中风活心软胶囊通过PPARγ受体上调STAT3磷酸化激活PI3K/AKT通路抑制脑缺血再灌注损伤内质网应激的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊介导过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)受体上调信号传导转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化诱导磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BAKT serine/threonine kinase,AKT)信号通路参与脑缺血再灌注损伤内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激和神经保护的作用机制研究,阐明中风活心软胶囊对脑缺血后神经损伤修复的调控机制。方法选取30只SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组和治疗组,采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(middle cerebral artery ischemia,MCAI)大鼠模型,采用改良神经功能损伤评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,以mNSS评分2~18分为造模成功。仅治疗组给予中风活心软胶囊。Western blot法分别检测缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白的表达,检测ER应激标记分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及真核翻译起始因子2α激酶3(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)-激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)-C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)通路蛋白表达水平。结果模型组大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元显著减少,提示右侧MCAI大鼠模型构建成功。模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠缺血区PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K及AKT蛋白表达均低于对照组与治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组各指标比较差异无统计学意义。治疗组、模型组大鼠缺血区GRP78、PERK、ATF4和CHOP蛋白表达均高于对照组,但治疗组均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白表达,其作用机制可能是通过介导PPARγ受体上调STAT3磷酸化诱导PI3K/AKT信号通路参与脑缺血再灌注损伤ER应激和神经保护,从而发挥脑保护效应。

增生性瘢痕内应激活化蛋白激酶及其上游信号分子基因表达的变化

目的 探讨增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤中应激活化蛋白激酶 (SAPK)及其上游信号分子MAPKs(MKK4和 MKK7)基因表达的变化。 方法 提取 8例增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤组织的总 RNA后 ,分离纯化 m RNA,用 RT- PCR方法检测 SAPK,MKK4和 MKK7基因在不同组织中的表达变化规律。 结果 增生性瘢痕中 ,MKK7和 SAPK基因表达较弱 ,自身对照皮肤组织中 ,这两种基因 PCR结果的灰度比分别为增生性瘢痕的 1.5倍和 2 .6倍 ,基因表达量明显升高 (P<0 .0 1) ,而 MKK4在这两种不同类型组织中的表达量无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 结论 增生性瘢痕中 MKK7和 SAPK基因表达降低引起细胞凋亡减少 ,可能是瘢痕内成纤维细胞大量增殖 ,增生性瘢痕形成的机制之一。

应激活化蛋白激酶在大鼠缺血后适应中的变化及其对细胞凋亡影响的研究

目的:探讨应激活化蛋白激酶(JNK MAPK)在大鼠缺血后适应中的变化,并进一步分析其对细胞凋亡的影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、缺血再灌注(R/I)、后适应(Post)、JNK抑制剂(I JNK)、JNK激活剂+后适应(Ani+Post)和JNK激活剂(Ani)6组,建立急性心肌梗死再灌注和缺血后适应模型,在再灌注开始前5min经颈静脉注射抑制剂(SP600125,6mg/kg)和激动剂(anisomycin,2mg/kg)。再灌注6h后处死取心肌组织测定磷酸化JNK(P-JNK)、TNFα、Caspase-8、Bcl-2、Bax,并提取胞浆测定其中细胞色素c(Cyt-c);各组其余大鼠再灌注24h后测定血流动力学,抽血测定心肌酶,取心脏进行TUNEL凋亡检测或使用伊文氏蓝-三苯基氯化四氮唑法检测心肌梗死面积。结果:后适应组可显著改善缺血对左室压力最大上升/下降速度、心率血压积的抑制,限制心肌梗死面积,减轻细胞凋亡和坏死,抑制了P-JNK的生成(1.12±0.21 vs 1.90±0.32,P<0.05);同时,伴随TNFα和Caspase-8表达显著减少,Bcl-2的升高和Bax的降低,胞浆Cyt-c(0.33±0.04 vs 1.00±0.11,P<0.05)含量明显减少。I JNK组可以模拟后适应在信号分子的上述变化,从而表现出显著的心肌保护作用[凋亡指数:(6.23±2.43)%vs(18.22±5.10)%,P<0.05;心肌梗死面积:(23.44±6.34)%vs(42.31±8.21)%,P<0.05]。反之,Ani+Post则因为JNK激活剂的应用,部分抵消了后适应的保护效应,在心肌酶、心肌凋亡和梗死面积方面表现出保护作用的减弱[凋亡:(14.12±2.00)%vs(18.22±5.10)%,P>0.05;心肌梗死面积:(35.27±5.28)%vs(42.31±8.21)%,P>0.05]。结论:后适应可以抑制JNK MAPK在再灌注损伤中的磷酸化,并通过P-JNK MAPK的减少抑制TNFα细胞受体途径和Bcl-2/Bax线粒体途径,从而减少细胞凋亡。

