser636水平显著升高(109.47±13.75vs94.23±15.05,P<0.05)。血清APN水平与IRS-1Tyr465正相关(r=0.68,P<0.01),与IRS-1Ser636负相关(r=-0.70,P<0.01)。结论胰岛素抵抗大鼠APN水平与IRS-1Tyr465正相关,与IRS-1Ser636负相关,提示APN改善胰岛素抵抗机制可能与纠正IRS-1磷酸化异常有关。

MCP-1通过p38和ERK/MAPK途径在人单核细胞中诱导Stat3丝氨酸磷酸化

为了探讨人单核细胞中,人单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)诱导信号转导激活转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)磷酸化以及导致磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路途径在其中的作用,首先采用针对Stat3 705位酪氨酸和727位丝氨酸特异性抗体进行磷酸化时间和剂量的检测,发现MCP-1仅导致Stat3丝氨酸磷酸化并且呈剂量和时间依赖性,而酪氨酸并没有磷酸化.在此基础上,采用不同时间点的方法对MAPK途径成员细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38、JNK进行检测,发现MCP-1在人单核细胞中仅诱导ERK、p38活化并呈时间依赖性,而不能诱导激活JNK途径.为了确证ERK、p38途径在人单核细胞中参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,采用ERK、p38途径活化的小分子抑制化合物不同浓度处理单核细胞,对Stat3丝氨酸磷酸化检测发现,MCP-1通过ERK、p38两条途径参与Stat3丝氨酸磷酸化.这些结果表明,MCP-1在人单核细胞中仅诱导Stat3丝氨酸磷酸化而不是酪氨酸磷酸化;MAPK成员中ERK、p38两条途径均参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,而JNK途径没有活化参与Stat3丝氨酸磷酸化.

蛋白激酶B丝氨酸磷酸化在非乙醇性脂肪肝发病机制中的作用

目的：探讨蛋白激酶B丝氨酸磷酸化在高脂诱导大鼠非乙醇性脂肪肝发病机制中的作用．方法：选Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组(n=20),高脂组(n=20)和高脂+罗格列酮组(n=20)．分别用正常、高脂和高脂+罗格列酮饲料喂养16wk,处死,观察血脂、胰岛素、肝功,肝脏组织学及超微结构的变化,免疫组化法检测丝氨酸磷酸化的蛋白激酶B在肝脏中的表达．结果：高脂组16 wk后,肝细胞中出现大量的脂肪滴,小叶内及汇管区炎性细胞浸润并伴有点片状坏死．超微结构示：细胞器结构消失,线粒体嵴断裂或空泡变．肝指数、甘油三酯、胰岛素抵抗指数、肝脏谷丙转氨酶(ALT)、γ-氨基酰胺转肽酶(GGT)(分别为3．96%±0．32%,2．87±0_3 mmol/L．15．59±1．7,136．7±0．26 nkat/L和1700．3±0．92 nkat/L)较正常对照组(2．31%±0．21%,0．56±0．20 mmol/L,1．79±1．7,125．0±0．14 nkat/L和158．4±0．63 nkat/L)相比明显增加(P＜0．01或P＜0．05)．高脂组肝脏蛋白激酶B蛋白表达量为34．2%,与正常对照组的89．06%相比明显减弱(P＜0．01)．结论：高脂可能通过抑制蛋白激酶B的活性的表达影响胰岛素信号传导而产生胰岛素抵抗进而参与了非乙醇性脂肪肝的形成．

非酒精性脂肪性肝病的胰岛素抵抗与丝氨酸磷酸化

胰岛素抵抗与非酒精性脂肪性肝病的发生发展关系密切,但其发病机制尚未完全明确,可能与胰岛素受体底物的丝氨酸磷酸化有关。通过对引起丝氨酸磷酸化因素的研究,可能有助于找到与胰岛素抵抗相关的治疗靶点。

姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的探讨姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)表达的影响。方法将MGC-803细胞分为空白对照组和四个药物实验组,各组姜黄素浓度分别为5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L。经不同浓度的姜黄素作用24 h、48 h、72 h后,应用CCK8法检测姜黄素对MGC-803细胞增殖的影响;应用Annexin V-FITC/PI双染色法测定不同浓度的姜黄素作用24 h后胃癌MGC-803细胞凋亡情况;应用蛋白免疫印迹法检测不同浓度姜黄素作用24 h对MGC-803细胞内p-AKT蛋白表达水平的影响。结果姜黄素对MGC-803细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。在5~40μmol/L浓度范围内,姜黄素呈浓度依赖性地促进MGC-803细胞的凋亡,并下调MGC-803细胞中p-AKT的水平。结论姜黄素可能是通过抑制p-AKT蛋白的表达和AKT信号通路促进MGC-803细胞凋亡并抑制其增殖。

