大豆叶片质膜蛋白激酶的自身磷酸化反应

利用Ferrell和Martin（1991）设计的测定印迹在PVDF膜上的蛋白激酶活性方法研究大豆叶片质膜蛋白激酶自身磷酸化反应活性，结果表明：与Mg－ATP相比，Mn－ATP是更有效的57KD蛋白激酶自身磷酸化反应底物；钙离子可以促进该激酶的自身磷酸化反应活性，而且EGTA可以显著降低它在SDS电泳中的迁移率，说明57KD蛋白激酶为依赖于钙的蛋白激酶；预磷酸化反应实验证明57KD蛋白激酶具有多个自身磷酸化反应位点，其分子的自身磷酸化状态可调性暗示这一激酶可能具有重要的生理功能。

磷酸化反应及其在皮革中的应用

叙述了常见的磷酸化方法有多聚磷酸法、共沸脱水法、五氧化二磷/磷酸法、五氧化二磷的粉状加入和溶剂加入法; 简述了磷酸酯的组成分析方法及其注意的问题;介绍了合成磷酸酯在皮革加脂中的研究现状, 并指出为了更好的提高磷酸酯加脂剂的加脂性能,要从皮革工业对于加脂剂的多功能、绿色化的要求来对磷酸酯的分子进行设计。

磷酸化反应及其在皮革中的应用

综述了在皮革加脂剂中使用的磷酸化试剂种类三氯氧磷、三氯化磷、磷酸、焦磷酸、五氧化二磷、多聚磷酸 (缩合磷酸 )、五氧化二磷 /磷酸及各自的优缺点 ;叙述了常见的磷酸化方法有多聚磷酸法、共沸脱水法、五氧化二磷 /磷酸法、五氧化二磷的粉状加入和溶剂加入法 ;简述了磷酸酯的组成分析方法及其注意的问题 ;介绍了合成磷酸酯在皮革加脂中的研究现状 ,并指出为了更好的提高磷酸酯加脂剂的加脂性能 ,要从皮革工业对于加脂剂的多功能、绿色化的要求来对磷酸酯的分子进行设计。

维生素C对葡萄糖磷酸化反应的影响

糖的酵解过程中，首先要经过一系列磷酸化反应，生成各种磷酸酯。其磷酸化反应的速率和量的变化，是能影响着整个酵解的进程。过去有关学者对糖酵解过程中一些关键性的酶催化机理，对于脱氢氧化反应以及辅酶Ⅰ参与传递氢的作用等，均有深入细致的研究。但是，维生素C作为一种因素，能对糖的磷酸化反应有影响，以及它在糖的脱氢氧化过程中参与传递氢的作用等问题，国内外对这方面的报导较鲜见。本文现就这方面进行初步探讨，对了解维生素C在糖代谢中的作用问题，有重要意义。

在2例患有新格斯样综合征的同胞兄弟身上的先天性肥大心肌症、白内障、线粒性肌病和氧化磷酸化反应缺陷

在文章中,描述了2例患有新格斯样综合征的同胞兄弟,他们的症状有先天肥厚性心肌病、婴儿性白内障、线粒性肌病、乳酸血症,但智力发育正常。使用免疫印迹法检验,在患者的肌肉样本中发现了线粒体腺嘌呤核苷转录体1(ANT1),而没有发现ANT1蛋白。除了这些典型新格斯样综合征(OMIM 212350)的特点外,还发现, 通过生物化学分析测量得到的线粒体氧化磷酸化反应, 在2个兄弟的骨骼肌中都明显减少,而纤维原细胞的生物化学和形态学分析结果都显示正常。在这些患者的肌肉样本中,新发现丙酮酸盐氧化率降低、能量生产不足及多样性线粒体酶复合反应活动显著相关,并且这些发现与先前的新格斯样综合征患者的结果不一样。结论: 建议对患有肌张力减退、心肌病、先天性或婴儿白内障的患者的氧化磷酸化反应体系作一个肌肉活组织检查和生物化学分析。