一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡

目的研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶(NOS)的表达与应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)及p38MAP激酶(p38MAPK)激活的关系;探讨一氧化氮(NO)诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制。方法采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和SAPK/JNK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达。结果再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12 h达到高峰。1h p-SAPK/JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h。6h活化型Caspase-3开始表达,12 h达到高峰;12 h开始出现TUNEL阳性神经元,24 h达到高峰。结论缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK/JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡。

应激活化蛋白激酶与蛋白激酶p38活性测定

应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）和Ｐ３２是丝裂素活化蛋白激酶家系（ＭＡＰＫｓ）的主要成员。与应激和某些炎性细胞因子引起的细胞反应有关，参与心血管疾病、细胞凋亡与机体的应激反应。本文主要介绍用免疫沉淀法提取ＳＡＰＫ和ｐ３８，据ＳＡＰＫ和ｐ３８分别可以磷酸化ｃＪｕｎ和ＡＴＦ２的原理，采用聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）方法，分别测定ＳＡＰＫ和ｐ３８将３２Ｐ参入其特异性底物的量，反映其活性。

应激活化蛋白激酶介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡作用探讨

目的 了解氯化镉 (CdCl2 )对豚鼠肾上腺皮质细胞应激活化蛋白激酶 (stressactivatedproteinkinase ,SAPK)活性的影响及与凋亡的可能关系。方法 以 0 6 2 5、1 2 5和 2 5 0mg/kgCdCl2 整体腹腔注射染毒雄性豚鼠 ,分别于染毒 1h和 12h处死动物 ,取肾上腺皮质进行SAPK活性测定 (免疫沉淀 -蛋白印迹杂交 -化学发光法 )和电镜观察细胞凋亡。结果 整体染毒 1h ,SAPK活性随CdCl2 染毒剂量的增加呈增加的趋势 ;染毒 12h ,各组SAPK活性变化不明显。电镜观察染毒 1h肾上腺皮质细胞未见凋亡征象 ;但染毒 12h可见早期细胞凋亡。结论 SAPK活化在CdCl2

氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞应激活化蛋白激酶活性及凋亡的影响

目的 观察氧化型低密度脂蛋白 (Ox LDL)对血管平滑肌细胞凋亡及应激活化蛋白激酶 (SAPK)活性的影响。方法 采用 3个时间水平 (2 4、48、72h)、4个剂量水平 (0、 5 0、 10 0、 2 0 0μg/ml)的两因素析因设计观察Ox LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMCs)凋亡影响的时间、剂量效应关系 ;Ox LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞SAPK活性影响。结果 Ox LDL诱导VSMCs凋亡随时间和剂量升高而不断增加 ,呈现一定的时间、剂量效应关系 (P <0 0 1) ;Ox LDL可引起各血管平滑肌细胞SAPK活性升高。结论 Ox LDL诱导血管平滑肌细胞凋亡与其作用浓度、时间相关 ;SAPK信号通路可能在Ox