Tau蛋白丝氨酸磷酸化修饰位点的特征分析与识别

基于信息熵,融合氨基酸的物理化学性质、蛋白质的二级结构和残基的无序信息构建了Tau蛋白丝氨酸磷酸化修饰位点预测的新模型。分别探讨了每种特征对Tau蛋白丝氨酸磷酸化修饰位点的影响,特征分析结果表明,氨基酸的序列模体、卷曲结构和无序区域均有助于识别丝氨酸磷酸化修饰位点。通过10倍交叉验证,丝氨酸磷酸化修饰位点预测的准确率和马氏相关系数分别达到83.7%和65.1%,表明本文构建的模型可用于对Tau蛋白丝氨酸磷酸化修饰位点的有效预测。

在非刺激条件下TRPC6的814位点丝氨酸磷酸化

TRPC（瞬时受体电位阳离子通道）是与钙离子内流有关的非选择性阳离子通道。其通过磷酸化实现对通路和活性的调节。其中，TRPC6在肾脏中主要定位于足细胞上，对足细胞内钙离子浓度的调节发挥重要作用。TRPC6可以由Fyn激酶（Src家族中的一种酪氨酸激酶）磷酸化。实验证实Fyn激酶磷酸化TRPC6后可以使TRPC6活性增加，这一现象可以被TRPC6的Thr^99位的蛋白激酶G和ser^448位的蛋白激酶C抑制。已有研究指出，TRPC6在非刺激条件下的人胚胎肾细胞系（HEK293）中可以发生基本磷酸化，

姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响

目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。结论 GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。

家兔心力衰竭早期心肌受磷蛋白磷酸化程度增加

目的:探讨心力衰竭(心衰)心肌细胞磷酸化受磷蛋白表达异常的临床意义。方法:将20只家兔随机分为两组:假手术组和心衰组,各10只。通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,利用心导管术和心脏多普勒观察手术前后家兔血流动力学及心脏结构和功能的变化。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法测定心肌组织蛋白激酶A(PKA)、总受磷蛋白(T-PLB)和第16位丝氨酸磷酸化受磷蛋白(ser16-P-PLB)表达水平。结果:家兔心衰组与假手术组相比,左室舒张末压明显增加,为(-7±4.6)mmHg对(24.6±6.7)mmHg,左室短轴缩短率[(39.3±5.53)%对(23.8±7.30)%]和左室射血分数[(72.76±4.85)%对(47.8±6.05)%]均明显降低(P<0.01)。心肌组织T-PLB表达无明显差异,PLB磷酸化程度Ser16-P-PLB/T-PLB和PKA表达均增加。结论:心衰早期心肌受磷蛋白磷酸化程度表达增加,与蛋白激酶A表达增加有关。

N-乙酰半胱氨酸对人离体中性白细胞释放超氧阴离子的影响

目的用人离体中性白细胞研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对中性白细胞释放超氧阴离子的影响。方法细胞色素C还原法测定NAC对三种刺激剂介导的中性白细胞释放超氧阴离子量。用抗原抗体法检测丝或苏氨酸磷酸化。结果NAC可呈浓度依赖性抑制N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)和佛波豆蔻醚乙酸盐(PMA)介导的中性白细胞释放超氧阴离子;而对花生四烯酸(AA)介导的中性白细胞释放超氧阴离子无影响。Western blot结果显示NAC可呈浓度依赖性抑制fMLP和PMA介导的丝氨酸或苏氨酸的磷酸化。结论NAC可能通过膜受体通道抑制细胞内的蛋白激酶C及其上游的蛋白质激酶,抑制中性白细胞释放超氧阴离子的产生。

运动对胰岛素抵抗大鼠丝氨酸/酪氨酸磷酸化通路干预效应的研究

目的观察运动对高脂膳食诱导胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌胰岛素受体底物1(IRS 1)丝氨酸^(307)(Ser^(307))磷酸化和酪氨酸(Tyr)磷酸化通路的影响。方法 Wistar大鼠75只,分为正常对照(NC)组、高脂膳食(HF)组。10周后再将HF组分为高脂膳食运动(HFE)组和高脂膳食非运动(HFNE)组。以钳夹技术观察各组大鼠胰岛素敏感性(IS)变化,Western Blot法检测大鼠骨骼肌IRS-1 Ser^(307)磷酸化和Tyr磷酸化水平。结果 (1)10周后HF组葡萄糖输注率(GIR_(60～120))明显低于NC组;与NC组比较,HF组IRS-1 Tyr磷酸化水平降低,IRS-1 Ser^(307)磷酸化水平升高(P均<0.01)。(2)14周后HFE组GIR_(60～120)明显高于HFNE组;与HFNE组比较,HFE组IRS-1 Tyr磷酸化水平升高,IRS-1 Ser^(307)磷酸化水平降低(P均<0.01)。结论运动干预改善IR大鼠IS,其机制可能与改善IRS-1 Ser^(307)/Tyr异常磷酸化有关。