吗啡依赖大鼠血液淋巴细胞CREB的磷酸化和胞浆内钙的反应性改变

目的 研究吗啡依赖大鼠外周血淋巴细胞内信号传递的改变。方法 大鼠经慢性吗啡处理后突然停药或注射纳洛酮催瘾 ,分离外周血淋巴细胞 ,流式细胞术观察淋巴细胞的磷酸化 c AMP反应元件结合蛋白 ( phos-pho-CREB)免疫阳性反应 ,测定 Fura-2 /AM负载的单个淋巴细胞内胞浆游离钙 ( [Ca2 +]i)。结果 慢性吗啡处理 1 0 d的大鼠和经纳洛酮催瘾的大鼠外周血淋巴细胞的磷酸化 CREB( Ser1 3 3 )免疫阳性反应较对照组明显升高 ,自然戒断即停用吗啡 6 d后磷酸化 CREB免疫阳性反应接近对照水平。慢性吗啡处理还使部分淋巴细胞在纳洛酮刺激下胞浆内游离钙明显下降。结论 吗啡成瘾及戒断反应直接影响大鼠外周血淋巴细胞核内磷酸化CREB免疫阳性反应和胞浆内钙信号的变化。

反应元件结合蛋白磷酸化与海马缺氧缺血再灌注后神经元修复的关系

目的 探讨缺氧缺血再灌注后海马神经元的存活机制。方法 5 6只 7日龄SD鼠随机分为假手术对照组、缺氧缺血脑损伤 (HIBD)组。制备HIBD并再灌注模型。多普勒监测血流变化。免疫组化检测反应元件结合蛋白磷酸化 (p CREB)在HIBD不同再灌注时期海马区的表达。Thionin染色及Turnel法检测神经元的凋亡。结果 HIBD再灌注 3、2 4h仔鼠右侧海马各区p CREB表达达高峰 ,7d后降至对照组水平 ;对照组两侧 p CREB有基础表达 ,但无差别。检测凋亡发现 :右侧海马锥体细胞在HIBD再灌注 2 4h后已有明显凋亡 (P <0 .0 1) ,但 7d后神经元无明显丢失。假手术组海马极少数神经元凋亡。结论 p CREB可能是神经元HIBD后修复。

滋肾益脑方对肾阴虚抑郁模型大鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的：探讨中药复方滋肾益脑方对抑郁大鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响。方法：制备肾阴虚抑郁动物模型后，随机分为空白组，模型组，氟西汀组，滋肾益脑方中、高剂量组，采用免疫组织化学检测p-CREB表达。结果：与空白组比较，抑郁模型大鼠海马内p-CREB表达降低；药物组中以滋肾益脑方高剂量组海马内pCREB表达方面最明显。结论：滋肾益脑方具有抗抑郁、保护神经元的作用。

辣椒素对大鼠脊髓背角中磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察辣椒素对大鼠脊髓背角中磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响,探讨延髓外侧网状核(LRN)对心脏伤害性感受的下行紧张性调控作用。方法将30只雄性Sprauge Dawley大鼠随机分为空白组、溶媒组、辣椒素组、LRN电损毁组和LRN电损毁+辣椒素组,每组6只。空白组大鼠麻醉后不做手术处理,其余各组大鼠均行心包内插管术,LRN电损毁组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠于心包内插管术后行双侧LRN电损毁。各组大鼠心包插管1 h后,回抽心包积液,溶媒组大鼠心包内注射0.2 mL溶媒(含有0.1 mL的吐温80和0.1 mL无水乙醇),辣椒素组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠心包内注射0.2 mL辣椒素(0.01 g·L-1),LRN电损毁组大鼠心包内不注射任何溶液。心包内注射药物的同时,记录大鼠背斜方肌超出基线活动10%的肌电(EMG)反应数目,空白组于维持麻醉1 h后记录EMG反应数目。各组大鼠经心包内注射药物30 min后,灌注固定液并取T3~T5脊髓,采用免疫组织化学染色法检测各组大鼠脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目。结果空白组、溶媒组、LRN电损毁组大鼠背斜方肌无超出基线活动10%的EMG反应。辣椒素组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠背斜方肌EMG反应数目和脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目均显著高于空白组、溶媒组和LRN电损毁组(P<0.05)。LRN电损毁+辣椒素组大鼠背斜方肌EMG反应数目和脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目均显著高于辣椒素组(P<0.05)。结论大鼠心包内注射辣椒素能诱发背斜方肌EMG反应且脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目增加。LRN对大鼠心脏伤害性感受具有下行紧张性抑制作用。

磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白对持续惊厥后海马细胞凋亡调控基因表达的影响

目的观察外源性磷酸环磷腺苷反应元件结合蛋白(p CREB)抗体对惊厥持续状态(SC)后海马细胞凋亡调控基因Bcl-2和c-Jun表达的影响,探讨p CREB在惊厥性脑损伤中的作用及其调控机制。方法成年Wistar鼠48只随机分为正常对照组(NC组,n=24)和惊厥持续状态组(SC组,n=24)。SC组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱发SC模型。两组均根据脑室注射内容分为无注射组、生理盐水注射组(NS组)和抗p CREB注射组(抗p CREB组)3个亚组,每个亚组8只。注射后6 h处死动物。取双侧海马采用免疫组化和原位杂交(ISH)观察Bcl-2蛋白/m RNA、c-Jun蛋白/m RNA的分布,并进行半定量分析。结果 NC组中,3个亚组注射侧Bcl-2蛋白/m RNA表达均无显著性差异(P>0.05),SC组中抗p CREB组低于无注射组和NS组(P<0.05)。NC组和SC组中,3个亚组注射侧c-Jun蛋白/m RNA表达均有非常高度显著性差异(P<0.001),NS组和抗p CREB组c-Jun蛋白/m RNA表达高于无注射组(P<0.05),抗p CREB组高于NS组(P<0.05)。结论 SC后脑室内注射外源性抗p CREB抗体可下调SC后海马Bcl-2蛋白/m RNA表达,上调c-Jun蛋白/m RNA表达。

cAMP反应元件结合蛋白磷酸化参与学习记忆过程的分子机制

磷酸化是细胞信号通路中转录因子活性调控的主要机制。cAMP反应元件结合蛋白（cAMP responsive element binding protein，CREB）是最早证实由磷酸化调控其活性的转录因子之一，在脑内所有细胞中均有表达，定位于核内并在多种信号分子诱导下调控大量下游靶基因的表达。由于在多种细胞及动物模型中证实CREB磷酸化在学习记忆过程中发挥重要的作用，CREB磷酸化成为近年来相关领域的研究热点。

磷酸化羊毛脂加脂剂制备及性能的研究

本文研究以羊毛脂为主要原料，采用五氧化二磷为磷酸化试剂，合成磷酸化羊毛脂加脂剂及提高单酯含量的工艺条件。通过对该产品的物理化学性能的测试与应用试验结果看出。

磷酸化酯交换蓖麻油加脂剂制备及性能的研究

以蓖麻油为主要原料,采用五氧化二磷为磷酸化试剂,合成磷酸化酯交换蓖麻油加脂剂及提高单酯含量的工艺条件。通过对该产品的物理、化学性能测试与应用试验结果看出,该产品是一种具有发展前景的高档加脂新材料。

大豆叶片衰老过程中质膜蛋白激酶自磷酸化状态和催化活性的变化(英文)

以大豆幼苗初生叶为材料研究了衰老过程中质膜蛋白激酶自磷酸化状态和催化活性的变化。结果发现质膜上一个 57kD的蛋白激酶分子上有多个自磷酸化位点 ,而且自磷酸化反应能提高该酶催化组蛋白H1磷酸化的激酶活力。进一步的研究表明诱导衰老处理造成的 57kD蛋白激酶自磷酸化状态的变化 ,可能对调节它在衰老过程中催化活性的变化起重要作用 ;而外源 6 BA预处理则能够维持 57kD蛋白激酶体内高自磷酸化状态 ,保持该激酶在衰老过程中的催化活力。对衰老和 6 BA处理过程中质膜上 39和 47kD蛋白激酶自磷酸化状态变化的研究表明 ,这两种激酶可能参与大豆叶片对 6 BA刺激信号的传导和

天然油脂磷酸化加脂剂的制备及应用研究

用天然油脂与聚乙二醇及P_2O_5经过醇解反应和磷酸化反应制得了磷酸化加脂剂,讨论了影响磷酸化反应的主要因素,用FTIR对产物的结构进行了表征,同时进行了磷酸化加脂剂的应用实验。