不同胎龄胎儿皮肤内应激活化蛋白激酶基因的表达及其变化

目的:探讨应激活化蛋白激酶1,应激活化蛋白激酶2,应激活化蛋白激酶3及其上游信号分子(分子丝裂素活化蛋白激酶激酶4和分子丝裂素活化蛋白激酶激酶7)基因在不同胎龄的胎儿皮肤和出生后机体皮肤组织中的表达及其变化特征。方法:实验于2004-01/05在解放军军事医学科学院放射医学研究所毒理研究室完成。用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体(4～16岁)皮肤组织的总RNA,分离mRNA,用反转录-多聚酶链反应方法检测这5种基因在不同组织中的表达变化规律。结果:在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,应激活化蛋白激酶2,应激活化蛋白激酶3,分子丝裂素活化蛋白激酶激酶4和分子丝裂素活化蛋白激酶激酶7基因表达较弱,分别为0.277±0.084,0.077±0.020,0.004±0.005,0.060±0.012,随着胎龄的增加,皮肤组织内这4种基因表达水平逐渐升高,分别为0.383±0.072,0.168±0.078,0.046±0.005,0.105±0.052,在出生后机体皮肤中,这4种基因的转录含量升至最高,分别为0.571±0.061,0.220±0.054,0.081±0.007,0.103±0.027,分别是早期胚胎皮肤的2.1,2.9,20.1和1.7倍(P<0.01)。应激活化蛋白激酶1基因表达水平在中期妊娠胎儿皮肤组织中升至最大为0.307±0.028,然后随着胎龄的增加,该基因表达量逐渐降低,在出生后机体皮肤内该基因表达量是0.111±0.002,与早期妊娠胎儿皮肤相比基因表达水平显著降低(P<0.05)。结论:在早期胚胎皮肤组织中,应激活化蛋白激酶2,应激活化蛋白激酶3,分子丝裂素活化蛋白激酶激酶4和分子丝裂素活化蛋白激酶激酶7基因的低表达可能与皮肤细胞快速增殖、创面迅速愈合、细胞趋向凋亡减少相关。

氟西汀对抑郁大鼠行为及海马组织内应激活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨氟西汀对抑郁大鼠行为学表现及海马组织内丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)及Jun氨基末端激酶(JNK)通路蛋白表达的影响。方法40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组,每组10只。正常组大鼠不给予任何刺激;抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠给予8周慢性不可预见性应激(CUMS),于CUMS第5~8周,氟西汀组大鼠给予氟西汀(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,生理盐水组大鼠给予生理盐水(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃;正常组和抑郁症组大鼠不给予任何干预措施。分别于CUMS前(造模前),CUMS 4周后(造模后)、8周后(干预后)评估4组大鼠行为学变化,最后一次行为学评估后处死大鼠,并取海马组织,采用Western blot法检测海马组织内MKP-1、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平,并计算p-JNK/JNK比值。结果造模前各组大鼠体质量、蔗糖偏好指数、强迫游泳不动时间及旷场实验结果比较差异均无统计学意义(P>0.05)。正常组大鼠造模前后各行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);与造模前比较,造模后抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。与正常组比较,造模后抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。造模后,抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠各种行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,干预后生理盐水组及抑郁症组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。干预后,氟西汀组与正常组大鼠各项行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05),生理盐水组与抑郁症组大鼠各项行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与生理盐水组和抑郁症组比较,氟西汀组大鼠体质量增加,蔗糖偏好指数上升,强迫游泳不动时间减少,水平运动距离和直立次数增加(P<0.05)。抑郁症组和生理盐水组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量高于正常组(P<0.05),氟西汀组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量低于抑郁症组和生理盐水组(P<0.05),氟西汀组与正常组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组大鼠海马组织内p-JNK、JNK蛋白表达量及p-JNK/JNK比值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MKP-1改变可能是抑郁症发病的一个重要基因,其影响抑郁症发病的机制可能不是通过JNK信号通路。氟西汀可能通过下调MKP-1表达水平而改善大鼠抑郁状态。