磷酸丝氨酸磷酸化酶在肝细胞癌中的表达及其促进增殖和转移的作用机制

背景与目的:磷酸丝氨酸磷酸化酶(PSPH)在多种肿瘤中表达上调,发挥促进肿瘤生长和转移的作用,但其在肝细胞癌(HCC)中的作用尚未完全清楚。因此,本研究旨在探讨PSPH在HCC中的表达与作用及其作用机制。方法:分别用Western blot和q RT-PCR检测PSPH在HCC组织和癌旁组织中以及不同HCC细胞株(Hep G2、Huh-7、HCCLM3)与正常肝细胞株(HL-7702)中的表达。Hep G2细胞过表达或敲低PSPH后,分别用CCK-8、Ed U染色、Transwell侵袭实验及Western blot法检测PSPH对Hep G2细胞增殖、侵袭以及细胞增殖标记蛋白CCND1和Ki-67表达的变化;同时,用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I、p62以及侵袭相关蛋白MMP-9的表达,用免疫荧光法检测p65蛋白入核情况。结果:与癌旁组织比较,HCC组织中PSPH蛋白的表达明显上调;与正常肝细胞比较,各HCC细胞株中的PSPH基因的表达明显升高(均P<0.05)。过表达PSPH后,Hep G2细胞的增殖和侵袭能力明显增强,CCND1和Ki-67的表达明显上调,LC3-II/LC3-I表达上调而p62表达下调,p65蛋白核转位明显增加,MMP-9表达明显上调(均P<0.05);敲低PSPH后,Hep G2细胞的上述指标均呈相反变化(均P<0.05)。NF-κB通路抑制剂能抑制过表达PSPH对p65入核的促进作用和对MMP-9的上调作用,而NF-κB通路激动剂能逆转敲低shikonin对p65入核的抑制作用和对MMP-9的下调作用(均P<0.05)。结论:TNF-α在HCC中表达上调,PSPH高表达能增强HCC细胞增殖与转移能力,其作用机制可能涉及对自噬的抑制作用以及对NF-κB/MMP-9信号通路的活化作用。

肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1在调节血管张力中的作用的研究进展

肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(Myosin phosphatase target subunit1,MYPT1)可通过其亮氨酸亚型转换和丝氨酸/苏氨酸(Serine/threonine,S/T)可磷酸化位点的磷酸化,调节血管张力。虽然MYPT1调节血管张力的功能研究较多,但针对其具体机制,目前尚不完全清楚。现就肌球蛋白磷酸酶靶向亚基与调节血管张力有关的结构,疾病下该结构与张力调节的关系进行综述,为血管疾病的研究和治疗提供理论基础。

IRS-1、ERK2蛋白表达及其丝氨酸磷酸化程度与PCOS患者胰岛素抵抗的关系

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是育龄期妇女最常见的内分泌疾病，发病率占育龄期妇女的5％-8％，严重威胁女性健康和生命质量，

细胞因子信号转导抑制因子3对糖尿病大鼠胰岛素受体底物1及其丝氨酸磷酸化水平的影响

目的观察糖尿病大鼠肝脏和骨骼肌中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)、胰岛素受体底物1(IRS-1)及丝氨酸磷酸化胰岛素受体底物1(PIRS-1^(Ser307))水平,探讨其在胰岛素抵抗发生中的机制。方法将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(20只)和糖尿病组(20只)。对照组大鼠予以普通饲料喂养,糖尿病组大鼠予以高糖高脂饲料喂养4周后腹腔注射链脲霉素,其中16只大鼠制成2型糖尿病模型。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1 mRNA水平,Western blot法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1、PIRS-1^(Ser307)蛋白水平。应用t检验及Pearson直线相关进行数据分析。结果 1与对照组相比,糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3 mRNA显著升高(P<0.05),IRS-1 mRNA显著降低(P<0.05);糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3和PIRS-1^(Ser307)蛋白显著升高(P<0.05),IRS-1蛋白显著降低(P<0.05);2糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3蛋白与IRS-1蛋白呈负相关(r=-0.865、-0.756,P<0.05),与PIRS-1^(Ser307)蛋白呈正相关(r=0.678、0.663,P<0.05)。结论糖尿病大鼠可能通过上调SOCS-3基因,增加IRS-1丝氨酸磷酸化水平和降低IRS-1表达,诱发胰岛素抵抗。