磷酸化改性鱼油的合成及其杀菌活性研究

以鱼油为原料,经酯交换、磷酸化反应再中和合成了磷酸化改性鱼油。酯交换反应的工艺条件是65℃反应5h,n(甲醇)∶n(鱼油)=4 5∶1,催化剂用量为鱼油质量的2 0%。该反应与传统工艺相比:改性深度大、催化剂活性高且可再生、酯交换鱼油色泽浅、稳定性好。磷酸化反应的工艺条件是n(-OH)∶n(P2O5)∶n(H2O)=2 4∶1∶1 15,70℃下反应4h,60℃下水解1h。该产品外观为浅红至红棕色透明油状物、流动性好且乳液不分层。以大肠杆菌和金黄葡萄球菌作为测试菌,采用抑菌圈进行杀菌活性实验,测试结果表明:在加脂后成革所要求的pH值范围内,该合成的磷酸化改性鱼油有一定的杀菌性。

酶法与非酶法磷酸化改性食品蛋白质的研究进展

磷酸化是一种重要的蛋白质修饰改性手段,可以有效改善食物蛋白质的功能性质,如乳化性、溶解性、凝胶性、热稳定性等。蛋白质磷酸化改性方法主要可分为酶法与非酶法两种,其中酶法磷酸化常使用蛋白激酶作为磷酸基团的供体,对蛋白质进行修饰。主要的蛋白激酶包括环磷酸腺苷依赖蛋白激酶(CAMPdPK)和酪蛋白激酶Ⅱ(CK-Ⅱ)。非酶法磷酸化常见的改性试剂主要包括三氯氧磷、焦磷酸钠、三聚磷酸钠和葡萄糖-6-磷酸等。本文对近年来蛋白质磷酸化的有关报道进行了总结归纳,并通过介绍磷酸化蛋白的磷酸键性质、磷酸化肽段及位点的鉴定,阐述了不同磷酸化试剂的反应机制及其对蛋白质构效关系的影响,为通过定向的磷酸化修饰而改善蛋白质特定的功能性质提供了理论依据与参考。

磷酸化对鲢小清蛋白抗原性降低的作用

通过建立鱼类主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)磷酸化反应的条件,研究磷酸化对PV的抗原性及结构影响。将PV和葡萄糖-6-磷酸二钠盐(D-glucose-6-phosphate disodium salt hydrate,G6P-Na2)混合,在不同质量比、反应时间以及反应温度条件下进行干法磷酸化反应。采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Dot-blotting检验其聚合类型以及抗原性变化。通过扫描电镜对聚合物的微观结构进行分析,利用圆二色谱仪和ANS探针法分析磷酸化产物的二级结构和疏水性变化。结果显示,在PV与G6P-Na2质量比为1∶4、反应温度80℃、反应时间80 min条件下生成的磷酸化产物的抗原性最低。磷酸化反应后,产物呈现聚集状态,其二级结构变化较为明显,疏水性明显提高。磷酸化反应对蛋白结构的改变可能是影响PV抗原性降低的主要原因。

海马神经元无镁致痫性损伤对CREB磷酸化水平的影响

目的:观察原代培养的海马神经元经无镁人工脑脊液诱发癫痫样放电后,cAMP反应元件结合蛋白(cAMP responseelement binding protein,CREB)磷酸化表达水平的变化。方法:将所培养的神经元随机分成癫痫组和对照组,癫痫组中的神经元培养至第10天时,经无镁人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)处理3 h建立癫痫样放电模型,对照组中的神经元培养至第10天时,使用正常人工脑脊液处理3 h。使用Western blot检测p-CREB和β-actin的表达,免疫荧光双重标记磷酸化CREB(p-CREB)和神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)的表达。结果:Western blot显示p-CREB水平在癫痫样放电后2 h即较对照组增强且在6 h达到高峰,在12 h和24 h都维持在增强水平,差异皆有统计学意义(P<0.01)。取癫痫样放电后6 h的神经元行免疫荧光检测,其荧光强度绝对值较对照组明显增强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p-CREB水平在海马神经元无镁致痫性损伤后增强,可能在癫痫样放电中起到重要作用。