硫氯双酚通过应激活化蛋白激酶通路诱导人胶质瘤细胞凋亡

目的探讨抗寄生虫药物硫氯双酚对人胶质瘤细胞U251的作用及其机制。方法应用CCK8法、流式细胞仪和Western blotting观察不同浓度硫氯双酚对人胶质瘤细胞U251的存活率、细胞凋亡、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terninal kinase,JNK)及其磷酸化水平变化,以及JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK活性对硫氯双酚诱导细胞凋亡的影响。结果与对照组相比,硫氯双酚作用U251细胞24 h后,U251细胞存活率明显降低(P<0.05),死亡率明显升高(P<0.05),且有剂量依赖性;凋亡相关Capspase3、DNA修复酶PARP(paly ADP-ribose polymerase,PARP)表达和JNK和其化水平均显著升高(P<0.05);SP600125抑制JNK活性可显著阻断硫氯双酚诱导的细胞凋亡。结论硫氯双酚可诱导人胶质瘤细胞U251凋亡,其机制可能与激活JNK信号通路有关。

应激活化蛋白激酶参与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和调节病毒诱导细胞因子的产生

本研究验证了PRRSV感染时，在永生化猪肺泡巨噬细胞（PAM）中p38MAPK和JNK路径的作用。感染PRRSV后36小时内逐渐地激活p38和JNK1／2，感染后48小时它们的磷酸化水平显著下降到原点。相比之下，紫外线灭活的PRRSV不能刺激这些SAPKs的磷酸化，

内质网应激相关分子CHOP和磷酸化JNK在高血压全脑缺血大鼠海马区的表达

目的观察常态大鼠和自发性高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和磷酸化JNK的表达变化,探讨其在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的可能意义。方法取60只Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为假手术组(SO)和全脑缺血再灌注组(I/R);另取30只雄性自发性高血压大鼠作为高血压全脑缺血再灌注组(SHR+I/R)。应用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型。各组分别在术后6,24,48 h,应用苏木伊红染色观察海马区神经细胞形态变化;应用免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区CHOP和磷酸化JNK阳性细胞数量及表达。结果与SO组比较,I/R组各时间点存活神经元密度降低(P<0.05);CHOP和磷酸化JNK表达增高(P<0.05),24 h达高峰;与I/R组比较,SHR+IR组各时间点海马区神经元细胞存活密度显著降低(P<0.05),6,24 h CHOP蛋白表达增高(P<0.05),48 h下降(P<0.05);各时间点磷酸化JNK蛋白表达增高(P<0.05)。结论高血压大鼠全脑缺血后神经细胞丢失严重,其机制与CHOP和磷酸化JNK表达增加有关。

MAPKs通路磷酸化激活在扩张型心肌病患者心肌纤维化中的临床意义

目的检测扩张型心肌病(DCM)患者心肌组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的磷酸化水平,探讨其在DCM患者心肌纤维化中的临床意义。方法收集6例接受心脏移植手术的DCM患者的受体心脏(DCM组),另选取6例移植失败的供体心脏作为对照组。移植手术中收集心室肌组织,分别行病理切片染色观察心肌组织病理变化;Western Blot检测两组心室肌组织中MAPKs信号通路分子的总蛋白及磷酸化水平;Western Blot检测两组心室肌组织中MAPKs信号通路下游分子早期生长反应因子(EGR-1)的表达水平。结果HE染色可见DCM组心室肌组织内心肌细胞体积增大、细胞排列紊乱;PSR染色可见DCM患者心肌组织中大量红色胶原纤维沉积且胶原容积分数显著升高;DCM组心肌组织中MAPKs信号通路MEK1/2、ERK1/2、JNK1/2、P38的磷酸化水平显著升高,且下游分子EGR-1的表达水平也显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论MAPKs信号通路分子的磷酸化水平和下游分子EGR-1的表达在DCM患者心肌组织中显著升高,提示MAPKs磷酸化激活与DCM患者心肌纤维化的发生发展密切相关,抑制MAPKs信号通路激活可能会有效改善DCM患者的心肌纤维化。

促分裂原活化的蛋白激酶信号通路与能量代谢的关系

能量代谢每时每刻都伴随着物质代谢在生命体内发生。生物通过利用物质代谢产生的高能磷酸化合物以维持各项生命功能的运转,不同状态下的细胞通过利用各种物质通过不同的通路进行不同的代谢方式。促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路作为生命体里广泛存在的一类信号蛋白,影响着细胞、生物体的生命活动。MAPK通路在能量代谢的各个环节起着非常重要的作用。通过研究MAPK通路中的胞外信号调节激酶(ERK)通路、Jun激酶(JNK)通路、P38通路均与能量代谢有关的蛋白、靶点、关键酶、转运体,与三大营养物质能量代谢相结合,从而为能量代谢相关的细胞功能进一步研究铺垫,并为今后治疗肿瘤性疾病、感染性疾病、代谢性疾病等提供新思路。

工频磁场对应激活化蛋白激酶及上游激酶磷酸化和活力的影响

目的 研究 5 0Hz工频磁场对细胞内应激活化蛋白激酶 (stress activatedproteinkinase,SAPK/JNK)信号转导途径的影响 ,探索工频磁场生物效应相关的细胞信息转导机制。方法 细胞分别经 0 .4、0 .8mT的工频磁场进行不同时间辐照后 ,利用Western印迹方法 ,比较辐照后细胞与对照细胞胞浆中SAPK及SAPK激酶 (SAPK/ERKkinase 1,SEK1/MKK4 )磷酸化程度。随后以固相激酶分析法(solid phasekinaseassay) ,对经 2个强度分别辐照 15min后的细胞SAPK活力进行测定。结果 0 .4及0 .8mT工频磁场辐照处理可呈时相性增强SAPK磷酸化 ,并且均在 15min时达到最大值 ,SAPK磷酸化分别提高 2 0 %和 17% ;同时SAPK激酶活力也相应增强 ,分别是对照的 (2 .9± 0 .4 )和 (2 .1± 0 .9)倍。然而 ,0 .8mT诱导SAPK磷酸化的时程长于 0 .4mT ,而脱磷酸化的时程短于 0 .4mT。SAPK上游激酶SEK1/MKK4的磷酸化不受工频磁场的影响。结论 工频磁场可以激活SAPK ,但其激活并非通过SEK1/MKK4激酶途径 ;

电磁噪声抑制工频磁场诱导的应激活化蛋白激酶磷酸化

目的 研究电磁噪声对 5 0Hz工频磁场诱导细胞内应激活化蛋白激酶 (stress activatedproteinkinase ,SAPK)磷酸化的影响 ,探索电磁噪声对极低频磁场生物效应可能存在的干预作用。方法 中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)分别经 0 .4mT工频磁场、等强度的电磁噪声、工频磁场与噪声的复合磁场辐照及假辐照处理 3min和 15min后 ,裂解细胞 ,提取细胞蛋白质 ,以Western印迹技术测定并比较细胞内SAPK磷酸化 (活化 )的变化。结果 0 .4mT的工频磁场可诱导细胞内SAPK的磷酸化。经 3min及 15min辐照后 ,磷酸化SAPK含量分别增至 4 9.3%及 5 7.0 % ,与假辐照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而相同强度的电磁噪声不能增强SAPK的磷酸化 ,磷酸化SAPK分别为 37.7%及31.8% ,与假辐照组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。复合磁场辐照 3min后 ,可明显抑制工频磁场对SAPK磷酸化的增强作用 ,磷酸化SAPK含量下降至 2 4 .4 % ,与辐照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;辐照 15min后也可降低工频磁场对SAPK磷酸化的诱导作用 ,磷酸化SAPK含量下降至 39.0 % ,与工频磁场组和假辐照组相比 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 一定强度的电磁噪声可以抑制工频磁场诱导SAPK磷酸化 。

细胞外信号调节激酶及应激活化蛋白激酶通路蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达

目的通过比较瘢痕疙瘩及正常皮肤中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、应激活化蛋白激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)信号通路的表达,探讨其在瘢痕疙瘩形成中的作用。方法取四川大学华西医院烧伤整形科收治的26例患者皮肤组织,其中行瘢痕疙瘩切除患者(实验组)16例,瘢痕疙瘩形成时间8个月～10年;胸部6例,耳垂4例,会阴部2例,肩部3例,腹部1例;均经病理检查确诊为瘢痕疙瘩。10例整形手术患者自愿捐赠的正常皮肤作为对照组,腹部4例,大腿3例,肩部2例,背部1例。取标本采用Envision二步法行免疫组织化学染色,观察磷酸化及非磷酸化JNK和ERK表达情况,并采用Image Pro Plus 4.5图像分析系统测定积分吸光度(IA)值,观察阳性染色强度。结果免疫组织化学染色观察显示,对照组正常皮肤成纤维细胞中未见明显的磷酸化及非磷酸化ERK、JNK阳性表达;而实验组主要在成纤维细胞中表达,阳性颗粒主要位于细胞质和细胞核内。实验组磷酸化ERK及JNK的IA值明显高于对照组(P<0.05),非磷酸化ERK及JNK两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论磷酸化JNK、ERK信号通路蛋白在瘢痕疙瘩中异常高表达,提示该通路可能与瘢痕疙瘩形成密切相关。

有丝分裂原和应激活化蛋白激酶1在中枢神经系统炎性反应中的表达及其意义

目的 探讨有丝分裂原和应激活化蛋白激酶1（MSK1）在中枢神经系统炎性反应过程中的表达及其意义.方法 将90只SD大鼠分实验组（35只）、假手术组（35只）及对照组（20只）.实验组以脂多糖（LPS）侧脑室注射建立中枢神经系统炎症模型,假手术组以生理盐水注入侧脑室建立模型,模型建立后观察时间点设置为0、3、6、12h、1、3、5d,采集标本.分别采用Western blot、免疫荧光双染等方法观察脑损伤及炎性反应过程中,MSK1及磷酸化MSK1（p-MSK1）蛋白表达的时空变化和细胞定位及其与炎症相关因子诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的相关性.结果 在炎性受损的大脑皮层中,p-MSK1主要表达在星形胶质细胞及神经元中;0、3、6、12h、1、3、5d时段采集标本进行Western blot检测,p-MSK1（Set360位点）相对表达量分别为0.746 ±0.075、0.988±0.101、1.126±0.097、1.096±-0.103、1.168±0.095、0.757±0.082、0.726±0.090,p-MSK1（Thr581位点）相对表达量分别值为0.298±0.034、0.441 ±0.052、0.679±0.075、0.831±0.107、0.888±0.103、0.426±0.051、0.419±0.057;6～ 24 h与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,MSK1的磷酸化主要位于苏氨酸581号位的磷酸化位点.1d时行免疫荧光染色量化分析,MSK1及p-MSK1在大脑皮层中表达与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.此外,在LPS刺激1d后的大脑皮层中,iNOS、TNF-α及GFAP等表达均显著增加,1、3、6、9、12h、1、3d时段采集标本进行Western blot检测,iNOS相对表达量分别为0.463±0.056、0.925±0.095、0.889±0.101、1.224±0.121、1.375 ±0.119、1.095 ±0.106、0.862±0.105;TNF-α相对表达量分别为0.501±0.053、0.425±0.041、0.670±0.082、0.995±0.110、1.007±0.108、0.845±0.093、0.817 ±0.095;GFAP相对表达量分别为0.385±0.037、0.403 ±0.061、0.695±0.084、0.791±0.075、1.092±0.107、1.195±0.108、1.092±0.107;与p-MSK1表达有相关.免疫荧光双标法结果表明,LPS侧脑室注射1d后,皮层中p-MSK1表达阳性的星形胶质细胞与TNF-α有共定位.结论 MSK1磷酸化与中枢神经系统炎性反应密切相关,可通过调控其表达,抑制星形胶质细胞炎性因子的产生,发挥中枢神经系统炎性反应的调节作用,减轻中枢神经系统进一步损伤.

应激活化蛋白激酶信号通路在继发性脑损伤中的作用

近年研究发现细胞外信号转导入细胞内主要是通过细胞内蛋白激酶级联磷酸化实现的 ,丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen -activatedproteinkinase ,MAPK)级联反应是转导细胞外信号进入细胞内使细胞产生反应的主要信号系统之一。研究结果提示生理性信号与病理性应激信号可能由不同的信号通路转导。应激活化蛋白激酶(SAPK)